簡(jiǎn)青霉對(duì)有毒有害物質(zhì)的降解及其誘變選育的初步研究.pdf

1、酚類(lèi)和苯胺類(lèi)化合物是重要的化工原料和中間體,活性艷藍(lán)(RemazalBrilliant Blue R,簡(jiǎn)稱(chēng)RBBR)是一種蒽醌染料,它們?cè)诠I(yè)生產(chǎn)中都被廣泛應(yīng)用,并隨著工業(yè)廢水的排放進(jìn)入水體、土壤中。由于它們化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定、殘效期長(zhǎng)、毒性高,被認(rèn)為是環(huán)境中主要的有機(jī)污染物。它們的生物危害性及在自然環(huán)境中的遷移、轉(zhuǎn)化與降解也一直是全世界研究的熱點(diǎn)。
　　 本課題利用簡(jiǎn)青霉對(duì)幾種酚類(lèi)和苯胺類(lèi)物質(zhì)及活性艷藍(lán)進(jìn)行了降解研究,為難降解有

2、機(jī)物的生物降解提供研究基礎(chǔ)。并先后采用物理誘變和化學(xué)誘變的方法對(duì)簡(jiǎn)青霉進(jìn)行了誘變研究,以期獲得產(chǎn)漆酶較高的菌株。
　　 首先在培養(yǎng)4 d的簡(jiǎn)青霉培養(yǎng)體系中,分別加入不同濃度的酚類(lèi)和苯胺類(lèi)物質(zhì),觀察這些有毒物質(zhì)對(duì)簡(jiǎn)青霉生長(zhǎng)的影響,并研究簡(jiǎn)青霉對(duì)這幾種有毒物質(zhì)的降解效果。同時(shí),對(duì)液體培養(yǎng)條件下簡(jiǎn)青霉產(chǎn)漆酶的能力進(jìn)行了檢測(cè)。結(jié)果表明:低濃度的酚類(lèi)和苯胺類(lèi)物質(zhì)能促進(jìn)簡(jiǎn)青霉的生長(zhǎng),高濃度的這些物質(zhì)則對(duì)簡(jiǎn)青霉的生長(zhǎng)有一定的抑制作用。簡(jiǎn)青霉對(duì)

3、酚類(lèi)和苯胺類(lèi)物質(zhì)的降解隨時(shí)間的變化與簡(jiǎn)青霉的漆酶活性隨時(shí)間變化在整體趨勢(shì)上是一致的。同時(shí)簡(jiǎn)青霉能夠很好地催化氧化苯酚,2,4-二氯苯酚和苯胺。當(dāng)分別控制苯酚濃度為500μg·ml-1、2,4-二氯苯酚濃度為50μg·ml-1、苯胺的濃度為1000μg·ml-1時(shí),簡(jiǎn)青霉對(duì)它們的降解率都接近100％。在2,4-二氯苯酚濃度為60-125μg·ml-1、苯胺濃度為2000-5000μg·ml-1時(shí),簡(jiǎn)青霉對(duì)它們的降解率分別達(dá)到60％、65％

4、以上。簡(jiǎn)青霉對(duì)對(duì)硝基苯酚和對(duì)硝基苯胺降解效果不明顯,在研究的濃度范圍內(nèi),簡(jiǎn)青霉對(duì)它們的降解率只在10％左右。
　　 其次針對(duì)簡(jiǎn)青霉在不同條件下對(duì)葸醌染料RBBR的脫色情況進(jìn)行了研究。分別以底物濃度、接種的菌液量、pH值、培養(yǎng)時(shí)間、溫度作為單一變量,研究簡(jiǎn)青霉對(duì)于RBBR的脫色率。研究結(jié)果表明RBBR的脫色情況均較好,簡(jiǎn)青霉對(duì)于RBBR的脫色主要是生物吸附與生物降解。在振蕩培養(yǎng)條件下,當(dāng)RBBR濃度為60μg·ml-1,菌液接種量

5、為4 ml(107個(gè)/ml的懸浮液),pH為5.5,溫度為37℃,菌齡為4 d時(shí),簡(jiǎn)青霉對(duì)RBBR的脫色率達(dá)到最大值96.96％。
　　 最后,為獲得產(chǎn)漆酶較高的菌株,本課題對(duì)簡(jiǎn)青霉進(jìn)行了誘變研究,先后對(duì)簡(jiǎn)青霉的原始菌株進(jìn)行了化學(xué)誘變和紫外誘變,并經(jīng)PDA-RBBR平板培養(yǎng)基對(duì)誘變后的菌株進(jìn)行初篩,篩選出使平板褪色較好的誘變菌株再通過(guò)固體發(fā)酵培養(yǎng),用ABTS法測(cè)漆酶產(chǎn)量,復(fù)篩出一株產(chǎn)漆酶能力較高的菌株C5E4。將誘變菌株C5E4