mtt實驗

1、【整理總結(jié)整理總結(jié)】關(guān)于關(guān)于MTTMTT實驗總結(jié)－－心血?。嶒灴偨Y(jié)－－心血??！MTT分析法以活細胞代謝物還原劑3(45)dimethylthiahiazo(zy1)35diphenytetrazoliumroeMTT噻唑藍為基礎(chǔ)。MTT為黃色化合物，是一種接受氫離子的染料，可作用于活細胞線粒體中的呼吸鏈，在琥珀酸脫氫酶和細胞色素C的作用下tetrazolium環(huán)開裂，生成藍色的fmazan結(jié)晶，fmazan結(jié)晶的生成量僅與活細胞數(shù)目成

2、正比（死細胞中琥珀酸脫氫酶消失，不能將MTT還原）。還原生成的fmazan結(jié)晶可在含50%的NN二甲基甲酰胺和20%的十二甲基磺酸鈉（pH4.7）的MTT溶解液中溶解，利用酶標儀測定490nm處的光密度OD值，以反映出活細胞數(shù)目。也可以用DMSO來溶解。MTT粉末和溶液保存時都需要避光，用鋁箔紙包好就可以。實驗的時候我一般關(guān)閉超凈臺上的日光燈來避光，覺得這樣比較好。MTTMTT步驟如下：步驟如下：1：接種細胞：用含10％胎小牛血清得培養(yǎng)

3、液配成單個細胞懸液，以每孔1000－10000個細胞接種到96孔板，每孔體積200ul.2:培養(yǎng)細胞：同一般培養(yǎng)條件，培養(yǎng)3－5天（可根據(jù)試驗?zāi)康暮鸵鬀Q定培養(yǎng)時間）。3：呈色：培養(yǎng)3－5天后，每孔加MTT溶液（5mgml用PBS配)20ul.繼續(xù)孵育4小時，終止培養(yǎng)，小心吸棄孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，對于懸浮Pn=0.06P=0.950.800.650.430.210.06=3.1Xm=lg0.1=1lgI=lg0.10.01=1lgIC50=

4、11(3.1(30.950.06)4)=3.6025IC50=0.00025有一個公式可供參考lgIC50=XmI(P(3PmPn)4)Xm:lg最大劑量I:lg(最大劑量相臨劑量)P:陽性反應(yīng)率之和Pm:最大陽性反應(yīng)率Pn:最小陽性反應(yīng)率抑制率=1加藥組OD值對照組OD值公式中的最大最小陽性反應(yīng)率就是最大最小抑制率例：例：用96孔板培養(yǎng)SMMC7721肝癌做MTT測細胞活力應(yīng)該加多少1640培養(yǎng)基多少MTT和DMSO合適根據(jù)書上說的加