特色藥源植物盾葉薯蕷遺傳轉(zhuǎn)化的研究.pdf

1、盾葉薯蕷(Dioscoreazingiberensis C.H.Wright)是我國特有的多年生藥用植物,其根狀莖中的薯蕷皂甙元是合成甾體激素類藥物的重要材料。在薯蕷屬中,野生盾葉薯蕷的皂甙元含量最高,據(jù)報(bào)道最高達(dá)到16.15％。近年來,隨著人們對薯蕷皂甙元的需求量增多和過度開發(fā)利用,野生盾葉薯蕷資源緊缺。為解決這一現(xiàn)狀,人們進(jìn)行了多種努力,但是人工栽培育種存在薯蕷皂甙元含量和產(chǎn)量降低,多倍體育種存在盾葉薯蕷根狀莖的產(chǎn)量及薯蕷皂甙元的含

2、量不穩(wěn)定等問題,而基因工程手段為盾葉薯蕷的品種改良開辟了新的途徑。
　　 本文首先對盾葉薯蕷再生體系進(jìn)行了研究,以改良MS為基本培養(yǎng)基,添加不同濃度的激素(6-BA和NAA)組合,確定了適合無菌苗的腋芽萌發(fā)、愈傷組織誘導(dǎo)、分化和生根培養(yǎng)基的最適激素濃度組合,愈傷組織分化率可達(dá)905,0以上,并且90％以上的再生苗能夠長出須根,煉苗移栽后成活率較高；研究了農(nóng)桿菌侵染濃度、時間,共培養(yǎng)時間,篩選培養(yǎng)的潮霉素B濃度和時間,抗生素的添加

3、濃度,利用含有rFCA-RRMl基因片段的根癌農(nóng)桿菌EHA105質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化了盾葉薯蕷胚性愈傷組織；對盾葉薯蕷胚性愈傷組織進(jìn)行rFCA-RRM2基因片段的基因槍法轉(zhuǎn)化；將抗性愈傷組織經(jīng)分化培養(yǎng)后,轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基誘導(dǎo)生根,經(jīng)煉苗,移栽于室外培養(yǎng)。將盾葉薯蕷轉(zhuǎn)基因再生植株的葉片基因組DNA進(jìn)行PCR檢測,初步證明外源基因已經(jīng)整合到盾葉薯蕷的基因組中；測定了野生盾葉薯蕷根狀莖及愈傷組織中薯蕷皂甙元含量。本研究為通過轉(zhuǎn)基因方法對盾葉薯蕷進(jìn)行品種改