香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化形成的影響

1、香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化形成的影響,設(shè)計者和執(zhí)行者：陳超 陳小羽 江澤紅 刁燕 杜圣富 孫永珍,香榧子油簡介,榧子為紅豆杉科Taxaceae植物榧樹To肼eyagrand括Fort．eX Lindl．的干燥成熟種子，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，歷版中國藥典均收載，具有殺蟲、消積、潤腸、通便之功效。其栽培品種香榧To用eya grandis CV．merriUii是我國特有經(jīng)濟樹種之一。其種子俗稱香榧子，為我國珍貴的干果，炒熟后香酥甘醇，

2、風(fēng)味獨特，品質(zhì)甚佳，營養(yǎng)豐富,香榧子油的藥理作用,,香榧子油,,。。。。。。,,,降血脂和降低血清膽固醇作用,,,調(diào)節(jié)老化的內(nèi)分泌系統(tǒng)的療效,,,軟化血管，促進血液循環(huán),,但未見有關(guān)香榧子油對預(yù)防動脈粥樣硬化形成的實驗研究報道,動脈粥樣硬化的發(fā)病機制,1.脂質(zhì)的作用：高膽固醇血癥引起內(nèi)皮功能障礙， 通透性增加2.內(nèi)皮損傷：各種因素對動脈內(nèi)皮的損傷，導(dǎo)致動脈壁的慢性炎癥應(yīng)答，

3、逐漸形成粥樣斑塊，是動脈粥樣硬化的始動因素 3.巨噬細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞的作用,主要內(nèi)容：,實驗?zāi)康?實驗設(shè)計,預(yù)測結(jié)果,4,1,2,3,,實驗假設(shè),實驗?zāi)康模?從血脂,斑塊面積／內(nèi)膜面積、內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜厚度／中膜厚度,巨噬細(xì)胞和平滑肌源性泡沫細(xì)胞等方面研究香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化形成的影響.,研究方面：,實驗假設(shè)：,香榧子油對實驗性動脈粥樣硬化形成可能有預(yù)防作用,,,,,,實驗儀器,實驗試劑,實驗方法及步驟,實驗對象,M1,M2,

4、M4,M3,實驗設(shè)計:,1）實驗儀器:,電子稱，試管，離心管，冰箱，手術(shù)器材，一次性塑料注射器，圖像分析儀島津UV．3000型紫外分光光度計，刖一182放射免疫卜計數(shù)儀。,2）實驗試劑：,基礎(chǔ)飼料（小麥粉39．2％、玉米粉15．1％、大米10．5％、豆粕15．1％、魚粉15．1％、酵母粉，3．8％、魚肝油0．7％及精鹽0．5％）,高脂飼料(基礎(chǔ)飼料82．5％、膽固醇2．0％、膽酸鈉0．5％、蛋黃粉5．0％及豬油10％),香榧子油飼料(

5、在高脂飼料的基礎(chǔ)上添加香榧子油(自提)，其量占飼料的2％)。生理鹽水、蒸餾水、乙醚。蘇丹Ⅲ染液，蘇木素依紅(HE)、間苯二酚品紅染色(ET+VG),2％戊二醛溶液,P0wervision一Pv6002試劑盒,3）實驗對象：,30只健康家兔,,,,4）實驗方法和步驟：,1.計算斑塊面積／內(nèi)膜面積比2.計算內(nèi)膜厚度／中膜厚度比3.計算巨噬細(xì)胞和平滑肌源性泡沫細(xì)胞陽性百分?jǐn)?shù),采用SPSS8．0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)的分析處理,,,,實驗分組與模

6、型建立,實驗步驟,統(tǒng)計分析,1.動物按體重隨機分3組2.建立高膽同醇飲食并免疫損傷誘導(dǎo)動脈粥樣硬化模型,實驗分組與模型建立,1.動物按體重隨機分3組，即正常對照組(基礎(chǔ)飼料組)、高脂對照組和香榧子油實驗組，每組10只動物。,,2. 模型組和香榧子油組建立高膽同醇飲食并免疫損傷誘導(dǎo)動脈粥樣硬化模型（2％高膽固醇飼料每只每日100克喂養(yǎng)，兩周后靜脈注射牛血清白蛋白2．50 mg／kg(以生理鹽水制成10％溶液注射)每周1次，共3次；正常組

7、注射等量生理鹽水，每周1次，共3次。同時香榧子油組予灌胃法給藥香榧子油[4 rag／(kg·d)]，相當(dāng)于75 mg／d的l臨床劑量，共12周，正常組和模型組灌等量蒸餾水。每周測量體重。）,實驗步驟：,1.在實驗分組與模型建立基礎(chǔ)上第4、8、12周時取尾血，取血前12小時禁食。2.第12周末取尾血后，乙醚麻醉，剖開胸腔心臟取血。3.所取尾血置于潔凈試管中后，2500 r／min離心5 min，取血清分裝于3～4支1．5ml

8、塑料尖底離心管中于0.30度冰箱保存，用酶學(xué)法測血清TC（膽固醇）、TG（甘油三酯）及HLD-C（高密度脂蛋白膽固醇）。4.處死動物，取主動脈剝離外膜脂肪組織，縱行剖開置于4％多聚甲醛中保存。大體標(biāo)奉行蘇丹Ⅲ染色后攝像．圖像分析儀測定斑塊面積和內(nèi)膜面積，計算斑塊面積／內(nèi)膜面積比。,,5.于胸主動脈上段(第4肋問動脈處)和腹主動脈上段(腹腔動脈處)各取材5 mm，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，制成4 μm厚橫截面切片，分別行蘇木素依紅(HE)

9、、間苯二酚品紅染色(ET+VG)染色。將動脈等距分成5點(包括內(nèi)膜最厚處)，利用圖像分析儀測量內(nèi)膜厚度、中膜厚度，計算內(nèi)膜厚度／中膜厚度，最后將兩段組織的指標(biāo)加以平均。每組取2例動物胸主動脈上段組織放人2％戊二醛溶液中固定，掃描和透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)改變。6.另取4μm厚胸主動脈上段組織(第4肋間動脈處)橫截面切片用小鼠抗兔一巨噬細(xì)胞單克隆抗體RAM 1 1和小鼠平滑肌細(xì)胞單克隆抗體α-aelin進行常規(guī)免疫組織化學(xué)染色，特異性鑒定巨

10、噬細(xì)胞和平滑肌源性泡沫細(xì)胞，采用P0wervision一Pv6002試劑盒，以EnVision復(fù)合物為二抗，設(shè)替代對照(PBS代替一抗)，胞漿內(nèi)棕黃色顆粒狀產(chǎn)物為陽性標(biāo)記。采用顯微一微機圖像分析系統(tǒng)計算陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。,,,,,,,,,,,,,用酶學(xué)法測血清TC、TG及HLD-C，計算AI,香榧子油組的血清TC、TG及AI比正常組高，比模型組低；血清HDL-C比正常組低，比模型組高,,香榧子油對斑塊面積／內(nèi)膜面積、內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜厚度／中

11、膜厚度都比正常組大，比模型組小,,香榧子油組斑塊中巨噬細(xì)胞和平滑肌源性泡沫細(xì)胞含量比正常組大，比模型組小,測量內(nèi)膜厚度、中膜厚度，計算內(nèi)膜厚度／中膜厚度,計算斑塊中巨噬細(xì)胞和平滑肌源性泡沫細(xì)胞陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù),測量結(jié)果,預(yù)測結(jié)果,統(tǒng)計學(xué)分析數(shù)據(jù)：,采用SPSS8．0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)的分析處理，所有數(shù)據(jù)均用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組間比較用方差分析，兩組間比較用￡檢驗，P<0．05為差異有顯著性。,四、預(yù)測結(jié)果:,,,,,,,香

12、榧子油對大鼠TC、TG和HLD-C的影響,香榧子油對斑塊面積／內(nèi)膜面積、內(nèi)膜厚度、內(nèi)膜厚度／中膜厚度的影響,香榧子油對斑塊部位免疫組化結(jié)果的影響,五、參考文獻,1.陳振德等．榧屬植物的研究進展．國外醫(yī)藥·植物學(xué)分冊，1996，11(4)：1502.韓琴琴等．應(yīng)用國產(chǎn)酶試劑測定血清膽固醇的方法．上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報，1984，11：1813.張蚰美,魏欣冰動脈粥樣硬化模型的病理形態(tài)學(xué)觀察 19984.蔡海江,朱敏天,李子行免

13、疫性損傷對家兔實驗性動脈粥樣硬化的影響 19796 .Tsukada T，Rosenfeld M，Ross R，etal. Immunocytochemical analysis of cellular components in athemsclerotie lesions：use of monoelonal anlI．bodies with the Watanabe and fat—fed rabbit Arteriosclero

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