雞傳染性支氣管炎病毒(793-B)M基因與截短M基因的克隆測序、原核表達(dá)及鑒定.pdf

1、雞傳染性支氣管炎(Infectious Bronchitis，IB)是由傳染性支氣管炎病毒(Infectious bronchitis virus，IBV)引起的一種急性高度接觸性傳染病。自30年代在美國爆發(fā)以來，現(xiàn)已成為世界各地流行的重要禽病。IBV是單股RNA病毒，該病毒基因可因點(diǎn)突變和重組而發(fā)生變異，故傳染性支氣管炎病毒血清型較多。已知的血清型有以侵害呼吸道為主的Conn、Iowa97、JMK、Florida、Arkansas99

2、等和以侵害腎臟為主的M41、Holte、Gray、Australia"T"等30余種。 Gough等(1992)報(bào)道了英國一種新的793/B血清型的IBV，該毒株和其它血清型傳支毒株之間無交叉血清學(xué)關(guān)系：其免疫原基因S1的序列與歐洲17個(gè)傳支毒株之間差異高達(dá)21～25％。目前，該血清型IBV在西班牙、德國、荷蘭、意大利、泰國等國均有發(fā)生和流行，對養(yǎng)雞業(yè)危害較大。 2003年刁有祥、楊杰華等從山東省某蛋雞飼養(yǎng)場產(chǎn)蛋異常下

3、降雞群中分離到一株793/B傳染性支氣管炎毒株，命名為TA03株。在此基礎(chǔ)上，于申業(yè)等建立了雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)793/B RT-PCR檢測方法及IBV(793/B)TA03株S1基因的克隆與表達(dá)；孟凡磊等對IBV(793/B)TA03株N基因進(jìn)行了序列分析及地高辛標(biāo)記探針、雙重RT-PCR檢測方法的建立與應(yīng)用。 根據(jù)GenBank已發(fā)表的傳染性支氣管炎病毒(IBV)全基因組序列設(shè)計(jì)引物，對793/B型IBV分離毒株T

4、A03 M基因進(jìn)行克隆與序列分析。結(jié)果表明，793/B型IBV的M基因由669bp組成，與GenBank已發(fā)表的15株IBV的M基因相比較，793/B型IBV的M基因在第4～15位發(fā)生了3～12個(gè)核苷酸的缺失，對應(yīng)1～4個(gè)氨基酸的缺失，共有30多處點(diǎn)突變。與其它各毒株M基因的核苷酸同源性為84.2％～93.6％，氨基酸同源性為82.1％～96.0％；進(jìn)化分析顯示TA03株與H52和IBN毒株之間的親緣關(guān)系較近。該研究為進(jìn)一步探討793/

5、B型IBV M基因(蛋白)在遺傳變異和免疫等方面的作用奠定了理論基礎(chǔ)。 應(yīng)用生物信息學(xué)技術(shù)推測雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)變異株(793/B)M基因的抗原位點(diǎn)，應(yīng)用DNAStar軟件針對M基因及其抗原表位片段設(shè)計(jì)3對引物，PCR擴(kuò)增并成功構(gòu)建了M基因的pGEX6p-M和2種截短M基因的pGEX6p-M1、pGEX6p-M2原核表達(dá)質(zhì)粒，SDS-PAGE檢測分別在50 kDa、32 kDa和29 kDa處有特異性表達(dá)條帶，表明G