細菌培養(yǎng)技術(shù)

1、第二節(jié)細菌培養(yǎng)細菌培養(yǎng)檢測技術(shù)節(jié)概述細菌的培養(yǎng)技術(shù)是微生物實驗中基本技術(shù)之一。大多數(shù)細菌均可用人工方法培養(yǎng)，只有將細菌培養(yǎng)出來才能對它進行研究和鑒定知識點導航一.培養(yǎng)基的種類培養(yǎng)基（culturemedium）是細菌生長繁殖所需要的各種營養(yǎng)物質(zhì)的人工制品。適宜的培養(yǎng)基能使細菌在體外迅速生長繁殖，便于對細菌進行分離和鑒別。可分為基礎培養(yǎng)基、營養(yǎng)培養(yǎng)基、選擇培養(yǎng)基、鑒別培養(yǎng)基、厭氧菌用培養(yǎng)基和特殊培養(yǎng)基。（一）基礎培養(yǎng)基只含有細菌生長所需的

2、最基本營養(yǎng)成分，應用最廣泛，為制備多種培養(yǎng)基的基礎，常見的有肉湯培養(yǎng)基、瓊脂培養(yǎng)基。（二）營養(yǎng)培養(yǎng)基在基礎培養(yǎng)基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有機物，可供營養(yǎng)要求較高的細菌生長需要或增菌用。如結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)基中添加雞蛋、馬鈴薯、甘油等。（三）選擇培養(yǎng)基利用不同種類細菌對化學物質(zhì)的敏感性不同而制成，使分離菌大量繁殖而抑制其它細菌生長的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中含有的抑制劑能抑制非目的菌生長或使其生長不佳，有利于目的菌的檢出和識別。選擇

3、培養(yǎng)基多為固體平板，用于從標本中分離某些特定的細菌。（四）鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基中加有某些特定成分，如糖、醇類和指示劑等，用于檢查細菌的各種生化反應，以資鑒別和鑒定細菌。（五）厭氧菌用培養(yǎng)基專性厭氧菌須在無氧條件下才能生長，故需在培養(yǎng)基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸鈉等還原劑，降低培養(yǎng)基中氧化還原電勢，并應與外界空氣隔絕，使培養(yǎng)基本身為無氧的環(huán)境。（六）特殊培養(yǎng)基為某些需要在特殊條件下才能生長的細菌培養(yǎng)細菌培養(yǎng)之用。如高滲鹽增菌培養(yǎng)基、高滲糖增菌培

4、養(yǎng)基、改良Kagan氏培養(yǎng)基等。二.培養(yǎng)基的制備制備一般培養(yǎng)基的主要過程基本相似，包括調(diào)配、溶化、調(diào)整pH、過濾、分裝、滅菌及級過濾，從出風面吹出的潔凈氣流，以一定的和均勻的斷面風速通過工作區(qū)時，將塵埃顆粒和微生物顆粒帶走，從而形成無塵無菌的工作環(huán)境。使用時應提前50分鐘打開紫外線殺菌燈，30分鐘后關(guān)閉并啟動送風機。凈化區(qū)內(nèi)嚴禁存放不必要的物件，以保持潔凈氣流型不受干擾。（三）無菌室無菌室又稱潔凈室（cleanroom），是在實驗室內(nèi)部

5、安裝的用于無菌操作的小室。室內(nèi)應有空氣過濾裝置、紫外線殺菌燈等。（四）生物安全柜（biologicalsafetycabi，BSC）目前微生物試驗中多采用生物安全柜，是為操作原代培養(yǎng)物、菌（毒）株以及診斷性標本等具有感染性的實驗材料時，用來保護操作者本人、實驗室環(huán)境以及實驗材料，使其避免暴露于上述操作過程中可能產(chǎn)生的感染性氣溶膠和濺出物而設計的負壓過濾排風柜。（五）生物安全實驗室（BiosafetyLabaty），簡稱“BSL實驗室”，

6、是指通過規(guī)范的實驗設計、實驗設備的配置、個人防護裝備的使用等建造的實驗室。在結(jié)構(gòu)上由一級防護屏障（安全設備）和二級防護屏障（設施）構(gòu)成，實驗室生物安全防護的安全設備和設施的不同組合，構(gòu)成了四級生物安全防護水平，一級為最低。六、接種法根據(jù)待檢標本的性質(zhì)，培養(yǎng)目的及所用培養(yǎng)基的種類，采用不同的接種方法。常用的有平板劃線分離培養(yǎng)法、斜面接種法、液體接種法和穿刺接種法。（一）平板劃線分離培養(yǎng)法分離培養(yǎng)法就是通過劃線使標本或培養(yǎng)物中混雜的多種細菌

7、在培養(yǎng)基表面逐一分散生長，各自形成菌落，以便根據(jù)菌落形態(tài)及特征，挑選單個菌落，經(jīng)過移種而獲得純種細菌（純培養(yǎng)）。分離細菌最常用的為平板劃線分離法。1將接種環(huán)火焰滅菌，待冷卻后取標本或混合菌液。2用左手持起平板，使平皿蓋向上放于臺面上或打開平皿蓋。3左手斜持（45℃角）平板，右手持已取材的接種環(huán)，在酒精燈上方5～6cm處作連續(xù)劃線法分離細菌。劃線時，接種環(huán)與平板呈30～40角，輕輕接觸平板，以腕力平行滑動接種環(huán)。應避免將瓊脂劃破。先在平板