總結(jié)ctdna檢測

1、基于分子標(biāo)志物檢測技術(shù)的 NSCLC 精準(zhǔn)治療實踐,林能明 杭州市第一人民醫(yī)院 杭州市轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究中心,,概述,生物標(biāo)記物(Biomarker)是近年來隨著免疫學(xué)、分子生物學(xué)和基因組學(xué)技術(shù)的發(fā)展而提出的一類與細胞生長、增殖、疾病發(fā)生等有關(guān)的標(biāo)志物。生物標(biāo)志物能反映正常生理過程或病理過程或?qū)χ委煾深A(yù)的藥物反應(yīng)，在早期診斷、疾病預(yù)防、藥物靶點確定、藥物反應(yīng)以及其他方面發(fā)揮作用。尋找和發(fā)現(xiàn)有價值的生物標(biāo)記物已經(jīng)成為目前腫瘤

2、領(lǐng)域研究的一個重要熱點。,基于分子標(biāo)志物的腫瘤靶向治療,,概述,靶基因檢測是實現(xiàn)精準(zhǔn)個體化治療的關(guān)鍵,,概述,靶人群,臨床獲益,延長有效率延長生存改善生活質(zhì)量,靶向治療：有明確的靶向目的基因的藥物、靶人群及有效的檢測方法。而準(zhǔn)確的檢測是實現(xiàn)精準(zhǔn)治療的基礎(chǔ)與關(guān)鍵,敏感高效的驅(qū)動基因檢測,靶向目的基因藥物,基于臨床分期的經(jīng)典NSCLC治療方案,,概述,驅(qū)動基因分型成就NSCLC個體化精準(zhǔn)治療,肺癌分期從組織分型到分子分型的變革，以EG

3、FR突變?yōu)榇淼腡KI治療是靶向治療前驅(qū)與典范易瑞沙對EGFR突變患者受益率達71.2%，效果明顯優(yōu)于化療，對無突變患者受益率僅為1.1%,,概述,,Li TH et al. J Clin Oncol 2013 31 1039-1049,作為金標(biāo)準(zhǔn)的組織靶基因檢測亦存在局限性,,一、ctDNA檢測技術(shù),外周血中游離腫瘤DNA的來源,,ctDNA檢測,組織與血液配對標(biāo)本EGFR突變的研究回顧,,ctDNA檢測,外周血（DHPLC）檢測與

4、組織檢測EGFR突變及其與TKI靶向藥物治療的療效,外周血（ARMS）檢測與組織檢測EGFR突變及其與TKI靶向藥物治療的療效,,,外周血檢測EGFR突變與TKI治療療效,Mok T, et al. 2013 Lancet Oncology,Bai , et al. J.Clin.Oncol:2009,Overall Survival,,ctDNA檢測,ARMS技術(shù)：血液ctDNA基因檢測,,ctDNA檢測,非小細胞肺癌EGFR突變陽性

5、患者經(jīng)TKI治療失敗后血漿游離腫瘤DNA中T790M突變頻率及豐度的前瞻性觀察研究 多中心研究 PI: 馬勝林教授 研究發(fā)起方：杭州市第一人民醫(yī)院集團,,,ctDNA檢測,TKI治療失敗的不同臨床模式下的耐藥分子模型,科學(xué)問題：耐藥的分子模式尚未明確研究方法：ARMS檢測技術(shù)結(jié)合ddPCR技術(shù),研究目的:非小細胞肺癌EGFR突變陽性患者經(jīng)TKI治療失敗后，觀察：血漿游離腫瘤DNA中T790M突

6、變頻率及豐度不同進展模式下突變頻率及豐度的差異,,ctDNA檢測,男性或女性患者（>18歲）組織或細胞學(xué)確診NSCLCTKI治療前為IIIB-IV期TKI治療有效后出現(xiàn)PD（符合Jackman耐藥標(biāo)準(zhǔn)）,取外周血5ml X 4管,收集患者臨床病理資料記錄腫瘤不同進展模式無癥狀疾病進展有癥狀疾病進展胸內(nèi)局部進展顱內(nèi)進展其它進展,ARMS法檢測,ddPCR法檢測,主要指標(biāo)：觀察TKI治療失敗后患者血漿游離腫瘤DNA

7、中T790M突變頻率及豐度，并比較不同進展模式下突變頻率及豐度的差異,次要指標(biāo)：評估T790M突變頻率及豐度與患者臨床病理特征的相關(guān)性,篩選入組,入組后處理,T790M突變檢測,結(jié)果分析,數(shù)據(jù)分析,,,,研究方案,N＝300,,ctDNA檢測,,,ctDNA檢測,現(xiàn)有方法血液檢測特異性90%以上 假陽性率低但靈敏度從43-100%不一 尚有提升的空間,對現(xiàn)有方法的進一步優(yōu)化, 探索高靈敏度的檢測方法, 以提高血液檢測的靈敏

8、度積累前瞻性的臨床研究數(shù)據(jù),以進一步推動血液檢測在臨床的應(yīng)用實現(xiàn)動態(tài)實時血液活檢, 更好預(yù)測療效或耐藥是方向,小 結(jié) (1),,ctDNA檢測,經(jīng)驗性多藥聯(lián)合方案，方案的合理、有效性無法預(yù)見。同病不同治、同人不同治如何判定？在取得療效的同時，如何避免或減輕副作用？成本和療益相關(guān)性不好，加重國家和個人經(jīng)濟負擔(dān)。,腫瘤個體化治療越來越受到臨床醫(yī)生、患者及其家庭的關(guān)注,傳統(tǒng)化療的困境與挑戰(zhàn),,二、CD-DST技術(shù)（膠

9、滴腫瘤藥敏檢測技術(shù)）,原代培養(yǎng)成功率、試驗成功率低藥物接觸濃度過高→ 真陽性率低 （藥敏試驗判斷為敏感的抗癌藥物實際臨床效果不顯著）無法區(qū)分混在一起的成纖維細胞和癌細胞缺乏臨床驗證數(shù)據(jù),,CD-DST技術(shù),傳統(tǒng)體外抗癌藥物敏感性試驗的問題點,新型體外抗癌藥物敏感性試驗幫助化療藥物選擇,,medium,新型體外抗癌藥物敏感性試驗方法：CD-DST法,,CD-DST技術(shù),CD-DST技術(shù)實現(xiàn)個體化化療方案制定,方法要點 體

10、外藥物敏感性檢測技術(shù) 膠原凝膠液滴包埋技術(shù) 原代腫瘤細胞三維維培養(yǎng) 在凝膠滴外添加藥物 圖像分析系統(tǒng),檢測流程,,,CD-DST技術(shù),檢測流程,21,比較兩組無復(fù)發(fā)生存,對象：stage II-IIIB非小細胞肺癌病例,,根治手術(shù),術(shù)后輔助化療,,,,CD-DST試驗,,versus,(n=41),大阪府立成人病中心　呼吸器外科,非小細胞肺癌術(shù)后輔助化療,,CD-DST技術(shù),22,Days aft

11、er operation,大阪府立成人病中心　呼吸外科＆腫瘤內(nèi)科,,75%,治療方案；CDDP+VNRCDDP+DOCCBDCA+PACCDDP+GEM,31%,2年無復(fù)發(fā)生存率A群75% vs　 P=0.05B群31%※復(fù)發(fā)幾率降低,對象：p-Stage II-IIIB 非小細胞肺癌切除病例,P=0.05,PFS,非小細胞肺癌術(shù)后輔助化療,,CD-DST技術(shù),CD-DST技術(shù)采用膠原凝膠三維立體及無血清

12、培養(yǎng)體系，從技術(shù)原理上彌補了傳統(tǒng)體外抗癌藥物敏感性試驗法的缺陷，可較客觀的再現(xiàn)體內(nèi)的藥物敏感性。目前有大量關(guān)于CD-DST指導(dǎo)化療預(yù)后改善的臨床驗證數(shù)據(jù)，并應(yīng)用于臨床。在非臨床領(lǐng)域，CD-DST技術(shù)可應(yīng)用于抗腫瘤新藥的研發(fā)及新型藥敏標(biāo)志物的篩選等。,小 結(jié) (2),,CD-DST技術(shù),腫瘤實時監(jiān)測的困難與挑戰(zhàn),如何有效的監(jiān)測，使用什么手段進行監(jiān)測？,,三、CTC檢測,腫瘤實時監(jiān)測的意義,Nature Medicine V

13、olume: 19, 1450–1464,,方面一：監(jiān)測腫瘤動態(tài)，復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移早發(fā)現(xiàn)、早干預(yù),方面二：療效的及時評價，耐藥及機制的檢測，及時調(diào)整并選擇有效治療方案,,CTC檢測,循環(huán)腫瘤細胞(CTC),實體瘤或轉(zhuǎn)移灶釋放進入外周血循環(huán)的腫瘤細胞在外周血循環(huán)中大多數(shù)短期內(nèi)發(fā)生凋亡，或被吞噬，極少數(shù)高度活力與轉(zhuǎn)移潛能的存活下來發(fā)展為轉(zhuǎn)移灶腫瘤細胞進入外周血循環(huán)是發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移先決條件，外周血中檢測到腫瘤細胞預(yù)示著發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移的可能,Canc

14、er Res. 2003;63: 3805-11.；Breast Cancer Res. 2009;11:R46.；Am J Pathol. 2011;178:989-96.,,CTC檢測,,美國FDA相繼批準(zhǔn)CellSearch用于前列腺癌、結(jié)直腸癌患者的預(yù)后評估,,,1986年,2004年,2007/2008年,2012年,1986年Thomas Ashworth首次在1例轉(zhuǎn)移性癌癥患者血液中觀察到CTC,美國FDA批準(zhǔn)

15、CellSearch用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的預(yù)后預(yù)測,中國CFDA批準(zhǔn)CellSearch用于乳腺癌患者的預(yù)后 分析,CTC檢測發(fā)展歷程,,CTC檢測,CTC檢測技術(shù)實現(xiàn)腫瘤動態(tài)檢測,,CTC檢測,CTC 用于實時動態(tài)監(jiān)測,,我們的研究團隊對接受放射治療的非小細胞肺癌患者進行外周血CTC監(jiān)測檢測時間點：放療前，放療期間，放療后。隨訪4周,CTC數(shù)量的變化與疾病狀態(tài)的變化密切相關(guān),,CTC檢測,合作伙伴益善生物提供,游離CTCs

16、作為TNM輔助分期,,CTC檢測,Clin Cancer Res. 2009 Nov 15;15(22):6980-6,CTC數(shù)量和遠端轉(zhuǎn)移呈密切的相關(guān)性CTC提高TNM輔助分期準(zhǔn)確性，成為指導(dǎo)肺癌治療和判斷預(yù)后的敏感指標(biāo)？,對腫瘤疾病狀態(tài)實時監(jiān)測的影響 CTCs動態(tài)的計數(shù)，分型使得能夠其在傳統(tǒng)診療技術(shù)的基礎(chǔ)上進一步優(yōu)化對腫瘤狀態(tài)的實時監(jiān)測對實時個體化治療的影響 CTCs的分子分析，有望綜合反映腫瘤分子

17、病理學(xué)背景，實時提供腫瘤分子信息，推進腫瘤實時的個體化治療個體化治療時代腫瘤實時監(jiān)測的實現(xiàn) 還需要突破性技術(shù)對CTCs進行分離、分型和分析，將腫瘤狀態(tài)實時監(jiān)測和腫瘤個體化治療有機結(jié)合,小 結(jié) (3),,CTC檢測,術(shù)前新輔助治療,術(shù)后輔助治療,手術(shù),,,,,,,,四、總結(jié),ctDNA檢測、CD-DST技術(shù)和CTC檢測在NSCLC治療中的綜合應(yīng)用,檢測外周血ctDNA,活檢組織標(biāo)本+手術(shù)標(biāo)本,2、篩選體外敏感的化

18、療藥物,1、篩選適用EGFR-TKI的靶人群,外周血捕獲CTC,3、動態(tài)監(jiān)測腫瘤發(fā)展、藥物響應(yīng),,調(diào)整治療方案,,局部晚期治療,,,,總結(jié),ctDNA檢測、CD-DST技術(shù)和CTC檢測在NSCLC治療中的綜合應(yīng)用,手術(shù)或活檢組織標(biāo)本,三維培養(yǎng)原代細胞,2、篩選對放療敏的人群,1、體外篩選敏感的化療藥物,外周血捕獲CTC,3、動態(tài)監(jiān)測腫瘤發(fā)展、藥物響應(yīng),,調(diào)整治療方案,,ctDNA檢測、CD-DST技術(shù)和CTC檢測在NSCLC治療中的

19、綜合應(yīng)用,晚期治療,檢測外周血ctDNA,活檢組織標(biāo)本,2、篩選體外敏感的化療藥物,1、篩選適用EGFR-TKI的靶人群,,,外周血捕獲CTC,3、動態(tài)監(jiān)測腫瘤發(fā)展、藥物響應(yīng),,調(diào)整治療方案,,,總結(jié),,Population Screening,,Targeted Therapy,Optimal Chemotherapy,OR,,Fluid Biopsy Analysis,,Regimen Optimization,,總結(jié),Precis