稻瘟病菌凋亡抑制蛋白基因MoIAP的功能分析及Bcl-2對水花生致病菌蕉斑鐮刀菌的影響.pdf

1、在多細(xì)胞生物的發(fā)育過程中，細(xì)胞凋亡是一個必不可少的環(huán)節(jié)，而且它是一個主動過程，涉及一系列蛋白的激活、表達(dá)以及調(diào)控等的作用。其中caspase家族、Bcl-2家族以及凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis proteins)家族在凋亡的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中扮演著重要角色。本文主要研究了稻瘟病菌抑制凋亡蛋白基因MoIAP的功能，以及Bcl-2對水花生致病菌蕉斑鐮刀菌的影響。
　　 前期我們在稻瘟病菌中克隆到了凋亡抑制蛋白基

2、因MoIAP，并且利用酵母系統(tǒng)研究發(fā)現(xiàn)，MoIAP具有抗氧化脅迫，推遲衰老及抑制ROS產(chǎn)生的功能。為了進(jìn)一步了解其在稻瘟病菌中的功能，我們試圖將稻瘟病菌MoIAP基因敲除，然而，最終沒有獲得MoIAP基因的缺失突變體，因此我們認(rèn)為MoIAP在稻瘟病菌中是必需的。因此，我們利用基因沉默技術(shù)獲得MoIAP沉默突變體，并且進(jìn)一步獲得MoIAP過量表達(dá)突變體。研究結(jié)果顯示，MoIAP沉默與過量表達(dá)突變體產(chǎn)孢量沒有變化；MoIAP沉默后不影響生長

3、，但過表達(dá)可以顯著提高生長速率；MoIAP對胞外漆酶和過氧化物酶起負(fù)調(diào)控作用；沉默MoIAP后會嚴(yán)重影響分生孢子對H2O2的抗性，而MoIAP過表達(dá)后能夠抑制H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡；此外，無論是沉默還是過量表達(dá)MoIAP，都不影響稻瘟病菌的致病性。
　　 為了增加生防真菌的致病性，開發(fā)惡性雜草水花生的生防真菌制劑.我們研究了抗凋亡蛋白Bcl-2對水花生致病菌焦斑鐮刀菌的影響，將哺乳動物Bcl-2基因通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化蕉斑鐮刀菌

4、，獲得了B-3、B-6、B-7三個轉(zhuǎn)化子，經(jīng)常規(guī)PCR和半定量RT-PCR檢測分析證明Bcl-2基因成功導(dǎo)入到蕉斑鐮刀菌中并且表達(dá)。對轉(zhuǎn)入Bcl-2基因的焦斑鐮刀菌相關(guān)性狀的分析表明，轉(zhuǎn)入Bcl-2基因的焦斑鐮刀菌B-6、B-7與野生型相比，生長速率和生物量沒有變化，對各種鹽及H2O2脅迫也沒有抗性。然而，B-6、B-7的產(chǎn)孢量較野生型增加，其分生孢子可以抵抗高溫脅迫，對水花生的致病性增強(qiáng)。因此，這將為水花生生物防治的研究提供新的思路。