植物顯微技術(shù)

1、植物顯微技術(shù)名詞解釋細(xì)胞周期細(xì)胞周期：是處于母細(xì)胞分裂后形成的細(xì)胞到下一次再分裂形成兩個子細(xì)胞之間的時期。分帶技術(shù)分帶技術(shù)：可以顯示染色體內(nèi)部結(jié)構(gòu)分化的技術(shù)。核型核型：體細(xì)胞染色體在光學(xué)顯微鏡下所有可測定的表型特征的總稱?；毂扼w混倍體：不同個體和不同細(xì)胞的染色體數(shù)目變異幅度較大，出現(xiàn)整倍和非整倍細(xì)胞的一系列變異，此為混倍體。B－染色體－染色體：細(xì)胞中多出的一個或幾個小染色體，稱為B－染色體，或稱超數(shù)染色體。N：核仁組成區(qū)，細(xì)胞中某一對或

2、幾對染色體上負(fù)責(zé)組織核仁的區(qū)域。SAT：隨體，次縊痕區(qū)至染色體的末端，稱之為隨體。帶型帶型：借助細(xì)胞學(xué)手段，使染色體顯現(xiàn)出深淺不同的染色帶。染色帶的數(shù)目、部位、寬窄和著色深淺均具有相對穩(wěn)定性，所以每一條染色體都有固定的分帶模式，即稱帶型第一章植物染色體常規(guī)制片方法目前國內(nèi)外常用的制片技術(shù)可分為兩種，即壓片法和去壁低滲法壓片法和去壁低滲法。優(yōu)缺點(diǎn)比較優(yōu)缺點(diǎn)比較:壓片法和趨避低滲法各有優(yōu)缺點(diǎn)，前者操作快速簡便，節(jié)省材料，后者操作稍繁且需酶制

3、劑，但染色體易于展開而不易于導(dǎo)致染色體變形，尤其對一些含有較多成熟細(xì)胞的組織，如芽、愈傷組織等，其制片效果明顯優(yōu)于壓片法。壓片法的流程壓片法的流程：1取材根尖、莖尖、幼葉及愈傷組織等。在植物染色體的研究中，根尖分生組織為最主要的材料。2預(yù)處理用化學(xué)的或物理的方法對材料進(jìn)行預(yù)先處理，阻止或破壞紡錘體形成，另一個作用是導(dǎo)致染色體高度濃縮，利于分散。3固定用卡諾氏固定液固定2到24小時。4解離將固定后的材料置于在預(yù)熱60攝氏度的1N鹽酸中。5

4、染色染色劑有洋紅，卡寶品紅等。6壓片第二章植物染色體的分帶方法分帶的類型分帶的類型：1Giemsa帶①c帶，顯示組成型異染色質(zhì)，一般不改變其性質(zhì)，通常存在于N、著絲粒、端粒等。②G帶，反映的遺傳信息比較多。2熒光分帶，Q帶、H帶、D帶、R帶。顯帶機(jī)制顯帶機(jī)制：c帶：①結(jié)構(gòu)以染色質(zhì)變性遲而復(fù)性快，早復(fù)性的異染色質(zhì)便為Giemsa深染而顯色。②與DNA的含量和濃縮程度有關(guān)。G帶，染色體中具有染色粒結(jié)構(gòu)，這種結(jié)構(gòu)在G顯帶過程中引起異染色質(zhì)的某

5、種重排而被夸大，同時，可能是有某些非帶區(qū)DNA被消化或提取，或者由變性的非組蛋白所覆蓋，或兩者同時存在，然后通過Giemsa染料在可作用的DNA側(cè)面堆積，而顯示帶紋。第三章植物染色體的銀染技術(shù)銀染在細(xì)胞遺傳學(xué)中的應(yīng)用銀染在細(xì)胞遺傳學(xué)中的應(yīng)用（20分）：1染色體端部染色體，Ag－N染色法可以作為N定性和定位的優(yōu)良方法。2N的數(shù)目、位置和變異。在核型的比較研究中，N的數(shù)目和位置的差異是一個十分重要的細(xì)胞學(xué)識別特征，銀染色可以用在核形分析中確

6、定N的數(shù)目以及所在染色體。例如，豌豆染色體的N數(shù)目和位置，是一個長期爭議未決的問題，應(yīng)用銀染色研究的結(jié)果才證明，豌豆具有2對（第4和第7）N，而且均位于長臂的近端部。3N在種間雜種的競爭。兩位研究者分別對小麥、黑麥、小黑麥以及小麥－黑麥附加系和代換系的染色體進(jìn)行了Ag－N研究，發(fā)現(xiàn)無論任何一種情況下，只要有小麥染色體的N存在，黑麥IR上的N都將受到抑制而不能表達(dá)。4核仁周期的研究銀染研究洋蔥根尖細(xì)胞的核仁周期表明，在早末期的染色體臂上首

7、先出現(xiàn)小的銀染顆粒，稱之為前核仁體，標(biāo)志核仁的發(fā)生。末期，核仁在N發(fā)育，積聚核仁物質(zhì)。晚末期，核仁明顯增大，兩個子細(xì)胞形成時，核仁發(fā)育成熟。5聯(lián)會復(fù)合體（SC）的研究主要在以下幾個方面：銀染SC技術(shù)、核型分析、SC的結(jié)構(gòu)變異、聯(lián)會的啟動方式、聯(lián)會的異?，F(xiàn)象。6染色體軸心的研究Howell首次以銀染方法在光學(xué)顯微鏡下，觀察到人和幾種哺乳動物染色體的軸心結(jié)構(gòu)，它位于每個染色體的縱軸中心，為銀所深染。7核基質(zhì)網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)。Ghosh等對洋蔥根尖和

8、鱗莖組織的細(xì)胞核和染色體進(jìn)行了銀染色研究，證明植物細(xì)胞核與動物細(xì)胞核一樣，存在一種纖維狀的非染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)。Ag－N快速染色法：1低滲制片法：50%硝酸銀溶液、1滴明膠（克粉狀明膠溶于100毫升無離子水中，再加1毫升甲酸）→40－45攝氏度溫育6－8分鐘→水洗→加5%硫代硫酸鈉2常規(guī)片冰凍→用刀片去除原玻片→50%硝酸銀溶液、1滴明膠→蓋新蓋片→溫育結(jié)果染色體呈黃色，N呈褐色。第四章植物染色體核型分析核型分析的四個不同層次內(nèi)容核型分析的四

9、個不同層次內(nèi)容：1染色體的數(shù)目，包括基數(shù)、多倍體、非多倍體、B－染色體和性染色體等。2染色體的形態(tài)，包括染色體的絕對大小和相對大小，著絲點(diǎn)和次縊痕以及隨體的數(shù)目和位置等。3染色體的‘解剖學(xué)’特征是指一般光學(xué)顯微鏡下可觀察到的染色體內(nèi)部結(jié)構(gòu)特征，即主要指的是分帶特征。4分子特征，DNA的數(shù)量和質(zhì)量，質(zhì)量指DNA中重復(fù)和非重復(fù)序列的比例。B－染色體的特點(diǎn)－染色體的特點(diǎn)：1一般小于常染色體，大者約相當(dāng)于染色體中最小成員的約一半大小，小者僅有一

10、個小隨體大小。2在同一個體中數(shù)目比較恒定，具中部和端部著絲粒，易于與染色體斷裂所產(chǎn)生的各種片斷相區(qū)別。380%出現(xiàn)在二倍體植物中。核型的表述格式核型的表述格式：1核型分析參數(shù)表。染色體的序號統(tǒng)稱用阿拉伯?dāng)?shù)字表示。染色體長度：絕對長度（um）和相對長度（%）2模式照片。每種材料附一張質(zhì)量較高的分裂中期染色體的完整照片，并直接在照片上標(biāo)出一個以微米為長度單位的標(biāo)尺。3核型圖。一般將與模式照片同一細(xì)胞的染色體逐個減下，參照染色體長度核臂比值，

11、進(jìn)行同源染色體“配對”，然后按表格中的染色體序號順序排列于模式照片的下方或右方，并在每隊(duì)染色體下方標(biāo)上序號。4模式核型圖。以上述核型分析表中所列各染色體的長度平均值繪制，二者應(yīng)完全相符。5染色體編號6核型公式，即核型分析結(jié)果，如芍藥：2n=2x=10=6m2sm2st（SAT）第五章植物組織器官制片的方法和原理方法：1選材。材料三性：代表性，典型性，特異性2殺死，固定和保存。殺死：指一種或多種化學(xué)藥品很迅速的終結(jié)生物組織的生命而言。固定

12、：在殺死的基礎(chǔ)上，把組織或細(xì)胞按生活的狀態(tài)固定下來，使在以后紙片的任何過程中不發(fā)生變化。保存：材料經(jīng)殺死，固定處理后，需要把組織或細(xì)胞的結(jié)構(gòu)在較長的時間內(nèi)保存下來。3沖洗和脫水，酒精是最好的脫水劑。30%酒精→50%酒精→60%酒精→70%酒精→85%酒精→95%酒精→純酒精→純酒精，各級1h，純酒精2h4透明，二甲苯是最好的透明劑。1／2純酒精1／2二甲苯→二甲苯→二甲苯，各級2h5浸透和包埋6切片7粘片8染色，番紅和固綠對染。幾種藥