兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡淋巴細(xì)胞亞群分析及WAS蛋白缺陷導(dǎo)致Tfh固有缺陷的研究.pdf

1、第一部分兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡淋巴細(xì)胞亞群分析
　　目的：分析系統(tǒng)性紅斑狼瘡患兒在不同疾病時(shí)期，淋巴細(xì)胞亞群數(shù)量變化情況。探討淋巴細(xì)胞亞群在兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡發(fā)病與疾病轉(zhuǎn)歸的關(guān)系，為患兒早期診斷和及時(shí)干預(yù)治療提供線索。
　　方法：2015年3月至2016年12月，收集到我院就診的29例系統(tǒng)性紅斑狼瘡患兒外周血（女：男=6.5：1），分為初發(fā)組15例，穩(wěn)定組14例，同齡健康兒童15例。采用流式細(xì)胞術(shù)（Flow cytometry）

2、檢測(cè)不同疾病時(shí)期下的SLE患兒外周血中主要淋巴亞群（T、B和NK細(xì)胞）及T、B細(xì)胞部分亞群比例及數(shù)量變化。以及γδT細(xì)胞，Tfh細(xì)胞，Treg細(xì)胞亞群比例的變化。
　　結(jié)果：穩(wěn)定組SLE患兒CD3+T細(xì)胞的比例及絕對(duì)數(shù)均高于對(duì)照組及初發(fā)組；同時(shí)，初發(fā)組CD3+T細(xì)胞的比例及絕對(duì)值低于對(duì)照組；穩(wěn)定組患兒CD8+T細(xì)胞的比例及絕對(duì)值均高于初發(fā)組；初發(fā)組B細(xì)胞的比例高于對(duì)照組及穩(wěn)定組；其他細(xì)胞亞群絕對(duì)數(shù)三組間無(wú)明顯差異。穩(wěn)定組患兒 CD

3、4+EM細(xì)胞比例明顯高于初發(fā)組及正常對(duì)照，其CD4+Naive絕對(duì)值低于對(duì)照組，其余Th細(xì)胞亞群比例及絕對(duì)數(shù)無(wú)明顯差異。穩(wěn)定組患兒CD8+TEMRA比例及絕對(duì)值均高于對(duì)照組，初發(fā)組患兒CD8+Naive絕對(duì)值低于正常組，其余CD8+T細(xì)胞亞群比例及絕對(duì)值三組間無(wú)明顯差異。穩(wěn)定期患兒Na?ve細(xì)胞百分比及絕對(duì)值均低于初發(fā)組及正常對(duì)照組，其余B細(xì)胞亞群比例及絕對(duì)數(shù)在三組間無(wú)明顯差異。
　　初發(fā)組SLE患兒與穩(wěn)定組SLE患兒γδT比例均

4、顯著低于對(duì)照組。SLE患兒Tfh細(xì)胞比例，ICOS及PD-1在Tfh中比例均明顯低于對(duì)照組。初發(fā)組與穩(wěn)定組患兒非抑制性Treg（non-Treg）細(xì)胞比例均明顯高于正常對(duì)照，初發(fā)組患兒活化Treg(aTreg)細(xì)胞比例高于穩(wěn)定組及對(duì)照組。靜息期Treg三組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異
　　結(jié)論： SLE患兒外周血淋巴亞群比例失調(diào)，同時(shí)伴有部分Tc、Th及B細(xì)胞亞群的比例變化，提示免疫細(xì)胞比例和或絕對(duì)數(shù)量的紊亂可能是參與SLE的發(fā)病。其中SLE患

5、兒γδT細(xì)胞明顯下降，提示了γδT在其發(fā)病中可能有重要作用。此外，非抑制性Treg（non-Treg）細(xì)胞比明顯高于正常對(duì)照，可能提示導(dǎo)致患兒免疫抑制能力的下降，進(jìn)而出現(xiàn)免疫過(guò)激狀態(tài)，導(dǎo)致了疾病發(fā)生或進(jìn)展。最后，穩(wěn)定組患兒cTfh細(xì)胞數(shù)量的下降提示Tfh細(xì)胞可能作為反映治療效果的一項(xiàng)臨床指標(biāo),用以評(píng)估患兒的疾病轉(zhuǎn)歸及預(yù)后。
　　第二部分 WAS蛋白缺陷導(dǎo)致Tfh固有缺陷的研究
　　目的：前期我們的研究發(fā)現(xiàn)WASp缺陷時(shí)人及基

6、因敲除小鼠的Tfh細(xì)胞數(shù)量和功能出現(xiàn)明顯缺陷，但該Tfh缺陷是由于T細(xì)胞發(fā)育的自身因素所致還是在Tfh發(fā)育分化中其他細(xì)胞的外在影響所致并不清楚。本研究旨在通過(guò)骨髓嵌合鼠動(dòng)物模型，明確WASKO小鼠 Tfh細(xì)胞的減少是否為WASp缺陷引起的固有缺陷，進(jìn)一步對(duì)該病的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行探討，最終為WAS患兒的臨床治療提供新的可能的方向。
　　方法：將表達(dá)CD45.2的WASKO小鼠/WT小鼠骨髓細(xì)胞與表達(dá)CD45.1的WT小鼠的骨髓細(xì)胞按照1

7、：1等比例混合后移植給經(jīng)致死劑量輻照后的CD45.1的WT小鼠，建立骨髓嵌合鼠動(dòng)物模型。移植8周干細(xì)胞重建成功后，用NP-KLH免疫部分小鼠，2周后檢測(cè)受體小鼠CD45.2陽(yáng)性的Tfh細(xì)胞比例，ICOS+Tfh細(xì)胞比例，PD-1+Tfh細(xì)胞比例，以及Tfh細(xì)胞增殖和凋亡情況。
　　結(jié)果：移植成功的骨髓嵌合鼠，免疫前后WASKO組CD45.2+Tfh細(xì)胞比例與對(duì)照組相比明顯下降，同時(shí)ICOS+Tfh細(xì)胞比例及PD-1+Tfh細(xì)胞比例