血漿脂蛋白代謝紊亂的生物化學檢驗

1、脂質(zhì)和脂蛋白代謝紊亂的生物化學檢驗,臨床檢驗教研室龔曉華,1,,1、掌握脂及脂蛋白代謝；脂代謝紊亂常用生化檢驗項目（TC、TG、HDL-C、LDL-C、LP（a）、apoA-I、aPOB）的檢測方法、參考區(qū)間及臨床意義,2、熟悉血漿脂蛋白的分類、高脂蛋白血癥的分型,3、了解血漿脂代謝相關酶的測定；臨床生化檢驗項目在脂代謝紊亂診治中的應用,本章教學要求：,2,第一節(jié) 概述,一、脂及脂蛋白相關的概念,3,（一）血漿脂蛋白的組成與結構,組成

2、：,主要由蛋白質(zhì)、三酰甘油、磷脂（PL）、游離膽固醇（FC）、膽固醇酯（CE）、游離脂肪酸（FFA）等成分組成。但其組成比例及含量卻相差很大。,相同點：蛋白質(zhì)+脂類(TG、PL、FC+CE),,不同點：(1) 蛋白質(zhì)和脂類的含量不同 (2) 蛋白質(zhì)(Apo)的種類及其含量不同,4,結構：,大致為球形顆粒，由兩大部分組成，即疏水性的核心和親水性的表層。核心由不溶于水CE與TG組成，表層由載脂蛋白、PL及FC組成，F(xiàn)C及PL

3、的極性基團向外露在血漿中，載脂蛋白是兼性化合物，它的疏水部分在脂蛋白中，而親水部分突出于脂蛋白顆粒的表面。,5,6,1、超速離心法：,乳糜微粒（CM）,極低密度脂蛋白（VLDL）,中間密度脂蛋白（IDL）,低密度脂蛋白（LDL）,高密度脂蛋白（HDL）,脂蛋白（a）（Lp(a)）,（二）血漿脂蛋白的分類,7,8,,各類脂蛋白顆粒的密度及體積,8,依據(jù)血漿脂蛋白分子中蛋白質(zhì)表面電荷多少的不同而分離。通?？煞殖桑?CM、pre-β-LP

4、、β-LP 、α-LP 四條區(qū)帶分別相當于CM、VLDL 、LDL、HDL  IDL也有β移動度，在IDL異常時可顯現(xiàn)寬β帶,2、電泳：,（一）血漿脂蛋白的分類,9,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,10,血漿脂蛋白的主要功能,1. CM 運輸外源性TG至外周組織2. VLDL 運輸內(nèi)源性TG至外周組織3. LDL 運輸膽固醇至外周組織

5、，與冠心病成正相關4. HDL 從外周組織逆轉(zhuǎn)運膽固醇至肝臟或其他組織再分布，與冠心病成負相關,11,（三）載脂蛋白,脂蛋白中的蛋白部分稱為載脂蛋白(Apo)，具有結合與轉(zhuǎn)運脂質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白結構等功能，在脂蛋白代謝中具有重要的生理功能。,定義：,1. 載脂蛋白的種類與功能：,按1972年的命名方法，用英文字母順序編碼，分為ApoA、ApoB、ApoC、ApoD、ApoE等。,12,Apo種類多，類--亞類—亞亞類。 ApoA ：

6、 ApoAI、ApoAII 和 ApoAIV ApoB ： ApoB100 和 ApoB48 ApoC ： CI、CII、CIII ApoD 及 ApoE、Apo(a)、 ApoH 、ApoJ,13,分 類,（三）載脂蛋白,13,14,14,功 能,①與脂質(zhì)的親和作用而使脂質(zhì)溶于水性介質(zhì)中。②運轉(zhuǎn)膽固醇和三酰甘油。③作為脂蛋白外殼的結構成分，與脂蛋白外生物信息相聯(lián)系。④以配體的形式作為脂蛋白與特異受體的

7、連接物。⑤激活某些與血漿脂蛋白代謝有關的酶類,（三）載脂蛋白,15,（四）脂蛋白受體,定義,脂蛋白受體是一類位于細胞膜上的糖蛋白。它能以高度的親和方式與相應的脂蛋白配體作用，從而介導細胞對脂蛋白的攝取與代謝，進一步調(diào)節(jié)細胞外脂蛋白的水平。,16,脂蛋白受體的作用：,不僅是運送脂蛋白至細胞所必需，也是從血和外周組織中有效清除具有潛在致動脈粥樣硬化的脂蛋白所必需的。,種類：,主要有LDL受體、殘粒受體及清道夫受體。,17,各種脂蛋白受體

8、功能,LDL受體 不僅能識別ApoB100，也可識別ApoE，在細胞結合、攝取和降解LDL及其它含ApoB100的脂蛋白過程中起中介作用，對維持細胞和全身膽固醇平衡起重要作用。,18,殘粒受體 能識別ApoE，是清除血液循環(huán)中CM殘粒和β-VLDL殘粒的主要受體，它也能結合含ApoE的HDL。,清道夫受體 主要存在于巨噬細胞表面,介導修飾LDL(包括氧化LDL和?-VLDL) 從血液循環(huán)中清除。,19,脂蛋白代謝

9、以肝臟為中心,二、脂及脂蛋白的代謝,20,參與脂蛋白代謝主要關鍵酶有:LPL 、HL(HTGL)、LCAT 、HMGCoAase特殊蛋白質(zhì)有:CETP、LRP、MTTP、SREBP均參與脂類代謝的多個環(huán)節(jié)。,血漿脂蛋白代謝,21,一、外源性脂質(zhì)代謝,22,外源性代謝途徑: CM代謝 (半壽期 < 1小時),TG,CE,TG,FC,PL,FFA,,,,,,,,腸壁細胞,,HDL,CM,CM殘粒,,,第 3 步,第 1

10、步,第 2 步,23,二、內(nèi)源性脂質(zhì)代謝,1.VLDL和LDL代謝,24,,,,,,,SR-A,,,,HDL,肝外細胞,,LDL-R,,Step 1,Step 2,Step 3,內(nèi)源性代謝途徑: VLDL、IDL、LDL代謝,,巨噬細胞,25,臨床觀察發(fā)現(xiàn)，有些患者的細胞表面受體缺乏或減少，致使血漿LDL含量增多，結果是血漿膽固醇和膽固醇酯濃度升高并沉積于血管壁，促進動脈粥樣硬化的發(fā)生,表現(xiàn)在心臟則引起冠心病。由于LDL中膽固醇

11、含量升高與冠心病發(fā)病率呈正相關，所以LDL中的膽固醇稱為壞膽固醇。,26,肝外絕大多數(shù)組織分解代謝膽固醇的能力有限。 需 將膽固醇運回肝臟, 以防在其中過多聚積。,,,,2.HDL逆向轉(zhuǎn)運代謝,27,高密度脂蛋白運載周圍組織中的膽固醇，再轉(zhuǎn)化為膽汁酸或直接通過膽汁從腸道排出，動脈造影證明高密度脂蛋白膽固醇含量與動脈管腔狹窄程度呈顯著的負相關。所以高密度脂蛋白是一種抗動脈粥樣硬化的血漿脂蛋白，是冠心病的保護因子所以HDL中的膽固醇稱為

12、好膽固醇。,28,脂蛋白代謝示意圖,29,三、脂蛋白代謝紊亂,（一）高脂蛋白血癥 （二）低脂蛋白血癥 （三）脂蛋白代謝紊亂與動脈粥樣硬化,30,高脂蛋白血癥是指血漿中CM、VLDL、LDL、HDL等脂蛋白有一種或幾種濃度過高的現(xiàn)象。,高脂蛋白血癥,原發(fā)性高脂蛋白血癥：是遺傳缺陷所致，如家族性高膽固醇血癥。繼發(fā)性高脂蛋白血癥：指某些原發(fā)病在病理演變過程中造成脂蛋白代謝紊亂，而繼發(fā)出現(xiàn)高脂蛋白血癥。如糖尿病、腎病綜合征、甲狀腺功能減退

13、癥等。,31,高脂蛋白血癥WHO分型及特征,32,黑線峰：正常圖形藍色峰：實際圖形,脂蛋白電泳圖譜,33,,,,,,血清外觀分析（血清冷置試驗）,34,二、甘油三酯,三、游離脂肪酸,一、總膽固醇,七、載脂蛋白A-I,六、脂蛋白(a),十、ApoA-I /ApoB、TC／HDL-C、TG/HDL-C、LDL-C/HDL-C比值,四、高密度脂蛋白膽固醇,五、低密度脂蛋白膽固醇,十一、卵磷脂膽固醇轉(zhuǎn)移酶測定,八、載脂蛋白B,九、載脂蛋白E,

14、十二、脂蛋白脂肪酶,第二節(jié) 脂代謝紊亂的生化檢驗項目與檢測方法,35,血脂、脂蛋白及載脂蛋白測定,血脂測定項目 TC、TG、HDL-C、LDL-C、Lp（a）、ApoAI、ApoB等。檢測項目的合理選擇 臨床常規(guī)血脂測定：TC、TG、HDL-C 及LDL-C這四項，有條件的實驗室可測定ApoAⅠ、ApoB及Lp(a)。 特殊檢查項目：如Apo（AⅡ、CⅠ、CⅡ、CⅢ和E）、FFA、CETP、LPL、LCAT測定等，多用于

15、科研或臨床特殊病例研究。,36,樣本收集與貯存注意事項,1、一般要求空腹12小時以上2、采血前必須保持安靜坐位至少5min（最好20min以上）；除臥床不起者外，采血時必須取坐位。3、止血帶使用時間必須＜1min，抽血時必須松開止血帶，因靜脈阻滯5min，可使TC升高10%--15%。4、樣本采集后應盡快進行檢測，放置時間不得大于3min，24h內(nèi)不能完成測定，可密封置于2--8℃保存一周。,37,一、總膽固醇（TC）,【參考范圍

16、】 合適：6.22mmol/L,【檢測方法】,臨床常規(guī)方法推薦為酶法（COD-PAP法），衛(wèi)生部推薦的參考方法是HPLC法。,膽固醇是人體重要的脂類成分，具有重要的生理功能，如合成類固醇激素，維生素D3膽汁酸，并構成細胞膜成分，TC包括FC（1/3）和CE（2/3），膽固醇與動脈粥樣硬化有密切關系，故膽固醇測定是最常用的實驗室檢測項目之一。,38,TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指標之外，不能作為其它任何疾病的診斷指標，對于動脈粥樣硬

17、化和冠心病而言，TC是一個明確的危險因子，與冠心病的發(fā)病率呈正相關。,【臨床意義】,血清膽固醇升高：動脈粥樣硬化、腎病綜合癥、肝細胞性黃疸、阻塞性黃疸及重癥糖尿病等。血清膽固醇降低：惡性貧血、溶血性貧血、甲狀腺機能亢進、急性感染，營養(yǎng)不良等。,39,二、甘油三脂（TG）,臨床上所測的甘油三酯是血漿中各脂蛋白所含甘油三酯的總和，甘油三脂受飲食和時相的影響較大，同一個體多次測定時，也可能有較大變異，因此TG生物學變異最大。,【檢測方法】,

18、臨床常規(guī)方法推薦為酶法，衛(wèi)生部推薦的參考方法是同位素稀釋氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法（ID-GC/MS）,【參考范圍】,在1.7mmol/L（150mg/dl）以下為合適范圍；1.7～2.25mmol/L（150～199mg/dl）為邊緣升高；2.26mmol/L（200mg/dl）以上為升高。,40,【臨床意義】,41,1、生理性改變：高脂飲食、肥胖、運動不足等2、病理性改變：輕至中度升高2.26-5.63mmol/l 患冠心病危險性

19、增加重度升高≥5.63mmol/l 可伴發(fā)急性胰腺炎3、低TG血癥：＜0.56mmol/l,三、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）,常以測定HDL-C含量代表HDL水平。HDL是血清中顆粒最小密度最大的一組脂蛋白，被視為人體內(nèi)具有抗動脈粥樣硬化的脂蛋白，同時與冠心病呈負相關，因而HDL-C被稱為好的膽固醇。,【檢測方法】,,臨床常規(guī)方法為勻相法。其原理是利用多聚體和聚陰離子在表面活性劑的作用下，對低密度、極低密度脂蛋白選擇性遮蔽的原

20、理，從而達到僅血清高密度脂蛋白中的膽固醇參與顯色反應的方法。,42,男性：1.16--1.42mmol/L女性：1.29--1.55mmol/L合適范圍為：1.55mmol/L（60mg/dl）-1.04mmol/L（40mg/dl）升高：＞1.55mmol/L（60mg/dl）降低：＜1.04mmol/L（40mg/dl）,【參考范圍】,43,【臨床意義】,HDL-C被證實是AS和心血管疾病的保護因子，一般認為隨著HDL-C水

21、平降低，缺血性心血管病發(fā)病危險增加，HDL-C＜1.04mmol/L的人群與HDL-C≥1.55mmol/L的人群相比，缺血性心血管病危險增加50%。,影響血漿（清）HDL-C水平的因素很多，主要有：①年齡和性別 ②種族 ③飲食 ④肥胖⑤飲酒與吸煙 ⑥運動 ⑦藥物 ⑧疾病,44,HDL亞類,HDL包括多個亞類α-HDL（HDL2a、HDL2b、HDL3a、HDL3b、HDL3c）和

22、β-HDL（前β1-HDL、前β2-HDL、前β3-HDL）。HDL的兩個主要功能抗炎抗氧化和抗AS，都可能通過某些亞類特別是HDL2和HDL3發(fā)揮作用，而不是全部HDL均發(fā)揮作用。目前HDL2和HDL3的主要作用包括（1）作為評估AS的危險因素，與冠心病密切相關，較總HDL好（2）HDL3在抗炎抗氧化方面發(fā)揮重要作用（3）HDL2在胰島素抵抗和肝硬化中發(fā)揮重要作用,45,四、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）,LDL-C在體內(nèi)主

23、要將內(nèi)源性脂質(zhì)轉(zhuǎn)運到外周組織利用，其水平更能反映個體的血脂水平，由于其含量升高與冠心病發(fā)病率呈正相關，所以LDL-C被稱為壞膽固醇,【檢測方法】,臨床常規(guī)方法為勻相法。,【參考范圍】,合適范圍為：4.14mmol/L（160mg/dl）,46,【臨床意義】,LDL-C是導致AS的主要脂類危險因素。與缺血性心血管病發(fā)生相對危險及絕對危險上升趨勢及程度與TC相似。增高見于家族性高膽固醇血癥（TC增高，LDL-C增高，伴有HDL-C減低）

24、，Ⅱa型高脂蛋白血癥（TC增高，LDL-C增高，TG正常或輕度增高）。,47,五、脂蛋白（a）[Lp（a）],含有特定的載脂蛋白[Apo（a）]的脂蛋白，合成于肝臟，其脂質(zhì)組成結構與LDL及其相似，密度介于HDL和LDL之間，其生理功能尚不清楚，可能是轉(zhuǎn)運脂質(zhì)到組織細胞。1988年被國際專題會議公認為動脈硬化的獨立危險因子。,【檢測方法】,免疫比濁法和ELISA,【參考范圍】,<300mg/L,48,【臨床意義】,1.生理性改變

25、 一般認為Lp（a）對同一個體相當恒定，但個體間差異很大，波動范圍在0～1.0mg/L。Lp（a）水平高低主要由遺傳因素決定，基本不受性別、年齡、飲食、營養(yǎng)和環(huán)境影響；2.病理性增高 缺血性心腦血管疾病 、心肌梗死、外科手術 、急性創(chuàng)傷、急性炎癥 、糖尿病腎病、腎病綜合癥、尿素癥，除肝癌以外的其他惡性腫瘤3.病理性減低 肝臟疾病（慢性肝炎除外）,49,六、載脂蛋白A-I（apoA-I）,載脂蛋白AⅠ主要存在于HDL中，在CM、V

26、LDL、LDL也有少量，主要功能是維持脂蛋白結構的穩(wěn)定和完整性。已證實ApoAⅠ是通過激活LCAT來催化膽固醇酯化，將多余的CE轉(zhuǎn)運至肝臟處理，因此apoA-I具有清除脂質(zhì)和抗AS的作用。,【檢測方法】,免疫透射比濁法,【參考范圍】,1.20-1.60g/L,50,【臨床意義】,血清apoA-I反映血液中HDL的數(shù)量，與HDL-C呈明顯正相關，與冠心病發(fā)生危險性呈負相關。冠心病患者、腦血管病患者水平降低apoA-I缺乏癥患者血清中a

27、poA-I、HDL-C水平極低糖尿病、慢性肝病、腎病綜合癥等降低apoA-I升高主要見于妊娠、雌激素療法、飲酒等,51,七、載脂蛋白B（apoB）,載脂蛋白B可分為兩個亞類，即ApoB48、ApoB100，前者存在于CM中，參與外源性脂質(zhì)的消化、吸收和運輸；后者存在于VLDL、LDL中，參與VLDL的裝配和分泌，在血液中，VLDL可代謝轉(zhuǎn)化為LDL。,【檢測方法】,免疫透射比濁法-常規(guī)方法,【參考范圍】,中青年：0.8-0.9g/L