中護微生物實驗3細菌分布檢查與消毒滅菌實驗

1、實驗三,細菌分布檢查與消毒滅菌實驗,實驗?zāi)康?1.學(xué)會不同部位細菌的檢查方法。2.掌握常用的消毒滅菌方法及其儀器的使用。 3.了解藥敏實驗的結(jié)果及意義。,實驗內(nèi)容與方法,一、細菌的分布檢查1.空氣中細菌檢查2.咽喉部細菌的檢查二、消毒滅菌的實驗1.皮膚消毒實驗2.熱力滅菌實驗3.紫外線殺菌實驗4.常用消毒滅菌器及除菌濾器介紹三、藥物敏感實驗

2、 常用消毒器械的介紹,一、細菌的分布檢查,1.空氣中細菌的檢查 材料:瓊脂平板 方法:將制作好的瓊脂平板敞開放置在空氣中5min -10min,后蓋上皿蓋，然后分別做好標記，37度溫箱內(nèi)培養(yǎng)18-24小時后觀察結(jié)果

3、。 意義：檢測環(huán)境達標與否,2.咽喉部細菌的檢查,(1)咽喉拭子法：材料：血平皿、咽拭子 方法：1. 用干凈棉簽咽部取材； 2. 將取得樣本以分區(qū)劃線形式接種在血平皿上； 3. 37℃ 溫箱內(nèi)孵育24小時后觀察結(jié)果。,(2)咳碟法,取血平板一個，將蓋打開，置于距口腔10厘米處，用力咳嗽數(shù)次，然后蓋好，置37度溫箱培養(yǎng)18-24小時觀察結(jié)果。,二、消毒滅菌的實驗,1.皮膚消毒試驗（操作）每兩名學(xué)生用一個瓊脂平板，先在平

4、板底部用蠟筆畫分5格，標明序號。兩人用未消毒手指分別在1、2格內(nèi)涂布。然后用2%碘酒消毒手指后再分別涂抹3、4格，余下第5格作為空白對照。蓋上皿蓋，置37度溫箱培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果。,皮膚消毒實驗 材料：瓊脂平板、2.5%碘酒、75%酒精棉球 方法： 37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)24小時 意義：比較皮膚消毒前后細菌分布情況,,,消毒前,消毒后,,,2.熱力

5、滅菌實驗（示教）,取4支肉湯培養(yǎng)基標以1、2、3、4號1、2號接種大腸埃希菌（無芽孢菌）3號接種枯草芽胞桿菌（芽胞菌）4號管不接種細菌作對照。將其中1、3號同時放入100度水浴內(nèi)煮沸5分鐘。然后將4支管同時置37度溫箱培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果。,3.紫外線殺菌實驗 材料：瓊脂平板、細菌培養(yǎng)物、滅菌長方形紙片方法：取普通瓊脂平板一個，密集畫線接種大腸埃希菌。用無菌鑷子把滅菌長方形紙片貼于平板表面中央。打開平皿蓋的2/3，置

6、于紫外燈下距離約20-30厘米處照射30分鐘，除去紙片，蓋好平皿蓋，置37度溫箱培養(yǎng)24小時觀察結(jié)果。原理：損傷DNA，阻止DNA的復(fù)制,4.常用消毒滅菌器及除菌濾器介紹,高壓蒸汽滅菌器 干烤箱（干熱滅菌器） 濾器,三、藥物敏感實驗（紙片法）,方法：1. 取瓊脂平板一個用記號筆在平板底部標記貼抗生素紙片的位置。 2. 點燃酒精燈。用棉簽蘸取菌液，在瓊脂平板上密集而均勻地涂布。 3. 待培養(yǎng)基稍干后，無菌操作用鑷子分別取抗生

7、素紙片按標記位置貼在涂布細菌的培養(yǎng)基表面，各紙片距離大致相等。紙片放置后不要再挪動，因挪動將影響實驗結(jié)果。 4.把平板倒放在 37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng) 18～24 小時后取出觀察結(jié)果，測定抑菌環(huán)的大小。,三、藥物敏感實驗（紙片法）,抑菌環(huán)的形成：瓊脂平板內(nèi)含有大量的水分，紙片上的藥物具有水溶性。因此可逐漸擴散到周圍的培養(yǎng)基中，其濃度將隨與紙片距離的增加而逐漸降低，從而形成了以紙片為中心，藥物濃度逐漸減小的濃度剃度。當藥物濃度降低到某一程度時，

8、細菌足以抵抗其抑菌殺菌作用；在此范圍以外，細菌將正常生長，而在此范圍以內(nèi)則無細菌生長。以此界線為邊緣所形成的抑菌殺菌的區(qū)域稱為抑菌環(huán)。,三、藥物敏感實驗（紙片法）,測量抑菌環(huán)的大小，初步判定并比較細菌對不同藥物的敏感情況，判斷藥物的敏感度，一般以敏感、中度敏感、耐藥三個等級報告結(jié)果。,藥 敏 實 驗,材料：瓊脂平板、細菌培養(yǎng)物、藥敏紙片 方法：1. 挑取少量細菌培養(yǎng)物密集劃線； 2. 夾取青霉素及慶大霉素藥敏片各一片，