細(xì)菌感染的防治原則滅菌

1、醫(yī)學(xué)微生物學(xué)（細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷及消毒滅菌）,嚴(yán)杰，教授／醫(yī)學(xué)博士Department of Medical Microbiology and ParasitologyZhejiang University School of MedicineHangzhou, P.R. China,標(biāo)本的采集與送檢： （1）采集標(biāo)本應(yīng)注意無(wú)菌操作，盡量避免雜菌污染。 （2）根據(jù)患者病程、細(xì)菌在體內(nèi)分布及從人體排出途徑的不同，

2、采集相應(yīng)的標(biāo)本。一般情況下，應(yīng)在病變最明顯部位采集標(biāo)本。 （3）使用抗生素之前采集標(biāo)本，否則應(yīng)在分離培養(yǎng)時(shí)加入藥物拮抗劑。采集標(biāo)本時(shí)不可用消毒劑，必要時(shí)可用生理鹽水沖洗，擦干后取材。 （4） 標(biāo)本必須新鮮，采集后及早送檢。在送檢過(guò)程中，除少數(shù)不耐寒的腦膜炎球菌等細(xì)菌需保溫外，多數(shù)菌的標(biāo)本均需冷藏送運(yùn)。 （5）檢測(cè)特異性抗體時(shí)盡量采取急性期與恢復(fù)期雙份血清。第一份盡可能在發(fā)病后立即采取，第二份在發(fā)病后2～3周采取。

3、血清標(biāo)本放4℃或-20℃保存，試驗(yàn)前血清標(biāo)本56℃處理30分鐘以滅活補(bǔ)體。,細(xì)菌感染的實(shí)驗(yàn)室診斷,標(biāo)本染料、熒光染色后直接顯微鏡檢查。細(xì)菌的分離培養(yǎng)與鑒定： 菌落 (colony)：采用分離劃線接種法將細(xì)菌臨床標(biāo)本接種于固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)后出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)、單個(gè)細(xì)菌分裂繁殖形成的細(xì)菌集落 (純種細(xì)菌)。 不同細(xì)菌大小、形狀、顏色、氣味、透明度、表面光滑或粗糙、濕潤(rùn)或干燥、邊緣整齊或不整齊

4、、溶血情況等均可能有所不同，有助于鑒定細(xì)菌。 染色鏡檢、 生化試驗(yàn)、血清學(xué)試驗(yàn)(已知抗體測(cè)抗原) 藥物敏感試驗(yàn)：選擇敏感抗生素。,細(xì)菌標(biāo)本常規(guī)病原學(xué)檢查,多聚酶鏈反應(yīng) (polymerase chain reaction，PCR)：提取細(xì)菌臨床標(biāo)本總DNA或RNA，采用16 S RNA編碼基因或其他靶基因特異性引物對(duì)進(jìn)行PCR或RT-PCR擴(kuò)增，反應(yīng)產(chǎn)物用溴乙錠染色的瓊脂糖凝膠電泳觀察，目前多采用封閉式實(shí)時(shí)熒

5、光定量PCR或RT-PCR檢測(cè)。PCR優(yōu)點(diǎn)與缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)是快速、敏感、特異，缺點(diǎn)是不能獲得活菌。,細(xì)菌標(biāo)本分子生物學(xué)檢查：PCR/RT-PCR,血清學(xué)檢查 (serological examination)：病原菌侵入人體可刺激機(jī)體免疫系統(tǒng)產(chǎn)生特異性血清抗體，抗體水平可隨細(xì)菌感染過(guò)程逐漸升高價(jià)升高。用已知的抗原檢測(cè)病人體液（主要為血清）中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，可作為某些感染性疾病的診斷或輔助診斷。多數(shù)血清學(xué)診斷通常采取患者雙

6、份血清，一份在疾病的急性期，另一份在恢復(fù)期（一般為2～6周后），當(dāng)?shù)诙菘贵w效價(jià)較第一份升高4倍及以上才有診斷價(jià)值。 單份血清檢查結(jié)果根據(jù)該病效價(jià)判斷標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行判定。IgM出現(xiàn)早、消失快，可用于血清學(xué)早期診斷。方法：ELISA、直接或間接凝集試驗(yàn)、中和試驗(yàn)等。,血清學(xué)檢查或診斷,人工主動(dòng)免疫：接種疫苗，是預(yù)防傳染病常用方法，免疫力出現(xiàn)慢但維持時(shí)間長(zhǎng)。疫苗種類：目前使用的有全菌死疫苗、減毒活疫苗 、基因工程疫苗、類毒素疫苗。人工

7、被動(dòng)免疫：主要是抗毒素 (外毒素中和抗體)。免疫力出現(xiàn)快但維持時(shí)間短?？苟舅厥莿?dòng)物血清，使用前做皮試防止發(fā)生過(guò)敏反應(yīng)?？股刂委煟呵嗝顾仡悺㈩^孢菌素類、大環(huán)內(nèi)酯類、喹諾酮類、四環(huán)素類。細(xì)菌對(duì)抗生素可產(chǎn)生耐藥性，臨床使用抗生素時(shí)應(yīng)遵守如下原則：①選擇敏感抗生素；②劑量合適；③長(zhǎng)期使用時(shí)交替用藥；④聯(lián)合用藥。,細(xì)菌感染的防治原則,滅菌 (sterilization)：殺滅所有微生物的方法，包括病原微生物、非病原微生物及芽胞。消毒 (di

8、sinfection)：殺滅病原微生物的方法，但不一定能殺死非病原微生物，一般不能殺滅芽胞。消毒劑。抑菌 (bacteriostasis)：抑制體內(nèi)或體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法。如抗生素。 防腐 (antisepsis)：防止或抑制體外細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖的方法，細(xì)菌一般不死亡。防腐劑。無(wú)菌 (asepsis) ：不存在活的微生物。無(wú)菌操作：防止微生物進(jìn)入人體或物品的操作技術(shù)。,消毒與滅菌,干烤：用干烤箱160℃加熱2 h可達(dá)到滅菌效果

9、，適用于耐高溫的玻璃器皿等物品。高壓蒸汽滅菌法：使用高壓蒸汽滅菌器121℃加熱15～20 min可達(dá)到滅菌效果。煮沸法：細(xì)菌繁殖體在沸水中5 min可被殺死。巴氏消毒法：61.1-62.8℃加熱30 min和72℃加熱15 s，目前主要用于酒類、疫苗的消毒。,常用消毒與滅菌法,紫外線消毒法：以265～266 nm紫外線能使DNA一條鏈中相鄰的兩個(gè)胸腺嘧啶形成二聚體，干擾了DNA復(fù)制與轉(zhuǎn)錄而導(dǎo)致細(xì)菌死亡。紫外線穿透力弱，僅用于空

10、氣和物體表面消毒。,常用消毒與滅菌法,電離輻射 ：常用60Co對(duì)一次性醫(yī)用塑料制品進(jìn)行滅菌，也可用于食品、藥品和生物制品的滅菌（工業(yè)用）。濾過(guò)除菌法 ：0.22 µm孔徑濾器可除去細(xì)菌，0.10 µm孔徑可除去支原體。低溫抑菌法：抑菌不殺菌。真空冷凍干燥法 ：細(xì)菌懸液凍結(jié)，負(fù)壓使水分升華后干燥，可長(zhǎng)期保存菌種。化學(xué)消毒劑：75%乙醇，其他濃度高、時(shí)間長(zhǎng)、效果好。,常用消毒與滅菌法,生物安全：病原微生物危害等級(jí)