云南羊肚菌生長土壤真菌群落結(jié)構(gòu)分析.pdf

1、羊肚菌（Morehella esculenta）是一種著名的食藥用真菌，具有廣闊的開發(fā)利用前景，但至今羊肚菌的完全人工栽培還沒有很大的突破。近年來已有不少半人工栽培成功的案例，成功的羊肚菌半人工栽培常常要求覆蓋有羊肚菌發(fā)生過的土壤，這可能是由于覆土中存在刺激其結(jié)實的有益微生物，因此找到有助于其結(jié)實的關(guān)鍵微生物種類，盡可能模仿其野生環(huán)境，這或許是羊肚菌栽培成功的捷徑之一。
　　 本文對羊肚菌子實體進行了組織分離，期望可以分離到與羊

2、肚菌緊密結(jié)合的其他種真菌，考察這些真菌與子實體形成生長之間的關(guān)聯(lián)。另對六份羊肚菌栽培土樣，建立真菌28S rDNA文庫，利用現(xiàn)代分子生態(tài)學(xué)的方法快速準(zhǔn)確地對土樣中的真菌群落結(jié)構(gòu)進行檢測。統(tǒng)計分析各真菌類群，以期找出與羊肚菌生長密切相關(guān)的優(yōu)勢種群。再與羊肚菌組織分離所得的真菌比較，尋求兩者間的對應(yīng)關(guān)系，找到兩者間的異同，從而為今后實現(xiàn)羊肚菌人工栽培提供一定的參考依據(jù)，主要研究成果如下：
　　 1.對4個羊肚菌子實體進行了組織分離，

3、得到39株菌株。對39株菌株的ITS區(qū)域進行測序和分析比較，結(jié)果顯示供試的39個菌株中33株ITS區(qū)域長度為738bp，經(jīng)過BLAST比對后均為羊肚菌菌株；另外的6個菌株編號分別為3、5、6、23、24、37，其中3號菌株比對結(jié)果為Talaromyces trachyspermus，相似度達100％，5、23、37三個菌株比對結(jié)果均為Botryotinia fuckeliana，剩下的6、24號菌株，比對結(jié)果分別為Cordyceps s

4、inensis、Mortierella alpina，相似度都達到99％以上。
　　 2.在云南維西縣以及迪慶州霞若鄉(xiāng)羊肚菌半人工栽培基地采集相應(yīng)土樣，提取土樣總DNA，PCR擴增28S rDNA片段，再用PCR產(chǎn)物直接克隆建庫，通過大規(guī)模的測序比對，了解各土樣間真菌群落的差異。其中的WX-1、XR-1、XR-2、XR-3四個土樣，克隆子數(shù)目大于5的菌株中，比對后為子囊菌亞門盤菌綱，糞殼菌綱，錘舌菌綱真菌；還有部分為壺菌門真菌；

5、擔(dān)子菌、接合菌真菌。WX-1、XR-3土樣的多樣性指數(shù)接近，XR-1、XR-2兩土樣的多樣性指數(shù)接近；但是四個文庫之間數(shù)據(jù)相互比較，差別也不大。土樣XR-4、XR-5比較發(fā)現(xiàn)羊肚菌出菇土壤附近和不出菇土壤，雖相距僅10m左右，但是真菌群落豐度和種類存在明顯差異；連續(xù)兩年對同一羊肚菌栽培基地采樣，即文庫C和F，比較發(fā)現(xiàn)，文庫C的真菌群落多樣性明顯高于F，而且兩者豐度高的真菌類群存在明顯差異。其中文庫中Morchella conica的豐度

6、越高，所對應(yīng)土樣采集地的羊肚菌產(chǎn)量也高。
　　 3.羊肚菌子實體組織分離得到的6號菌株，在土樣XR-3中豐度為1.69％；分離到的24號菌株在土樣WX-1中豐度為4.88％；5、23、37比對后均在土樣WX-1中豐度為2.44％，在土樣XR-2中豐度為1.68％。這3個菌株在子實體中可以分離到，同時在土樣中也有相應(yīng)的克隆子出現(xiàn)，但是并不能形成良好的對應(yīng)關(guān)系，即來源于某子實體的真菌，并不一定會出現(xiàn)在與子實體對應(yīng)的土樣所建的文庫中。