h-e染色

1、HE染色概述蘇木精（Hematoxylin）伊紅（Eosin）染色也稱普通染色，簡稱為HE染色。是生物組織學(xué)、病理學(xué)及細(xì)胞學(xué)工作必不可少的最常用的染色方法，故又稱常規(guī)染色HE染色應(yīng)該是紅藍(lán)相映，層次濃淡均為分明穩(wěn)恒定優(yōu)質(zhì)各種固定、包埋方法所制作的組織切片和冰凍切片等，均可用采用常規(guī)染色HE染色原理組織細(xì)胞的不同成分對蘇木精染料的親合力不同，經(jīng)蘇木精染色的組織切片，再利用酸乙醇的分化作用，可使細(xì)胞核等酸性成分著色清晰，而其它成分脫色再經(jīng)伊

2、紅染細(xì)胞質(zhì)等堿性成分，則各種組織與病變的一般形態(tài)結(jié)構(gòu)均可顯示出來一張優(yōu)質(zhì)的染色切片，可以清晰地觀察到各種不同的組織結(jié)構(gòu)以此作為病理診斷的確切依據(jù)再根據(jù)此染色切片所見，分別進(jìn)行不同的特殊染色到目前為止人類所積累的病理組織學(xué)知識，絕大部分是從觀察蘇木精伊紅染色標(biāo)本所得來的第一節(jié)染液及溶液的配制一、明礬蘇木精染液的配制蘇木精染液的配法很多，普通、常規(guī)染色多用明礬蘇木精，常用的有哈瑞（Harris）、埃利希（Ehrlich）、德拉菲而德（Del

3、afield）及邁耶（Mayer）等明礬蘇木精染液用鉀明礬或銨明礬中的鋁離子作為蘇木精的媒染劑利用氧化汞等氧化劑進(jìn)行人工氧化或通過自然氧化成熟的方法，使蘇木精具有較強的染色效果還需用冰醋酸作為促染劑，以增強染色能力（一）哈瑞斯（Harris）蘇木精染液1配方（1）甲液蘇木精1g無水乙醇10ml（2）乙液鉀明礬（硫酸鋁鉀）20g蒸餾水200ml（3）其他氧化汞0.5～1g冰醋酸0.5～1ml2配制法分別配制甲、乙液，將乙液（加溫并攪拌），

4、待全部溶解后，再加入甲液，混合后煮沸1～2分鐘，然后改用小火加溫，慢慢加入氧化汞，同時不停地?fù)u蕩或攪拌使其充分氧化，當(dāng)液體變?yōu)樯钭纤{(lán)色時，即迅速將容器放入入冷水中使之迅速冷卻，室溫靜置數(shù)小時至一夜。第二天過濾，每100毫升濾液內(nèi)加0.5～1毫升冰醋酸，以增強其染色力染色時間為3～15分鐘此液為人工氧化劑，配制方便，配后第二天即可應(yīng)用，且染色時間較短，為臨床病理常用之方法，保存時間不能太長，經(jīng)2～6個月后染色作用漸弱，故現(xiàn)用現(xiàn)配為第二節(jié)染

5、色方法及注意事項一、染色前的處理無論用哪一種固定、包理方法所制作的切片，都必須經(jīng)過適當(dāng)處理方能進(jìn)行色染這里著重介紹常用的石蠟切片染色前的處理石蠟切片在染色之前必須經(jīng)過脫蠟至水，就是先用二甲苯等有機(jī)溶劑將組織切片上的石蠟溶解后，再用自高至低濃度的乙醇將不能與水混合的二甲苯溶掉；在經(jīng)過各級乙醇的過程中，組織切片中的水分得到逐漸增加，直至最后水洗步驟：二甲苯去蠟（二次各5～10min）無水乙醇（二次）、95%乙醇、80%乙醇、70%乙醇（各1

6、～2min）自來水沖洗，蒸餾水洗二、染色蘇木精伊紅染色過程是先用蘇木精將組織切片適當(dāng)?shù)剡^染，經(jīng)水洗后再用鹽酸乙醇分化、溫水或弱減性水溶液顯藍(lán)，使胞核呈鮮明的藍(lán)色，胞質(zhì)等背景無色；再經(jīng)水洗后用伊紅將胞質(zhì)等染成深淺不同的粉紅至紅色步驟：蘇木精染液(10～15分鐘)自來水洗(片刻)鹽酸酒精分化(1～2浸次)流水沖洗(片刻)溫水或碳酸鋰飽和水溶液顯藍(lán)(1分鐘)流水沖洗(數(shù)分鐘)伊紅液染(數(shù)分鐘)三、脫水透明封固絕大部分蘇木精伊紅染色的切片標(biāo)本，

7、為了便于觀察和長期保存，均應(yīng)以干性封固劑封藏凡是用干性封固劑封藏的各種切片標(biāo)本在染色后，均需經(jīng)過脫水、透明過程可使存留在切片上之水分及漂浮的染色液全部除凈，經(jīng)透明劑的作用后，將脫水劑清除出來，使切片產(chǎn)生出適宜的折光率，最后用蓋玻片及封固劑封固步驟：95%乙醇、無水乙醇(各二次1～2分鐘)二甲苯(二次1分鐘)滴加中性樹膠等蓋蓋玻片封片步驟內(nèi)容時間(min)步驟內(nèi)容時間(min)1二甲苯Ⅰ512溫水或碳酸鋰液52二甲苯Ⅱ513自來水沖洗片刻