兩種不同生物型稻褐飛虱基因表達(dá)差異.pdf

1、稻褐飛虱[Nilavarpata lugens (st l ]是亞洲水稻的最重要的害蟲之一。在我國，每年遭受稻褐飛虱為害的水稻面積達(dá)2～3億畝，年損失稻谷10～15億公斤。對于該蟲不同生物型之間的差異、該蟲發(fā)生發(fā)展規(guī)律及其綜合防治措施等國內(nèi)外都進(jìn)行了廣泛的研究，并已取得了長足的進(jìn)展。為了進(jìn)一步探討稻褐飛虱致害性轉(zhuǎn)化(生物型轉(zhuǎn)變)的分子機(jī)制，本課題在前人研究的基礎(chǔ)上，利用熒光差異顯示的方法對稻褐飛虱兩種生物型基因表達(dá)差異進(jìn)行了初步的研究，

2、取得了下列幾個(gè)方面的主要結(jié)果和結(jié)論： 1)進(jìn)行了20個(gè)FDD-PCR反應(yīng)獲得了30個(gè)差異片段。 2)進(jìn)行PCR二次擴(kuò)增得到了穩(wěn)定的差異條帶22條。約有1／4的差異條帶回收后，再次擴(kuò)增時(shí)未能擴(kuò)增出的條帶，可能是假陽性結(jié)果。 3)對差異片段進(jìn)行克隆測序，克隆到了10個(gè)cDNA片段。它們的編號(hào)依次為6-2-2(543bp)、6-l-5(517bp)、6～4(499bp)、7-l-1(233bp)、14-8(400bp)

3、、6-l-l(277bp)、15-l～2(279bp)、2-1-4(266bp)、3-3-ll(290bp)和8-1-6(420bp)。其中6-2-2、6-4、3-3-11、15-1-2在生物型Ⅱ中表達(dá)量較高，而其他的6個(gè)在生物型I中表達(dá)量較高。在NCBI BLAST數(shù)據(jù)庫中進(jìn)行同源性分析，結(jié)果顯示6-2-2與稻褐飛虱的羧酸酯酶前體基因有很高的同源性，6-1-1與人的超氧歧化酶l基因有很高的同源性。而其它的8個(gè)沒有找到與之匹配的已報(bào)道的

4、基因，推斷可能是新基因。 4)對6個(gè)差異較顯著的cDNA片段運(yùn)用熒光定量PCR進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果是其中14-8在生物型I中的表達(dá)量比其在生物型T和生物型Ⅱ中的高2倍多(P=O.000)，但是在生物型T和生物型Ⅱ中的差異不顯著(P=0.462)。7-1-1在生物型I中的表達(dá)量大約是其在生物型T和生物型Ⅱ中的2倍(P=0.02)，但是在生物型T和生物型Ⅱ中的差異不顯著(P=0.969)。6-2-2在生物型Ⅱ中的表達(dá)量大約是其在生物型T和

5、生物型I中的2倍(P=0.000)。6-4的表達(dá)情況與6-2-2的相似。6-1-1在生物型I中的表達(dá)量是其在生物型T和生物型Ⅱ中的2倍多(P=O.003)。結(jié)果表明，稻褐飛虱不同生物型間不只是在致害表型和遺傳背景上存在顯著差異，而且在基因表達(dá)水平上亦存在顯著差異。5)成功構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a-cae-M和桿狀病毒表達(dá)轉(zhuǎn)移質(zhì)粒Htb-cae-M。SDS-PAGE和Western B1Ot表明羧酸酯酶成熟蛋白基因在原核和桿狀病毒表