bac-to-bac表達系統(tǒng)中文版說明書

1、BactoBac桿狀病毒表達系統(tǒng)桿狀病毒表達系統(tǒng)試劑盒內(nèi)容物試劑盒內(nèi)容物：Introduction：Overview：BactoBac桿狀病毒表達系統(tǒng)提供快速有效的方法產(chǎn)生重組桿狀病毒。此方法基于讓已經(jīng)轉(zhuǎn)入桿狀病的質(zhì)粒（桿粒）的位點特意轉(zhuǎn)座子的表達框的質(zhì)粒在Ecoli中擴增。BactoBac桿狀病毒表達系統(tǒng)主要包括：pFastBac捐獻質(zhì)粒的選擇，它要能夠產(chǎn)生包含目的位點的表達結(jié)構(gòu)，這個目的基因的產(chǎn)生被桿狀病毒特意位點啟動子控制。一個E

2、coli宿主，DH10Bac，包含桿狀病毒質(zhì)粒（桿粒）和輔助質(zhì)粒，在轉(zhuǎn)染pFastBac表達結(jié)構(gòu)后可以產(chǎn)生重組桿粒。一個控制表達的質(zhì)粒，包括Gus和或CAT基因，以便在感染細胞后產(chǎn)生重組桿狀病毒，表達β葡萄糖酸酐酶和或氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶。BactoBac表達系統(tǒng)的優(yōu)點表達系統(tǒng)的優(yōu)點：使用這個系統(tǒng)產(chǎn)生重組桿狀病毒較傳統(tǒng)的同源重組有以下優(yōu)點：與使用同源重組產(chǎn)生重組桿狀病毒所需的46周相比，鑒別純化重組病毒少于兩周減少了從斑點篩選重組病毒DNA

3、所包含親緣和非重組病毒的幾率可以快速同時進行大量重組，適合表達功能性研究的蛋白選擇選擇pFastBac菌體（菌體（Vect）：）：大量的pFastBac菌體都適于進行BactoBac表達系統(tǒng)。選擇對于你的需要最合適的菌體。Vect特點參考pFastBacTM1高水平表達的強AcMNPV聚乙烯（PH）啟動子用于簡單克隆的大量克隆位點eron1996pFastBacTMHT高水平表達的聚乙烯啟動子；N末端含有6XHis，可以用來純化重組蛋白

4、，并可用Polayes1996實驗輪廓實驗輪廓：流程流程：下圖揭示了表達目的基因的一般步驟1、pFastBacdon質(zhì)粒（步驟步驟：目的基因的克?。┑玫降玫?、pFastBac重組體（轉(zhuǎn)化至DN10Bac細胞（含有桿粒和helper））得到3、含有重組桿粒的Ecoli細胞（重新劃線）得到4、驗證過的含有重組桿粒的Ecoli細胞（過夜培養(yǎng)，分離重組桿粒DNA）得到5、重組桿粒DNA（使用Cellfectin試劑感染細胞）得到6、P1重組桿