糖尿病合并肝腎囊腫家系HNF1β基因篩查.pdf

1、背景:單基因突變糖尿病由于致病基因明確，外顯率高，家族危害大，近年來逐漸受到人們關(guān)注。單基因突變糖尿病主要包括青少年起病的成人型糖尿病(MODY)、線粒體基因突變糖尿病、新生兒糖尿病、胰島素作用的遺傳缺陷如胰島素受體基因突變等。MODY屬于特殊類型糖尿病的一種，為常染色體顯性遺傳病，其發(fā)病機制主要為葡萄糖刺激的胰島β細胞分泌缺陷，特點是發(fā)病年齡常小于25歲，至少有兩代糖尿病家族史，不易發(fā)生酮癥酸中毒，至少2年內(nèi)不依賴于胰島素治療。迄今已

2、發(fā)現(xiàn)至少13種基因與MODY相關(guān)聯(lián)，其中肝細胞核因子1β基因(Hepatocyte Nuclear Factor1β，HNF1β)是調(diào)節(jié)肝臟內(nèi)基因特異性表達的一種轉(zhuǎn)錄因子，它能識別一些特異靶序列，通過與這些調(diào)控區(qū)的順式作用元件相結(jié)合，對靶基因的轉(zhuǎn)錄起到激活或阻遏的作用，HNF1β是MODY5致病基因。國外研究顯示MODY5患病率較低，其臨床表型復(fù)雜多樣，最常見的臨床表型為糖尿病和腎囊腫，其次為肝臟表型，而國內(nèi)對MODY的研究僅是初步階段

3、，尚未明確常見的MODY亞型。散在報告為GCK和HNF1α基因突變引起的MODY2及MODY3亞型，對于亞型MODY5相關(guān)報道少見，尤其是MODY5家系報道資料更為罕見?；谝陨涎芯坷碚摷艾F(xiàn)狀，本研究通過對我院診治的4個糖尿病家系進行臨床分析和基因診斷，探討臨床常見的家族性糖尿病是否與HNF1β基因突變相關(guān)聯(lián)，并分析其相應(yīng)的臨床表型，為MODY5臨床診治提供新的思路，具有一定的臨床應(yīng)用價值。
　　 目的:本研究對4個糖尿病合并肝

4、或/和腎囊腫家系進行HNF1β基因分子篩查，探討此4個糖尿病合并臟器囊腫家系是否為MODY5，明確HNF1β基因在家系中可能的突變位點并分析其相關(guān)的臨床表型及與MODY5基因突變的關(guān)系。
　　 方法:采集4個糖尿病家系共12例成員，包括兩個糖尿病合并肝、腎囊腫家系(F1、F2)9例、一個糖尿病合并肝囊腫家系(F3)2例及一個糖尿病合并雙腎多發(fā)囊腫家系1例(F4)。采集受試者身高、體重、血壓等相關(guān)臨床資料，抽取外周血5ml，乙二胺

5、四乙酸(EDTA)抗凝，用改良氯仿-苯酚法提取外周靜脈血DNA，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù)對受試者進行HNF1β基因擴增，包括啟動子、所有外顯子、外顯子內(nèi)含子剪接區(qū)，DNA直接測序以明確具體的核酸突變及其編碼的氨基酸突變，另選20個健康人群作為對照組。
　　 結(jié)果:1.F1家系中兩名糖尿病患者攜帶HNF1β基因8號外顯子雜合突變c.1861C＞T，該位點突變使HNF1β基因第547位的絲氨酸變?yōu)楸奖彼?S547F)，該家系中的

6、突變檢出率為0.29(2/7)，其余研究對象未見該異常突變。2.F3家系中未發(fā)現(xiàn)HNF1β基因編碼區(qū)突變，但發(fā)現(xiàn)一HNF1β基因罕見SNP:+99 A＞C僅見于此家系，在對照組沒有發(fā)現(xiàn)，此SNP在家系中檢出率為0.17(2/12)，在所有研究對象中檢出率為0.063(2/32)。3.在F2和F3兩個家系中沒有發(fā)現(xiàn)編碼區(qū)突變及罕見SNP。4.4個家系中發(fā)現(xiàn)5種SNP，分別為:IVS7-115G＞A, IVS8+102G＞A, IVS8+1

7、55delA, IVS9-22T＞C,+100G＞A,在12個家系成員中的檢出率分別為:0.25(3/12)、0.5(6/12)、0.5(6/12)、0.42(5/12)、0.58(7/12);在對照組中檢出率分別為:0.25(5/20)、0.20(4/20)、0.20(4/20)、0.45(9/20)、0.55(11/20)。5.將F1家系攜帶S547F突變的糖尿病者、未攜帶突變糖尿病者及血糖正常者進行對比，發(fā)現(xiàn)此HNF1β基因突變與