要求的艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行

1、第十單元免疫缺陷性疾病的免疫學(xué)檢測,實(shí)驗(yàn)一 HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn),獲得性免疫缺陷綜合征,是由人類免疫缺陷病毒（HIV）感染所引起的以CD4+ T細(xì)胞減少為主要特征，同時(shí)伴反復(fù)機(jī)會(huì)感染、惡性腫瘤及中樞神經(jīng)系統(tǒng)退行性病變的一組綜合征。,HIV感染的免疫學(xué)檢驗(yàn)方法主要針對(duì)病毒抗原和抗病毒抗體的檢測以及免疫細(xì)胞數(shù)量和功能的分析。HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)主要包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)、快速檢測試驗(yàn)（明膠顆粒凝集試

2、驗(yàn)、免疫滲濾試驗(yàn)和免疫層析試驗(yàn)）等。ELISA是最常用的HIV抗體初篩實(shí)驗(yàn)方法。本實(shí)驗(yàn)采用雙抗原夾心ELISA法檢測人血清中HIV抗體。,檢測方法,在符合Ⅱ級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室（BSL-2）要求的艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行。,實(shí)驗(yàn)條件,將HIV抗原包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的HIV抗原，形成抗原－抗體－酶標(biāo)抗原復(fù)合物，洗滌，加底物顯色。通過酶標(biāo)儀檢測吸光度A450nm 值，根據(jù)A450nm 值判斷HIV抗體的存在與否。,實(shí)驗(yàn)原理,

3、1.HIV抗原酶標(biāo)板。2.洗滌液 PBS-Tween20。 3.辣根過氧化物酶標(biāo)記的HIV抗原。4.辣根過氧化物酶底物溶液。5.底物稀釋液 PBS-1%BSA。6.終止液 2mol/l H2SO4溶液。7.對(duì)照血清 臨床標(biāo)本篩選獲得的陽性血清和陰性血清。8.酶標(biāo)儀、洗板機(jī)。,試劑與器材,操作步驟,編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板設(shè)陰性對(duì)照2孔、 陽性對(duì)照3孔，空白對(duì)照2孔

4、加樣：分別在相應(yīng)孔加入待檢標(biāo)本、陰性、陽性對(duì)照 100μl，用封板膜封板后置37℃溫育60min。洗滌：用洗板機(jī)清洗，在干凈濾紙上拍干。加酶：每孔加酶結(jié)合物100μl（空白對(duì)照孔除外），充分 混勻，置37℃溫育30min。洗滌：用洗板機(jī)清洗，在干凈濾紙上拍干。顯色：每孔加入底物緩沖液50μl，TMB 50μl，振蕩混 勻，37℃避光顯色10min。 測定：

5、每孔加終止液50μl，振蕩混勻。在450nm波長 下，酶標(biāo)儀測定各孔A450nm值。,結(jié)果判斷,計(jì)算臨界值：臨界值=陽性對(duì)照值×10%。正常情況下，陽性對(duì)照孔的A450nm值≥0.80，樣品A450nm值≥臨界值者為HIV抗體陽性。正常情況下，陰性對(duì)照孔的A450nm值≤0.08，樣品A450nm值＜臨界值者為HIV抗體陰性。,注意事項(xiàng),實(shí)驗(yàn)中設(shè)立陽性與陰性對(duì)照。底物顯色時(shí)間不宜過長。注

6、意生物安全。對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)的樣品，應(yīng)進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。如復(fù)檢均呈陰性，則報(bào)告HIV抗體陰性（-）；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，應(yīng)送HIV確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)。,臨床意義,作為HIV感染的篩查實(shí)驗(yàn)。HIV有兩個(gè)血清型：HIV-1和HIV-2，后者少見。此試驗(yàn)陽性者應(yīng)進(jìn)一步作確證試驗(yàn)。,思考題,ELISA是檢測HIV抗體的常用方法，但并不是唯一的方法。化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)、免疫膠體金以及免疫層析實(shí)驗(yàn)等均可用于HIV抗體的檢測，試比較各

7、種方法之間的優(yōu)缺點(diǎn)。,第三軍醫(yī)大學(xué) 吳超,實(shí)驗(yàn)二 HIV確認(rèn)實(shí)驗(yàn),HIV抗體初篩試驗(yàn)陽性者，須作確證試驗(yàn)。確證實(shí)驗(yàn)必須在專門的艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，并最終確定患者是否感染HIV。確證試驗(yàn)方法包括免疫印跡試驗(yàn)、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)、免疫熒光試驗(yàn)等。免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western Blot，WB)是用以檢測HIV抗體的首選確證試驗(yàn)方法，其檢測結(jié)果常常被作為鑒別其他檢驗(yàn)方法優(yōu)劣的“金標(biāo)準(zhǔn)”。,以硝酸纖維素膜為

8、載體的抗原條，組合了HIV-1全病毒抗原和HIV-2 gp36重組蛋白抗原。當(dāng)抗原條與被檢血清及對(duì)照血清接觸時(shí)，如血清標(biāo)本有HIV-1/HIV-2特異性抗體，將會(huì)與抗原條上的HIV-1/HIV-2 gp36抗原結(jié)合。結(jié)合的抗體再與酶標(biāo)二抗結(jié)合，加入底物顯色，觀察結(jié)果判斷。,實(shí)驗(yàn)原理,1.HIV1/2抗原硝酸纖維膜條          

9、60;  20條2.印跡緩沖液（10×）                     12ml3.漂洗緩沖液（10×）       

10、;              60ml4.底物BCIP/NBT溶液                    &

11、#160;   50ml5.結(jié)合物                               

12、0;              70μl6.HIV1/2陰性對(duì)照血清                       70

13、μl7.HIV1弱陽性對(duì)照血清                   70μl8.HIV1強(qiáng)陽性對(duì)照血清            

14、60;      70μl9.反應(yīng)槽、搖床、移液管、吸引器,試劑與器材,操作步驟,取出反應(yīng)槽，每一槽內(nèi)加2ml漂洗緩沖液。用鑷子小心地夾住抗原條編號(hào)端放入漂洗緩沖液中，編號(hào)面朝上，每槽1條，讓溶液完全覆蓋。將反應(yīng)槽放置搖床，搖動(dòng)5～10分鐘后吸棄漂洗液。每槽加入印跡緩沖液2ml，然后分別加入20μl待檢血清或血漿，并用本試劑盒中的對(duì)照血清作平行對(duì)照。在室溫下將反應(yīng)槽

15、在搖床上搖動(dòng)60分鐘。旋搖完畢后，吸棄印跡緩沖液。,每槽加入2ml漂洗緩沖液，旋搖5分鐘后，吸棄漂洗緩沖液，共漂洗3次，每次5分鐘。在每槽中加入2ml結(jié)合物稀釋液，旋搖45分鐘。從槽中吸棄結(jié)合物稀釋液，重復(fù)步驟6。每槽中加入底物2ml，旋搖15分鐘。吸去底物液，每槽中加入2ml蒸餾水，旋搖5分鐘 后，終止反應(yīng)。將抗原條放于二張濾紙間吸干水分后觀察結(jié)果。,結(jié)果判斷,1. 對(duì)照血清檢測結(jié)果判定要求① H

16、IV-1強(qiáng)陽性對(duì)照血清：必需出現(xiàn)gp160/gp120和gp41、p24帶型，以及p66、p55/p51、p34、p17帶型判定為陽性，HIV-2 gp36應(yīng)為陰性。② HIV-1弱陽性對(duì)照血清：在gp160、gp120和gp41、p24帶型中至少出現(xiàn)二條，判定為陽性。其他位置其可能出現(xiàn)弱帶，但對(duì)分析并非必需。HIV-2 gp36應(yīng)為陰性。③ HIV-2陽性對(duì)照血清：必需出現(xiàn)gp36重組蛋白帶型。④ 陰性對(duì)照血清：應(yīng)無上述的

17、特異性帶型出現(xiàn)。,2. 被檢血清/血漿的判定標(biāo)準(zhǔn)有下列情況之一者判定為HIV-1抗體陽性。 ①至少一條env帶和一條pol帶； ②至少一條env帶和一條gag帶； ③至少一條env帶、一條gag帶和一條pol帶； ④至少二條env帶；有HIV-2 gp36重組蛋白帶型出現(xiàn)者判定為HIV-2抗體陽性，需用HIV－2確認(rèn)試劑進(jìn)一步檢測。無HIV抗體特異性帶型出現(xiàn)者判定為HIV抗體陰性。出現(xiàn)HI

18、V特異性抗體帶型，但帶型不足以確認(rèn)陽性者，判定為HIV抗體可疑。,注意事項(xiàng),實(shí)驗(yàn)中必須同時(shí)設(shè)定HIV-1強(qiáng)陽性、HIV-1弱陽性和HIV-1+2陰性血清對(duì)照。如果抗原條和血清樣品作用時(shí)間過長，陰性樣品也可能出現(xiàn)弱帶。凡溶血、脂血或混濁樣品均為不宜檢測標(biāo)本。試驗(yàn)中操作應(yīng)注意生物安全。底物顯色時(shí)間，一般控制在30分鐘內(nèi)。時(shí)間太長，本底變深；如果強(qiáng)陽性血清色帶增深時(shí)可提前終止反應(yīng)；若弱陽性對(duì)照血清色帶較淺，可以適當(dāng)延長反應(yīng)時(shí)間。,臨床

19、意義,用于在初篩試劑判斷為HIV陽性(如ELISA法)基礎(chǔ)上的血清或血漿樣本，進(jìn)行確證是否為HIV-1陽性及診斷是否感染了HIV-2。,思考題,HIV血清抗體檢測的初篩實(shí)驗(yàn)和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)在檢測HIV感染的臨床意義及實(shí)驗(yàn)原理上的差異？免疫印記實(shí)驗(yàn)、條帶免疫試驗(yàn)、放射免疫沉淀試驗(yàn)及免疫熒光試驗(yàn)（IFA）等均可用作HIV的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)，試分析免疫印記實(shí)驗(yàn)應(yīng)用如此廣泛的原因 ?,第三軍醫(yī)大學(xué) 吳超,實(shí)驗(yàn)三 T細(xì)胞亞群的流式細(xì)胞儀

20、檢測,HIV感染可導(dǎo)致免疫系統(tǒng)中CD4+T細(xì)胞數(shù)量減少以及CD4+ T細(xì)胞/CD8+ T細(xì)胞比例失調(diào)，因此，CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)可用于評(píng)價(jià)HIV感染者免疫狀況，輔助臨床進(jìn)行疾病分期。 CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量還可評(píng)估HIV感染者機(jī)會(huì)性感染的風(fēng)險(xiǎn)，輔助判斷是否進(jìn)行預(yù)防性治療。,背景知識(shí),CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法分為兩大類，一類是應(yīng)用流式細(xì)胞儀測定法，另一類是非流式細(xì)胞儀測定法。其中，流式細(xì)胞儀檢測是目前應(yīng)用較

21、為普遍的一種方法，包括多平臺(tái)法和單平臺(tái)法。 單平臺(tái)法僅需要流式細(xì)胞儀進(jìn)行群體細(xì)胞的相對(duì)計(jì)數(shù)。本實(shí)驗(yàn)主要介紹單平臺(tái)法對(duì)T淋巴細(xì)胞的流式細(xì)胞檢測。,流式細(xì)胞儀可檢測單細(xì)胞或微粒的信號(hào)，將待測細(xì)胞或微粒進(jìn)行熒光染色后制成懸液標(biāo)本，在一定氣體壓力下將待測樣品壓入流動(dòng)室，待測細(xì)胞在鞘液的包裹下單行排列，依次通過流式細(xì)胞儀的檢測區(qū)域。單平臺(tái)方法即應(yīng)用三色、四色流式試劑配以內(nèi)參絕對(duì)計(jì)數(shù)微球，加上流式細(xì)胞儀淋巴細(xì)胞亞群獲取和分析軟件，一

22、步即可獲得T細(xì)胞亞群的相對(duì)數(shù)（百分比）和絕對(duì)數(shù)。通過使用已知數(shù)量的參考微球?yàn)閮?nèi)參，可通過獲取的目標(biāo)細(xì)胞與參考微球的比例、參考微球數(shù)量和樣品體積，得到每微升的淋巴細(xì)胞數(shù)量。,實(shí)驗(yàn)原理,,,TruCOUNT絕對(duì)計(jì)數(shù)管。TriTEST三色試劑CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP或MultiTEST四色試劑CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC。FACS Lysing Solution（10X）

23、 蒸餾水（0.45μm過濾）配制成1X濃度的溶血素；PBS鞘液 0.45μm過濾；BD CaliBRITE Beads及BD TruCOUNT controls。流式細(xì)胞儀。,試劑與器材,操作步驟,1.標(biāo)本制備：采集外周靜脈血2-3ml,EDTA-K3抗凝。標(biāo)本 與試劑用前輕輕搖勻；2.準(zhǔn)確加入20μl熒光試劑和50μl全血，充分混勻；3.充分混勻，室溫（20～25℃）避光反應(yīng)15min；4.加入450

24、μl FACS溶血液 (1X)，充分混勻；5.充分混勻，室溫（20～25 ℃ ）避光放置15min； 6.24h內(nèi)流式檢測。,單平臺(tái)一步法由計(jì)算機(jī)軟件直接出結(jié)果并打印出報(bào)告單，報(bào)告單的內(nèi)容包括如下：,結(jié)果判斷,注意事項(xiàng),用于流式細(xì)胞儀免疫表型檢測的抗凝劑 K2EDTA、K3EDTA、酸性枸櫞酸葡萄糖溶液（ACD）或肝素抗凝一般要求48h內(nèi)染色，染色后6h內(nèi)分析。如采血后24h內(nèi)染色，則可在染色后24h內(nèi)分析。在室溫（18～

25、25℃）保存和運(yùn)輸樣品，避免極端溫度（結(jié)冰或大于37℃）。高溫季節(jié)，需用隔熱容器盛裝樣品，并將其置于有冰袋和吸熱物質(zhì)的容器中。溶血、凝血或結(jié)冰的樣品應(yīng)視為不合格樣品，超過檢測允許時(shí)間的樣品不可檢測。應(yīng)報(bào)告所有相關(guān)數(shù)據(jù)的正常值范圍，且每個(gè)實(shí)驗(yàn)室都應(yīng)測定參考數(shù)值。,臨床意義,①用于HIV感染者的疾病分期： 凡CD4+T淋巴細(xì)胞＜200/μl或CD4+T淋巴細(xì)胞的百分比＜14%的HIV感染者可歸入艾滋病。②判斷HIV感染的臨床合并癥：

26、如CD4+T淋巴細(xì)胞＜200/μl時(shí)，易發(fā)生卡氏肺囊蟲肺炎；而巨細(xì)胞病毒感染和鳥分支桿菌感染常發(fā)生于CD4+T淋巴細(xì)胞＜50/μl的病人，極少見于CD4+T淋巴細(xì)胞＞100/μl的病人。,思考題,T淋巴細(xì)胞的流式細(xì)胞檢測技術(shù)包括多平臺(tái)法和單平臺(tái)法，試述兩種方法的差異？,第三軍醫(yī)大學(xué) 吳 超,臨床見習(xí)： HIV抗體初篩試驗(yàn),了解HIV抗體初篩試驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室要求和檢測流程與質(zhì)量控制，熟悉用于HIV抗體初篩試驗(yàn)的樣品種類與采集要求

27、，掌握HIV抗體初篩試驗(yàn)中ELISA檢測方法原理與結(jié)果分析。,見習(xí)要點(diǎn),采用雙抗原夾心ELISA法檢測血清中HIV（1+2）抗體。HIV抗原包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的HIV抗原，形成抗原－抗體－酶標(biāo)抗原復(fù)合物，洗滌，加底物顯色。通過酶標(biāo)儀檢測吸光度（OD值），根據(jù)OD值判斷HIV抗體的存在與否。,基本原理,樣品的采集與要求,HIV抗體初篩試驗(yàn)可采用血清、血漿樣品。,1．采樣前準(zhǔn)備 根據(jù)檢測項(xiàng)目的具體要求，確

28、定采集樣品的種類、處理、保存及運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和方法，按照臨床采血技術(shù)規(guī)范的要求操作，遵守生物安全要求。 檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣品容器表面的標(biāo)記是否一致，并注明樣品采集時(shí)間。選擇合適的室內(nèi)（外）采血空間，受檢者坐（臥）于合適的位置，準(zhǔn)備采血用具、皮膚消毒用品、采血管及試管架、硬質(zhì)廢棄物容器等。,2．采集和處理樣品①血漿：將采集的抗凝全血1500～3000r/mi

29、n離心15min，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。②血清：根據(jù)需要，用一次性注射器（或真空采血管）抽取5～10ml靜脈血，室溫下自然放置1～2h，待血液凝固、血塊收縮后再用1500～3000r/min離心15min，吸出血清，置于合適的容器中，備用。,3．樣品的保存 用于HIV抗體檢測的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于2～8℃， 一周以上應(yīng)存放于-20℃以下。艾滋病檢測篩查實(shí)驗(yàn)室檢測的篩查

30、陽性樣品應(yīng)及時(shí)送確證實(shí)驗(yàn)室，而篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時(shí)間，建議至少保存1～2個(gè)月。特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間。,4．樣品的運(yùn)送 根據(jù)符合生物安全要求；要獲得相應(yīng)部門批準(zhǔn)并由具有資質(zhì)的人員專程護(hù)送。應(yīng)采用三層容器對(duì)樣品進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對(duì)應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。,1．初篩試驗(yàn) 根據(jù)檢測

31、目的選用符合要求的篩查試劑對(duì)樣品進(jìn)行初篩檢測，對(duì)呈陰性反應(yīng)的樣品，可出具HIV抗體陰性（-）報(bào)告；對(duì)呈陽性反應(yīng)的樣品，需要進(jìn)一步做復(fù)檢試驗(yàn)和確證試驗(yàn)。,篩查程序,2．復(fù)檢試驗(yàn) 對(duì)初篩呈陽性反應(yīng)的樣品，應(yīng)使用原有試劑和另外一種不同原理（或廠家）的試劑，或另外兩種不同原理或不同廠家的試劑進(jìn)行復(fù)檢試驗(yàn)。如果初篩檢測使用抗原抗體聯(lián)合試劑，則復(fù)檢必須包括一種抗原抗體聯(lián)合試劑。如兩種試劑復(fù)檢均呈陰性反應(yīng)，則報(bào)告HIV抗體陰性（-）

32、；如均呈陽性反應(yīng)，或一陰一陽，需送艾滋病確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)（圖圖 HIV抗體篩查檢測流程）。如果抗原抗體聯(lián)合試劑檢測呈陽性反應(yīng)，而抗體試劑檢測為陰性反應(yīng)，則應(yīng)考慮進(jìn)行HIV-1 p24抗原或核酸檢測，必要時(shí)進(jìn)行隨訪。 艾滋病檢測篩查實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢判定為陽性反應(yīng)的樣品，確證實(shí)驗(yàn)室可以直接進(jìn)行確證試驗(yàn)。,3. 初篩和復(fù)檢流程,,圖 HIV抗體篩查檢測流程,4．篩查試驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告 HIV抗體篩查試驗(yàn)用附

33、表1 （見實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教材）進(jìn)行報(bào)告，陰性反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性（-）”；陽性反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體待復(fù)檢”。,5．篩查試驗(yàn)呈陽性反應(yīng)樣品的轉(zhuǎn)送 如需送上級(jí)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行復(fù)檢，需要核對(duì)身份，補(bǔ)充個(gè)人信息（如姓名和身份證號(hào)碼），必要時(shí)采集第二份血樣，持HIV抗體篩查報(bào)告，送當(dāng)?shù)匕滩『Y查中心實(shí)驗(yàn)室，或直接送確證實(shí)驗(yàn)室復(fù)檢。HIV抗體復(fù)檢試驗(yàn)用附表2（見實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)教材） 進(jìn)行報(bào)告，兩次檢測均陽性或一陰一陽報(bào)告為 “HIV抗體待確

34、證”；兩次檢測均陰性報(bào)告為“HIV抗體陰性（-）”。HIV抗體復(fù)檢報(bào)告需由1名檢驗(yàn)人員和1名審核人員簽字。,質(zhì)量控制,1．試劑盒內(nèi)部對(duì)照 試劑盒內(nèi)部對(duì)照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對(duì)照血清。試劑盒內(nèi)部對(duì)照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，但不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每一次檢測臨床樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對(duì)照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。內(nèi)部對(duì)照結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。,2．室內(nèi)質(zhì)控品 為非試劑盒組份

35、的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性而設(shè)置的，包括強(qiáng)陽性、弱陽性和陰性質(zhì)控血清。也可以只設(shè)置一個(gè)弱陽性質(zhì)控，以該試劑盒臨界值（Cut-off）的2～3倍為宜。外部質(zhì)控品的作用是，判斷該批臨床樣品檢測的有效性，因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，其結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品可以是商品或?qū)嶒?yàn)室自行制備。,3．建立質(zhì)控圖 最常用的質(zhì)控圖是Levey-Jennings質(zhì)控圖，該圖使用累計(jì)和技術(shù)或趨勢分析技術(shù)的圖形提供系統(tǒng)

36、偏移和漂移的狀況。,（1）建立質(zhì)控圖參數(shù)：外部質(zhì)控品的均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立 在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對(duì)外部質(zhì)控品重復(fù)測定的基礎(chǔ) 上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；如 果僅做少量批次的檢測，也至少做5個(gè)批次的檢測，每 個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個(gè)臨 時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨 時(shí)性的均值

37、和標(biāo)準(zhǔn)差。 （2）繪制質(zhì)控圖：質(zhì)控圖是把檢測數(shù)據(jù)與已確定的（計(jì)算 出的）“控制限”進(jìn)行比較的圖，包含一條中心橫線和 其上、下兩條平行的控制線，并按時(shí)間順序點(diǎn)入本實(shí) 驗(yàn)室每批次試驗(yàn)質(zhì)控血清的測定值。,（3）質(zhì)控規(guī)則及其使用:實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告實(shí)驗(yàn)結(jié)果之前必須評(píng) 價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核 結(jié)果來決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是

38、12S和 13S規(guī)則。①告警（12S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出 +2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。②失控（13S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出 +3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)定性下降所致。③ 漂移：連續(xù)幾次（3～5次）外部質(zhì)控品的S/CO值

39、都落在均值的一側(cè)則稱為漂移，提示實(shí)驗(yàn)條件發(fā)生了較大的變化。④趨勢：連續(xù)幾次（5～7次）外部質(zhì)控品的S/CO值幾乎按一個(gè)方向分布時(shí)稱為趨勢，通常由參數(shù)的緩慢改變引起。,（4）質(zhì)控圖的分析及失控處理：實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理程序。當(dāng)質(zhì)控已有計(jì)劃并恰當(dāng)?shù)貓?zhí)行時(shí)，要求可靠的均值和標(biāo)準(zhǔn)差用于計(jì)算質(zhì)控限，將假失控概率降到最低。當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)，對(duì)原有外部質(zhì)控品重復(fù)測定或更換新的外部質(zhì)控品進(jìn)行測定不是最有效的方法，必須找出問題發(fā)生的原因，找

40、出解除問題的方法，并消除原因，防止將來出現(xiàn)同樣的問題。,4．室內(nèi)質(zhì)控其他方式— “即刻法”質(zhì)控,“即刻法”質(zhì)控方法是在對(duì)同一批外部質(zhì)控血清連續(xù)測定3次后，即可對(duì)第3次檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下：,,（1）將質(zhì)控血清的測定值從小到大排列：x1、x2、x3……xn（x1為最小值，xn為最大值）。（2）計(jì)算 和s。（3）計(jì)算SI上限值 和SI下限值。,（4）將SI上限、SI下限與SI值表中的數(shù)字比較。,① 當(dāng)SI上限和SI下