藥學(xué)畢業(yè)論文魷魚(yú)墨多肽對(duì)pc-3細(xì)胞的增殖抑制研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p><b>　　（20 屆）</b></p><p>　　魷魚(yú)墨多肽對(duì)PC-3細(xì)胞的增殖抑制研究</p><p>　　所在學(xué)院 </p><p>　　專業(yè)班級(jí)

2、 藥學(xué) </p><p>　　學(xué)生姓名 學(xué)號(hào) </p><p>　　指導(dǎo)教師 職稱 </p><p>　　完成日期 年 月 </p><p>　　目 錄

3、 </p><p>　　摘要錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p>　　Abstract錯(cuò)誤!未定義書(shū)簽。</p><p><b>　　1、前言4</b></p><p>　　1.1魷魚(yú)墨多肽的研究概述4</p><p>　　1.2研究方法概述5</p><p>

4、　　2、實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑5</p><p>　　2.1 材料和試劑5</p><p>　　2.2 主要器材及儀器6</p><p><b>　　3、實(shí)驗(yàn)方法6</b></p><p>　　3.1魷魚(yú)墨多肽最佳提取法6</p><p>　　3.1.1魷魚(yú)墨的制備6</p>

5、<p>　　3.1.2魷魚(yú)墨多肽的提取工藝6</p><p>　　3.1.3 魷魚(yú)墨多肽脫脂提取6</p><p>　　3.1.4魷魚(yú)墨多肽酸法提取正交實(shí)驗(yàn)6</p><p>　　3.1.5氨基態(tài)氮含量的測(cè)定7</p><p>　　3.2魷魚(yú)墨多肽的提取7</p><p>　　3.3 HE染色法

6、7</p><p>　　3.4 MTT法7</p><p>　　4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論8</p><p>　　4.1正交試驗(yàn)及數(shù)據(jù)處理8</p><p>　　4.2 HE染色法制作常規(guī)切片8</p><p>　　4.3 MTT比色法檢測(cè)情況11</p><p><b>　　5、

7、小結(jié)12</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)12</b></p><p>　　魷魚(yú)墨多肽對(duì)PC-3細(xì)胞的增殖抑制研究</p><p>　　[摘要] 目的：研究魷魚(yú)墨中提取的多肽對(duì)于前列腺癌中PC-3細(xì)胞的增殖抑制的作用。方法：采取MTT法和HE染色法后流式細(xì)胞儀分析及顯微鏡下形態(tài)學(xué)觀察等方法。結(jié)果：與對(duì)照組比較，MTT

8、法顯示對(duì)PC-3細(xì)胞的增殖抑制作用增強(qiáng)；HE染色法顯示細(xì)胞凋亡增多。結(jié)論：魷魚(yú)墨中提取多肽對(duì)PC-3細(xì)胞具有增殖抑制作用。</p><p>　　[關(guān)鍵詞] 魷魚(yú)墨多肽；PC-3細(xì)胞；增殖抑制</p><p>　　Squid ink peptides on PC-3 cell apoptosis research</p><p>　　[Abstract] Object

9、ive: Study of protein extracted from squid ink for the PC-3 prostate cancer cells in early apoptosis effect. Methods: MTT method and after HE staining and flow cytometry methods such as morphological observation under a

10、microscope. Results: Compared with control group, MTT assay showed that on the PC-3 cell proliferation enhancement; HE staining showed increased apoptosis. Conclusion: The squid ink extract protein for prostate cancer PC

11、-3 cells apoptosis inhibition.</p><p>　　[Key words] Squid ink protein; PC-3 cells; Proliferation</p><p><b>　　1、前言</b></p><p>　　前列腺是男性老年腫瘤，據(jù)統(tǒng)計(jì)，世界范圍內(nèi)前列腺癌的發(fā)病率差別很大，與地區(qū)、種族、內(nèi)在

12、因素以及周?chē)h(huán)境有關(guān)。前列腺癌變時(shí)一種很復(fù)雜的疾病過(guò)程，涉及遺傳學(xué)、內(nèi)分泌和其他漸變性因素。然而, 現(xiàn)階段前列腺癌的化學(xué)治療并不理想，用于治療前列腺癌的藥物主要集中于拮抗雄性激素分泌，這不僅容易產(chǎn)生激素抵抗，而且對(duì)非激素依賴的前列腺癌療效不佳。因此尋找療效確切且高效、低毒的藥物變得尤為重要。</p><p>　　海洋生物活性物質(zhì)抗腫瘤研究是海洋生物活性物質(zhì)開(kāi)發(fā)與抗癌藥物研究的一個(gè)重要領(lǐng)域。當(dāng)前，如何尋找能選擇性地

13、干預(yù)癌細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、調(diào)控細(xì)胞增殖和分化活動(dòng)的低分子瘤抑制物是其中的重要方向[1]。雖然魷魚(yú)加工量巨大，但有關(guān)其加工過(guò)程中產(chǎn)生的大量廢棄物的綜合利用卻相對(duì)甚少。在加工過(guò)程中，其廢棄物往往被丟棄，一些國(guó)家甚至為了處理這些加工廢料損失巨大經(jīng)濟(jì)利益[2]。開(kāi)發(fā)魷魚(yú)廢棄物的高值化加工的關(guān)鍵技術(shù)，全面提高魷魚(yú)廢棄物的附加值，對(duì)提升我國(guó)對(duì)大宗海洋動(dòng)物資源的利用能力，提高產(chǎn)品的技術(shù)含量和競(jìng)爭(zhēng)力，建立魷魚(yú)產(chǎn)品開(kāi)發(fā)、加工的技術(shù)平臺(tái)，促進(jìn)我國(guó)遠(yuǎn)洋漁業(yè)的發(fā)展具

14、有重要的經(jīng)濟(jì)和社會(huì)意義。</p><p>　　魷魚(yú)學(xué)名中國(guó)槍烏賊，屬軟體動(dòng)物門(mén)，頭足綱，二鰓亞綱，十腕目 魷魚(yú)高蛋白低脂肪，富含人體必需的多種氨基酸，且必需氨基酸組成接近全蛋白，是我國(guó)主要的水產(chǎn)加工原料[3]。我國(guó)魷魚(yú)加工主要以其胴體為主，而占魷魚(yú)體質(zhì)量1.3％左右的墨囊尚未得到有效地綜合開(kāi)發(fā)利用。在美國(guó)和日本，魷魚(yú)墨汁因?yàn)榘踩珶o(wú)毒且著色力強(qiáng)，已被用作天然的黑色素應(yīng)用于食品生產(chǎn)中。目前已研究的魷魚(yú)墨中的生物活性物

15、質(zhì)有：多肽片斷、酸性多糖等[4]。最近，又從烏賊墨中分離純化酪氨酸酶，并且發(fā)現(xiàn)有抗癌活性(最新發(fā)現(xiàn)它與腫瘤細(xì)胞發(fā)生作用)[5]。</p><p>　　1.1魷魚(yú)墨多肽的研究概述</p><p>　　20世紀(jì)80年代日本報(bào)道魷魚(yú)墨具有抗?jié)兊茸饔?，其有效成分為一種耐熱的肽多糖，可以用于生產(chǎn)保健食品的重要原料[6] 日本有在腌漬魷魚(yú)時(shí)加入墨汁的習(xí)慣，除了調(diào)味外還認(rèn)為它具有防腐作用[7]。墨汁提

16、取物具有抗菌特性已被證實(shí)，但目前未確認(rèn)其機(jī)理是因含有溶菌酶之故還是由其它成分所引起的。最近的研究發(fā)現(xiàn)，墨囊中含有真黑色素(eumelanin)，以共價(jià)結(jié)合、離子鍵和蛋白質(zhì)結(jié)合的形式存在[8]。</p><p>　　20世紀(jì)90年代，日本青森產(chǎn)業(yè)技術(shù)中心和弘前大學(xué)發(fā)現(xiàn)阿根廷魷魚(yú)墨汁具有抗腫瘤作用，并從中提取得到一種高效抗癌活性成分多糖一蛋白復(fù)合體，此種墨粘多糖由3種單糖呈直線交叉形式結(jié)合而成，并且和蛋白質(zhì)分子相連，

17、具有比較復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，其多糖部分主要由等摩爾比例的葡糖醛酸(GIcA)、N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)和巖藻糖(Fuc)構(gòu)成[9]。</p><p>　　魷魚(yú)是烏賊的一個(gè)種屬，其來(lái)源豐富易得，其墨汁成分和烏賊十分相似。烏賊墨的化學(xué)成分為黑色素和蛋白多糖復(fù)合體[10]。日本研究人員運(yùn)用生化分離技術(shù)對(duì)烏賊墨的蛋白多耱復(fù)合體進(jìn)行分析，從中分離出一組抗腫瘤活性的肽聚糖，分別是：SIPG022A、SIPG022B和SIPG

18、022C。從化學(xué)組成上看，SIPG022A和SIPG022B比SIPG022C有更多的糖組分，但用Actinase E消化后在乙酸纖維膜電泳中只顯示一個(gè)區(qū)帶，說(shuō)明這三種肽聚糖中只有一種多糖鏈并被連到一種肽，其重復(fù)結(jié)構(gòu)為(-6Ga NAcal-GleA B 1-3Fuc d l一)n，只是聚合度不同。糖類部分主要含有等分子質(zhì)量的葡萄糖酸(GlcA)、N．乙酰半乳糖胺、巖藻聚糖(Fuc)。多糖部分本身無(wú)抗腫瘤活性，這表明其抗腫瘤活性來(lái)自多糖

19、同其他組分的復(fù)合體，如肽聚糖和色素嘞。肽鏈部分主要的氨基酸為：天冬氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、谷氨酸、丙氨酸[11-13]。</p><p>　　在魷魚(yú)的加工過(guò)程中，墨囊多作為加工廢棄物處理，容易污染環(huán)境，其主要化學(xué)成分是黑色素和蛋白多糖復(fù)合體。研究表明魷魚(yú)墨具有抗腫瘤、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能、誘導(dǎo)多種細(xì)胞因子等生理活性，并一直認(rèn)為其主要的活性成分為多肽片斷、酸性多糖、酪氨酸酶以及微量元素。有報(bào)道指出魷魚(yú)墨中肽聚糖可以直接抑

20、制腫瘤的生長(zhǎng)也可以刺激機(jī)體的免疫應(yīng)答間接抑制腫瘤的生長(zhǎng)，而肽聚糖中的主要成分是蛋白。本文研究了魷魚(yú)墨蛋白對(duì)前列腺癌中PC-3細(xì)胞具有凋亡抑制作用。</p><p><b>　　1.2研究方法概述</b></p><p>　　HE染色法又稱蘇木素-伊紅染色，蘇木素容易被氧化，其氧化產(chǎn)物蘇木紅才是真正的染料。蘇木紅是一種酸性染料，只有蘇木紅和鋁結(jié)合形成一種帶正電荷的藍(lán)色色

21、精才是堿性的。帶正電荷的藍(lán)色色精和細(xì)胞核結(jié)合是通過(guò)正、負(fù)電荷的極性吸附來(lái)完成的，也就是說(shuō)，帶負(fù)電荷的脫氧核糖核酸根和帶正電荷的藍(lán)色色精進(jìn)行極性吸附而完成染色[14]。伊紅是一種酸性紅色胞漿性染料，伊紅溶于水中就能離解成帶負(fù)電荷的色酸部分，即染料的有色部分;帶正電荷的鈉離子部分，即染料的無(wú)色部分。酸性染料組織成分呈彌漫性染色，這是由于組織成分的等電點(diǎn)一般都在 3.6～5.2范圍內(nèi)(細(xì)胞核，pH3.8～4.2；細(xì)胞漿pH4.6～5.0) [

22、15]。它們?cè)谌跛嵝曰蛉鯄A性不可能進(jìn)行極性吸附而完成染色，它們的染色可能是通過(guò)滲透作用或彌散作用而完成的，因此和組織成分結(jié)合是不牢固的。</p><p>　　1983年 Mosmman首先報(bào)道用MTT法來(lái)檢測(cè)細(xì)胞活性[16]。以后，又有研究人員用此法測(cè)定抗癌藥物對(duì)腫瘤增殖活性的效應(yīng)[17]。該方法簡(jiǎn)便、 實(shí)驗(yàn)周期短 (一般只需 4～6天 )、 所需細(xì)胞數(shù)目較少、人為誤差較小、所得資料較精確，且無(wú)放射性污染。因此它

23、也就成為藥物篩選的主要手段。它的原理是活細(xì)胞通過(guò)線粒體能量代謝過(guò)程，脫氫酶將MTT代謝形成藍(lán)紫色甲噆沉積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周?chē)?，形成甲噆的量與細(xì)胞增殖程度呈比例關(guān)系，通過(guò)比色分析方法測(cè)定甲胳的量，即可了解細(xì)胞的增殖情況[18]。</p><p>　　2、實(shí)驗(yàn)材料、儀器與試劑</p><p><b>　　2.1 材料和試劑</b></p><p>　

24、　2.2 主要器材及儀器 </p><p><b>　　3、實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p>　　3.1魷魚(yú)墨多肽最佳提取法</p><p>　　3.1.1魷魚(yú)墨的制備</p><p>　　魷魚(yú)墨在37℃恒溫水浴鍋解凍</p><p>　　3.1.2魷魚(yú)墨多肽的提取工藝</p>&l

25、t;p>　　將預(yù)處理過(guò)的魷魚(yú)墨取10.0 mL，與適量的酸提料液,在一定的溫度、時(shí)間下浸提,并最后對(duì)浸提液離心得到的清液即為粗制的多肽。</p><p>　　3.1.3 魷魚(yú)墨多肽脫脂提取</p><p>　　將預(yù)處理過(guò)的魷魚(yú)墨取10.0 mL，與適量的酸提料液,再加適量丙酮，在一定的溫度、時(shí)間下浸提,并最后對(duì)浸提液離心得到的清液即為粗制的多肽。</p><p&g

26、t;　　3.1.4魷魚(yú)墨多肽酸法提取正交實(shí)驗(yàn)</p><p>　　以氨基態(tài)氮為指標(biāo)來(lái)優(yōu)選對(duì)酸水解制備魷魚(yú)墨多肽有影響的酸的種類、酸提料液比、酸解時(shí)間和酸解溫度。</p><p>　　根據(jù)單因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)確定酸解制備魷魚(yú)墨多肽的工藝條件。L9（34）正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素和水平見(jiàn)表</p><p><b>　　表1因素水平表</b></p&

27、gt;<p>　　3.1.5氨基態(tài)氮含量的測(cè)定 </p><p>　　吸取含氨基酸約20mg的樣品溶液于100ml容量瓶中，加水至標(biāo)線，混勻后吸取20.0ml置于200ml燒杯中，加水60ml，開(kāi)動(dòng)磁力攪拌器，用0.05mol/l氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至酸度計(jì)指示pH8.2，記錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液ml數(shù)，供計(jì)算總算含量。加入10.0ml甲醛溶液，混勻。再用上述氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液繼續(xù)滴定至pH9.2，記

28、錄消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液ml數(shù)。</p><p>　　同時(shí)取80ml蒸餾水置于另一200ml潔凈燒瓶中，先用氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液調(diào)至pH8.2，（此時(shí)不計(jì)堿消耗量），再加入10.0ml中性甲醛溶液，用0.05mol/l氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至pH9.2，用蒸餾水代替樣品作為試劑空白試驗(yàn)。</p><p>　　氨基酸態(tài)氮（%）=（V1- V2）×c×0.014×100/

29、(5×V)</p><p><b>　　式中：</b></p><p>　　V1——樣品稀釋液在加入甲醛后滴定至終點(diǎn)（pH9.2）所消耗氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；</p><p>　　V2——空白試驗(yàn)加入甲醛后滴定至終點(diǎn)所消耗的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml；</p><p>　　c——?dú)溲趸c標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度

30、，mol/l；</p><p>　　0．014——氮的毫摩爾質(zhì)量，g/mmol。</p><p>　　3.2魷魚(yú)墨多肽的提取</p><p>　　經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)得到最優(yōu)魷魚(yú)墨中蛋白的提取條件是魷魚(yú)墨與0.01mol/L的鹽酸以1:2的比例相混合，在35 ℃的水浴鍋中經(jīng)72小時(shí)的酸化后，取出樣品。用高速冷凍離心機(jī)對(duì)樣品進(jìn)行離心，離心時(shí)間為20min。</p>

31、<p>　　離心取得上清液，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀對(duì)樣品進(jìn)行濃縮，在用冷凍干燥儀干燥24小時(shí)。得到魷魚(yú)墨多肽樣品。</p><p><b>　　3.3 HE染色法</b></p><p>　　取出培養(yǎng)有細(xì)胞的6張蓋玻片，放入培養(yǎng)皿中，有細(xì)胞面的朝上，用95%的酒精固定15min，然后用PBS洗兩次，每次時(shí)間都是1min。用蘇木素染色，染色時(shí)間為5-10min，用自來(lái)

32、水洗去多余的染料，使細(xì)胞核藍(lán)化。</p><p>　　浸入伊紅染色，染色時(shí)間為0.5-1min，用自來(lái)水洗去多余的染料。采用梯度低-高脫水的方法，用50%、75%、95%無(wú)水乙醇和對(duì)玻片脫水各5min，然后用二甲苯透明3次，每次1min，用中性樹(shù)膠封片。</p><p><b>　　3.4 MTT法</b></p><p>　　取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的前

33、列腺癌 PC-3 細(xì)胞，以0.25%胰酶消化，計(jì)數(shù)，接種于96孔培養(yǎng)板內(nèi) 。每孔細(xì)胞密度為 1×104個(gè)，每組設(shè) 4個(gè)平行孔并設(shè)不含細(xì)胞的空白對(duì)照，37 ℃培養(yǎng) 24 h使細(xì)胞貼壁。吸掉上清液，每孔加入200μL含MTT試劑的培養(yǎng)基。</p><p>　　繼續(xù)培養(yǎng)4h，再將培養(yǎng)液吸干，加入二甲基亞砜，震蕩后，用酶標(biāo)儀檢測(cè)5mg/ml、10ml/ml、15mg/ml、20mg/ml、25mg/ml和30m

34、g/ml不同濃度的死亡率(檢測(cè)時(shí)每孔加150μL 10%的DMSO，震蕩使甲臢晶體溶解)。</p><p><b>　　4、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論</b></p><p>　　4.1正交試驗(yàn)及數(shù)據(jù)處理</p><p>　　實(shí)驗(yàn)采用酸的種類、酸提料液比、酸解時(shí)間和酸解溫度4個(gè)因素，每個(gè)因素取3個(gè)水平，取每份10 mL魷魚(yú)墨在不同的條件下反應(yīng)，測(cè)得的氨基態(tài)

35、氮及數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，結(jié)果見(jiàn)表2。</p><p>　　表2 影響魷魚(yú)墨多肽提取的L9（34）實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析表</p><p>　　如表2所示：從極差R 值可以看出，各因素對(duì)酸法提取魷魚(yú)墨多肽的主次順序?yàn)樗崽崃弦罕?B)> 酸解溫度(D)> 酸的種類(A)> 酸解時(shí)間(C) ，即酸提料液比是條件中影響最大的因素，酸解時(shí)間的影響最小，酸法提取魷魚(yú)墨多肽最佳組合為0.01 mol/

36、L鹽酸、酸提料液比1：2、酸解時(shí)間72h、酸解溫度35°C。</p><p>　　4.2 HE染色法制作常規(guī)切片</p><p>　　圖1 正常PC-3細(xì)胞</p><p>　　圖2 15mg/ml樣品作用細(xì)胞</p><p>　　圖3 30mg/ml樣品作用細(xì)胞</p><p>　　HE染色結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2

37、和圖3。圖1是正常細(xì)胞保持原有的生長(zhǎng)形狀，呈多邊形，細(xì)胞核大小不一，呈圓形或卵圓形，核分裂相多，核仁數(shù)目多。圖2、圖3中細(xì)胞腫脹，細(xì)胞器變形或腫大，核仁數(shù)目減少；細(xì)胞輪廓模糊，細(xì)胞質(zhì)堿性降低，巨核細(xì)胞增多；雖然核無(wú)明顯形態(tài)學(xué)變化，這是細(xì)胞增殖抑制的早期變化。</p><p>　　在某些 HE染色玻片中見(jiàn)到部分細(xì)胞核呈褐色或黑色，結(jié)構(gòu)不清，形似“焦化”的物質(zhì)，此種變化與二甲苯有密切關(guān)系，但它導(dǎo)致該變化的機(jī)制還有待進(jìn)

38、一步的研究，可能是二甲苯揮發(fā)不凈，留下的結(jié)晶；也可能與細(xì)胞核的pH值有關(guān)。</p><p>　　4.3 MTT比色法檢測(cè)情況</p><p>　　表3 魷魚(yú)墨多肽對(duì)PC-3細(xì)胞增殖影響</p><p>　　圖4 MTT法檢測(cè)抑制率</p><p>　　MTT 法對(duì)不同濃度樣品對(duì)PC-3細(xì)胞的作用的檢測(cè)結(jié)果，表一中可以看出用魷魚(yú)墨多肽作用過(guò)的P

39、C-3細(xì)胞的死亡率都比未用魷魚(yú)墨多肽作用過(guò)的PC-3細(xì)胞要高；從表二中可以得出，在5mg/ml-30mg/ml這個(gè)范圍內(nèi)，魷魚(yú)墨多肽的濃度越高，它對(duì)PC-3細(xì)胞的增殖抑制能力也越強(qiáng)。</p><p>　　自50年代以來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)腫瘤細(xì)胞體外藥敏試驗(yàn)進(jìn)行了積極地探索，先后建立了多種體外藥敏試驗(yàn)方法，如核酸前體摻入法、集落形成法、區(qū)別染色細(xì)胞毒法(DISC) 、四氮唑藍(lán)法(MTT法)和熒光測(cè)定微培養(yǎng)細(xì)胞毒試驗(yàn)(

40、FMCA)等，試圖擺脫“菜譜式”(cookbook) 治療，而建立“量體裁衣式”(tailor)的治療，其中 MTT法是一種近年研究廣泛的方法[19]。自 80年代中期始，MTT法藥敏試驗(yàn)首先應(yīng)用于急性白血病的治療中，指導(dǎo)臨床用藥，取得了良好的相關(guān)性和療效[20]。目前已逐步應(yīng)用到肺癌、卵巢癌、肝癌、乳腺癌等實(shí)體腫瘤的治療中，結(jié)果提高了藥物的選擇性，提高了化療質(zhì)量和化療個(gè)體化效果。</p><p>　　總之，MT

41、T法是一種簡(jiǎn)便而快捷的腫瘤細(xì)胞體外藥物敏感實(shí)驗(yàn)方法，值得臨床推廣應(yīng)用，以指導(dǎo)臨床個(gè)體化化療藥物的選擇。</p><p><b>　　5、小結(jié)</b></p><p>　　正交試驗(yàn)得到魷魚(yú)墨與0.01mol/L的鹽酸以1:2的比例相混合，在35 ℃的水浴鍋中經(jīng)72小時(shí)的酸化后，得到最佳的魷魚(yú)墨多肽樣品。</p><p>　　用HE染色法制作常規(guī)H

42、E染色玻片對(duì)魷魚(yú)墨蛋白作用下的PC-3細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析。得到以魷魚(yú)墨與0.01mol/L的鹽酸以1:2的比例相混合，在35 ℃的水浴鍋中經(jīng)72小時(shí)的酸化后，得到最佳的魷魚(yú)墨多肽樣品能使PC-3細(xì)胞增殖抑制。</p><p>　　用 MTT比色法檢測(cè)存活細(xì)胞和細(xì)胞增殖情況，對(duì)魷魚(yú)墨多肽抗前列腺素PC-3細(xì)胞進(jìn)行定量分析。在5mg/ml-30mg/ml魷魚(yú)墨多肽的這個(gè)范圍內(nèi)，魷魚(yú)墨多肽的濃度越高，它對(duì)PC-3細(xì)胞的

43、增殖抑制能力也越強(qiáng)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1]歐陽(yáng)高亮,李祺福,田長(zhǎng)海.海洋生物抗腫瘤活性物質(zhì)及其作用機(jī)理研究進(jìn)展[J].海洋科學(xué), 2003, 27 (7) : 21～24.</p><p>　　[2]王杏珠. 日本烏賊墨的開(kāi)發(fā)和利用[J] . 海洋信息, 1995, (12) : 15 .&l

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