海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)鰻弧菌分離株的血清型和基因型鑒定.pdf

1、CharacterziationofSerotypeandgenotypeofVibrioanguillarumstrainsisolatedfrommarinefishThesissubmittedtoQingdaoAgoculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeOf—MasterofAgronomy1一一ZhaoLuning(CollegeofAnimalS

2、cienceandVeterinaryMedicine)Supervisor：ProfZhangLecuiProfMoZhaolanQingdaoChinaJune2014青島農(nóng)業(yè)大學(xué)碩上學(xué)位論文摘要海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)鰻弧菌分離株的血清型和基因型鑒定摘要鰻弧菌(Vibrioanguillarum)屬于革蘭氏陰性茵，是海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的主要病原菌，給水產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。鰻弧菌有23種血清型，其中01、02、03為主要的致病菌。本研究將本實(shí)驗(yàn)室

3、近10年分離和收集自海水養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)的鰻弧茵臨床菌株進(jìn)行生理生化和抗生素敏感性檢測(cè)、血清學(xué)分型、基因分型，旨在了解我國(guó)海水魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖環(huán)境的鰻弧菌的血清型，分析血清型與基因型的關(guān)系，為進(jìn)行鰻弧茵分子流行病學(xué)研究及疾病控制打下基礎(chǔ)。主要研究?jī)?nèi)容如下：1生理生化和16SrRNA基因分析：共有36株菌用于研究(包括3l株臨床分離株和5株標(biāo)準(zhǔn)株)。用APIID32E鑒定系統(tǒng)分析菌株的生理生化特征，結(jié)果顯示，所有菌株顯示吲哚反應(yīng)陽(yáng)性，在賴氨酸脫羧酶、脲酶

4、、L阿拉伯糖醇、5酮基葡萄糖酸鈉、側(cè)金盞花醇、p葡萄糖酸酶、N乙酰D葡萄糖苷酶、D阿拉伯糖醇、肌醇的反應(yīng)顯示為陰性；多數(shù)菌株的精氨酸雙水解酶(861％)、J3葡萄糖苷酶(861％)和D半乳糖苷酶(972呦的反應(yīng)為陽(yáng)性。鰻弧茵菌株既有穩(wěn)定的生理生化性狀，也有生理生化性狀的多樣性，但利用APl32E未能將待檢菌株鑒定到種的地位。為此，將擴(kuò)增得到的16SrRNA基因序列在GenBank上進(jìn)行BLAST，結(jié)果顯示有3l株菌與鰻弧菌相似性為991

5、00％，在系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)中聚為一類(lèi)，具有最近親緣關(guān)系。根據(jù)這個(gè)結(jié)果將31株待測(cè)菌株鑒定為鰻孤菌。2抗生素敏感性分析：利用ATB檢測(cè)系統(tǒng)分析菌株的抗生素敏感性，結(jié)果顯示，90％以上菌株對(duì)24種抗生素敏感；有806％(29株)菌的對(duì)9~16種的抗生素產(chǎn)生耐藥，有25％(9株)的菌株對(duì)16種以上的抗生物產(chǎn)生耐藥。其中，所有菌株對(duì)林可霉素、夫西地酸、甲硝唑、阿莫西林、阿莫西林／克拉維酸、苯唑西林、青霉素等7種抗生素耐藥，944％(34株)的菌株對(duì)紅