生物配體模型(BLM)對(duì)于評(píng)價(jià)金屬聯(lián)合毒性的適用性研究.pdf

1、在受污染的環(huán)境中,金屬通常是相互混合并且相互作用的。然而,目前對(duì)污染物的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)通常還是以單一污染物的效應(yīng)評(píng)價(jià)為基礎(chǔ)的。近年來(lái),生物配體模型(Biotic Ligand Model,BLM)由于其在金屬水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)制定以及生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)中的應(yīng)用而日益受到重視。BLM的方法具備應(yīng)用于混合金屬風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)的能力,但其無(wú)法被簡(jiǎn)單直接的應(yīng)用于金屬混合物效應(yīng)的評(píng)價(jià),而且目前仍不清楚模型的一些簡(jiǎn)單假設(shè)能否滿(mǎn)足混合金屬?gòu)?fù)雜的相互作用。因此,應(yīng)當(dāng)謹(jǐn)慎地將BLM的

2、方法應(yīng)用于金屬相互作用的模擬。本文簡(jiǎn)要的介紹了BLM的發(fā)展以及理論基礎(chǔ),在對(duì)模型的優(yōu)勢(shì)和應(yīng)用中存在的問(wèn)題進(jìn)行分析的基礎(chǔ)上,對(duì)模型的應(yīng)用范圍進(jìn)行了探索性的研究。首先,以天津地區(qū)的一系列景觀(guān)水體與實(shí)驗(yàn)室配制的模擬溶液為例,對(duì)已開(kāi)發(fā)的應(yīng)用于大型溞(Daphnia magna)的急性Zn-BLM的預(yù)測(cè)能力進(jìn)行評(píng)價(jià)。其次,嘗試將BLM的方法應(yīng)用于斑馬魚(yú)胚胎毒性的預(yù)測(cè),以探討將模型推廣到其他生物(或其他發(fā)育階段)的適用性。為探明Ca2+濃度增加是否

3、會(huì)使魚(yú)類(lèi)早期發(fā)育階段對(duì)鉛毒性的敏感性升高,以及Ca2+單獨(dú)減弱鉛毒性的濃度范圍,選用斑馬魚(yú)胚胎作為實(shí)驗(yàn)材料,記錄在不同的水化學(xué)參數(shù)條件下,胚胎發(fā)育過(guò)程中一些具有代表性的毒理學(xué)終點(diǎn),采用相對(duì)易于觀(guān)察且敏感的指標(biāo)--72 h孵化率進(jìn)行分析。論文重點(diǎn)探討了量化微量營(yíng)養(yǎng)元素銅(Cu)與非必需金屬鉛(Pb)積累的相互作用,以驗(yàn)證BLM的一些基本假設(shè)。在人工配置的已知離子濃度的實(shí)驗(yàn)溶液中,采用野生型淡水單細(xì)胞綠藻Chlamvdomonas rein

4、hardtii做短時(shí)積累實(shí)驗(yàn),暴露濃度范圍是5×10-8至5×10-6M,同時(shí)測(cè)定Pb和Cu單獨(dú)存在時(shí)的內(nèi)化通量,以使用常數(shù)的倒數(shù)來(lái)確定Michaelis-Menten穩(wěn)定常數(shù)。在此基礎(chǔ)上,論述BLM是否具有預(yù)測(cè)另一種生物效應(yīng)--基因表達(dá)的潛力。研究不同Cu和Pb的濃度下,綠藻生物積累和與金屬效應(yīng)相關(guān)的基因表達(dá)的變化。著重研究以下幾個(gè)基因,編碼:自然抵抗聯(lián)合巨噬細(xì)胞蛋白(natural resistance associated mac

5、rophage protein,nramp1),銅傳輸位點(diǎn)(copper transporter,ctr2),氧化壓力效應(yīng)基因--谷胱甘肽過(guò)氧(化)物酶(glutathione peroxidase,gpx5),以及谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(glutathioneS-transferase,gsts2)。研究采用Visual MINTEQ version2.5.2進(jìn)行BLM的相關(guān)計(jì)算以及金屬與溶液中離子的化學(xué)形態(tài)分析。本文的研究結(jié)果可以用來(lái)擴(kuò)展B

6、LM對(duì)于金屬混合物的預(yù)測(cè)能力,從而提高該模型預(yù)測(cè)金屬混合物毒性的能力。
　　 論文研究結(jié)果表明:
　　 (1)在測(cè)試的水化學(xué)參數(shù)范圍內(nèi),認(rèn)為以鋅對(duì)大型蚤的急性毒性數(shù)據(jù)建立起來(lái)的模型是一種有用的工具,能夠在鋅的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)中考慮生物有效性的問(wèn)題,對(duì)所有水體(包括不同稀釋倍數(shù)的水樣)的預(yù)測(cè)結(jié)果與測(cè)試結(jié)果近似,80％的實(shí)測(cè)值在預(yù)測(cè)值67％～150％范圍內(nèi)。但以魚(yú)類(lèi)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的,通過(guò)下調(diào)LA50被應(yīng)用于水蚤的急性Zn-BLM的預(yù)

7、測(cè)值普遍高于實(shí)測(cè)值,其實(shí)測(cè)值為預(yù)測(cè)值的約2至4倍。通過(guò)調(diào)整LA50拓展模型適用性的方法過(guò)于簡(jiǎn)單,正受到質(zhì)疑。
　　 (2)當(dāng)Ca2+濃度從0.25 mmol/L增加到2.00 mmol/L時(shí),導(dǎo)致了以自由鉛離子活度({Pb2+})和溶解態(tài)鉛總濃度([Pb]T)表示的72-h EC50的增加(表現(xiàn)為發(fā)育延遲),兩者之間存在良好的線(xiàn)性關(guān)系。通過(guò)這一線(xiàn)性關(guān)系,可以對(duì)Ca2+濃度對(duì)鉛毒性的影響進(jìn)行預(yù)測(cè)。這一結(jié)果支持了生物配體模型(BLM

8、)概念的假設(shè),說(shuō)明在胚胎的表面,鉛離子與鈣離子可能在傳輸和毒性作用位點(diǎn)上存在競(jìng)爭(zhēng)作用。而當(dāng)Ca2+濃度從2.00 mmol/L增加到4.00 mmol/L時(shí),72-h EC50{Pb2+}和72-h EC50[Pb]T并沒(méi)有顯著的增加。
　　 (3)Cu的穩(wěn)定常數(shù)為105.8M-1,與Pb的常數(shù)(105.9M-1)相似。然而,競(jìng)爭(zhēng)實(shí)驗(yàn)沒(méi)有表現(xiàn)出直接的拮抗作用,這與BLM的預(yù)測(cè)不符。當(dāng)Pb存在時(shí),在高濃度條件下,Cu的積累會(huì)由于P

9、b的影響而降低,但當(dāng)Cu的濃度低于10-7M時(shí),Cu的積累不受Pb的影響。在高濃度的Cu(>1μM)條件下,Cu表現(xiàn)出競(jìng)爭(zhēng)抑制；而在低Cu條件下,Cu對(duì)Pb的積累有協(xié)同效應(yīng),這種協(xié)同效應(yīng)無(wú)法用BLM的觀(guān)點(diǎn)解釋。為了解釋這一效應(yīng),進(jìn)一步進(jìn)行了細(xì)胞活動(dòng)能力試驗(yàn),膜滲透性試驗(yàn)以及基因表達(dá)試驗(yàn)。在Pb存在的條件下,ctr2(一段編碼Cu傳輸位點(diǎn)的基因)的表達(dá)增加,表明生物積累是一個(gè)比模型假設(shè)更加復(fù)雜的動(dòng)態(tài)過(guò)程。
　　 (4)不同基因會(huì)產(chǎn)

10、生不同的相互作用,表明每種基因都可能會(huì)產(chǎn)生其特異的細(xì)胞內(nèi)的反饋與調(diào)節(jié),這也會(huì)與不同的金屬有關(guān)。這與穩(wěn)定狀態(tài)模型的一個(gè)假設(shè)不符:在敏感位點(diǎn)上不會(huì)引起顯著的生物調(diào)節(jié)。即使在短時(shí)間的暴露實(shí)驗(yàn)中,仍然難以滿(mǎn)足該假設(shè)。不同金屬傳輸位點(diǎn)所出現(xiàn)的效應(yīng)不同(ctr2和nramp1),表明傳輸分子發(fā)生了調(diào)解與改變。而且,BLM的假設(shè)認(rèn)為金屬的生物效應(yīng)是由于金屬富集在生物配體上所產(chǎn)生的,是金屬積累的函數(shù)。雖然金屬必須先積累在生物體中才能產(chǎn)生生物效應(yīng),但如僅