淡水發(fā)光菌青海弧菌q―67對環(huán)境激素類物質(zhì)毒性檢測應(yīng)用研究進展

1、<p>　　淡水發(fā)光菌青?；【鶴―67對環(huán)境激素類物質(zhì)毒性檢測應(yīng)用研究進展</p><p>　　摘要：以新型淡水發(fā)光菌――青海弧菌 Q67（Vibrio―qinghaiensis s p.-Q67） 為檢測生物，以Veritas TM微孔板光度計為發(fā)光強度測試設(shè)備，建立了測定環(huán)境污染物對發(fā)光菌發(fā)光強度抑制毒性的微板發(fā)光測試新方法。指出了隨著對淡水發(fā)光細菌Q-67研究的不斷進行，該菌種逐漸成為國內(nèi)除了明亮

2、發(fā)光桿菌、費氏弧菌以外的毒性檢測菌種。 </p><p>　　關(guān)鍵詞：青?；【?；環(huán)境激素；毒性檢測 </p><p>　　中圖分類號：X832 </p><p>　　文獻標識碼：A文章編號：16749944（2016）12009503 </p><p><b>　　1引言 </b></p><p>

3、;　　隨著工業(yè)革命的發(fā)展，人類開啟了環(huán)境污染的加速時代[1]，目前人類的生存環(huán)境正面臨日益嚴重的污染危機[2～4]。迄今為止，已經(jīng)有約80000種化學(xué)物質(zhì)存在日常用品以及食物當中，而且每年約新合成化學(xué)物質(zhì)1500種。為了應(yīng)對不同生物毒理學(xué)試驗的選擇，各個機構(gòu)制定了不同的方法與標準[5]，現(xiàn)在通過美國EPA統(tǒng)計顯示：ICCVAM機構(gòu)總結(jié)出了63種測試方法；這些方法中美國執(zhí)法機構(gòu)認可60種；被其他機構(gòu)采納41種，歐盟認可并采納47種[6]。

4、針對水體中各種有毒有害污染物質(zhì)，普通理化指標已經(jīng)不能完全滿足生態(tài)效應(yīng)評價，與毒理學(xué)、醫(yī)學(xué)、環(huán)境生態(tài)學(xué)、分析化學(xué)等學(xué)科交叉的環(huán)境毒理學(xué)應(yīng)運而生[7，8]?，F(xiàn)在人們開始從傳統(tǒng)物質(zhì)的毒性研究轉(zhuǎn)移到潛伏期更長的環(huán)境激素類物質(zhì)。 </p><p>　　大多數(shù)環(huán)境激素都對動物和人類身體器官、生殖繁殖等有影響，嚴重時能通過多種途徑使身體發(fā)生癌變以及嬰兒先天畸形等[9]。環(huán)境激素一般毒性作用劑量小、潛伏時間長，常作用于神經(jīng)系統(tǒng)、

5、生殖系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)、肝臟腎臟等；表現(xiàn)為對物種健康、生殖繁衍有巨大威脅。Our Stolen Future網(wǎng)站上最新公布的環(huán)境激素物質(zhì)名錄近百種。對于環(huán)境激素對人體作用研究，國內(nèi)已經(jīng)有學(xué)者做過一些環(huán)境激素毒理性相關(guān)研究，但在水體中低濃度環(huán)境激素毒性檢測研究幾乎還是空白。 </p><p><b>　　2發(fā)光細菌法簡介 </b></p><p>　　發(fā)光細菌法是1978年

6、Beckman儀器公司使用明亮發(fā)光桿菌為菌種與生物發(fā)光光度計結(jié)合的短期、經(jīng)濟、快速的測試方法。發(fā)光菌急性毒性檢驗方法是采用生物發(fā)光光度計進行生物毒性檢驗的毒理學(xué)方法之一，與傳統(tǒng)毒性檢測方法相比具有簡便、快速、靈敏等優(yōu)勢，在環(huán)境毒理學(xué)中對環(huán)境污染物風險評價等方面有重要意義。在毒性測試方面應(yīng)用的發(fā)光菌現(xiàn)在主要有：明亮發(fā)光桿菌[10]、費氏弧菌[11， 12]、青?；【鶾13～15]。1995年中國就頒布了適用于工業(yè)廢水、納污水體及實驗室條件

7、下可溶性化學(xué)物質(zhì)的《水質(zhì)急性毒性的測定發(fā)光菌法》（GB/T 15441-1995）國家標準。 </p><p>　　青?；【?985年中國學(xué)者朱文杰等從青海湖產(chǎn)的青海裸鯉體表分離到一種新型淡水發(fā)光菌，并命名為青?；【?，其典型菌株是Q-67[15]。通過國內(nèi)朱文杰、馬梅、劉樹深等的努力，建立了使用Q-67能與明亮發(fā)光桿菌相提并論的淡水發(fā)光菌毒性測試方法[13， 14]。此方法測定污染物質(zhì)毒性是以Veritas T

8、 M微孔板光度計為發(fā)光強度測試設(shè)備，以有毒物質(zhì)對發(fā)光菌發(fā)光強度抑制表征毒性大小的新方法。該法具有應(yīng)用范圍廣、靈敏度高、相關(guān)性好、反應(yīng)速度快、自動化程度高、人為錯誤少等優(yōu)點；與明亮發(fā)光桿菌方法相比，具有無鹽度干擾、pH范圍廣等特點[16]。 </p><p>　　在水體環(huán)境中，物化指標并不能從整體上反映水質(zhì)的好壞，尤其是對存在低濃度污染物質(zhì)的水體，而且對于污染物的毒性來說，并不是取決于相關(guān)化學(xué)參數(shù)。普通水質(zhì)指標已經(jīng)

9、不能完全滿足水質(zhì)對人體健康風險評價要求。在進行水體快速毒性評價時，選擇有代表性的毒性測試方法和測試生物是非常有必要的，現(xiàn)在用的一般毒理性測試方法有：魚類（斑馬魚）[17]、發(fā)光細菌[13]、海藻[18]、黑褐新糠蝦[19]、底棲軟體動物[20]等。 </p><p><b>　　3青?；【芯?</b></p><p><b>　　3.1基本研究 </

10、b></p><p>　　青?；【鶴-67發(fā)現(xiàn)以來，很多學(xué)者對它進行了相關(guān)研究，極大地推動了其在相關(guān)領(lǐng)域的應(yīng)用。鄭敬民等通過實驗探討了環(huán)境因子對青海弧菌生長和發(fā)光的影響[21]，發(fā)現(xiàn)甘油對生長影響最大，氮對發(fā)光影響最大，并提出了比較合理的培養(yǎng)基配方。馬梅在論文完成期間對pH值、菌液濃度、反應(yīng)時間等因素對發(fā)光菌Q-67發(fā)光強度的影響做了相關(guān)研究[16]。劉清等對幾種單質(zhì)金屬的聯(lián)合毒性進行了研究[22]，初步探

11、討了兩種物質(zhì)之間的拮抗、加和以及協(xié)同作用。莫凌云等對5種取代酚化合物對淡水發(fā)光菌的聯(lián)合毒性的研究中，還對單個取代酚化合物毒性進行了測試[23]。 </p><p><b>　　3.2應(yīng)用研究 </b></p><p>　　從劉清等1997年利用Cu、Zn、Cd、Hg對青海弧菌（Q67菌株）聯(lián)合毒性作用的研究開始，青海弧菌逐步應(yīng)用于毒性測試研究[22]?，F(xiàn)在已經(jīng)對很多有

12、毒單質(zhì)物質(zhì)進行過測試研究，還對無機、有機有毒化合物進行過研究?，F(xiàn)在大多數(shù)學(xué)則都傾向于進行物質(zhì)的混合毒性研究。如莫凌云等對苯酚與苯胺衍生物對發(fā)光菌的聯(lián)合毒性[24]；肖菊等均勻設(shè)計用于研究硝基苯衍生物對青海弧菌Q67的聯(lián)合毒性[25]；熊蔚蔚等等毒性配比法研究鎘、鉻和鉛對淡水發(fā)光細菌的聯(lián)合毒性[26]；其中劉樹深團隊建立化學(xué)混合物毒性評估與預(yù)測（APTox）的方法體系取得很好成功[27]。 </p><p>　　青

13、?；【鶴-67 在環(huán)境激素物質(zhì)方面研究比較少，一般都是以有毒物質(zhì)進行研究而忽略了作為環(huán)境激素的影響。如：吳淑杭發(fā)光細菌法快速檢測農(nóng)產(chǎn)品中主要污染物聯(lián)合毒性技術(shù)研究[28]；莫凌云等對苯酚與苯胺衍生物對發(fā)光菌的聯(lián)合毒性[24]；王婧費氏弧菌和青?；【诳股貦z測技術(shù)中的應(yīng)用研究[29]； 楊潔等11 種農(nóng)藥對淡水發(fā)光細菌青?；【鶴67的毒性研究[30]，其中包含了多種環(huán)境激素類農(nóng)藥。 </p><p><b&

14、gt;　　4展望 </b></p><p>　　現(xiàn)在青?；【鶴-67除了在土壤、大氣、水的監(jiān)測中使用外，在其他不同類型污染分析中也逐漸被使用： 單組分物質(zhì)毒性；無機物、有機物毒性測試；多組分混合物質(zhì)聯(lián)合毒性等。馬義兵等應(yīng)用于土壤中Cu急性毒性的測試[31]；楊潔等使用Q-67對11種農(nóng)藥進行了毒性測試[30]；張瑾等對30種離子液體進行了毒性效應(yīng)測試[32]；劉?S等進行了河流底泥毒性試驗[33]。

15、 　　青?；【鶴-67的應(yīng)用現(xiàn)在還只限于急性毒性方面，在其他毒性方面研究還落后于其他類發(fā)光細菌。顧宗濂等使用明亮發(fā)光桿菌T9171暗變種對土地處理后的工業(yè)廢渣進行了致突變測試，取得了與傳統(tǒng)Ames試驗檢測趨勢相象的結(jié)果[34]；他們在發(fā)光細菌暗變種T9171對化合物的致突變效應(yīng)靈敏度研究中發(fā)現(xiàn)其比Ames試驗在致突變性檢測更靈敏、快速[35]。宋一之等使用發(fā)光細菌基因luxCDABE與不動桿菌ADP1重組得到具有較高遺傳穩(wěn)定性并能測定環(huán)

16、境樣品遺傳毒性的組合細菌[36]。 </p><p><b>　　5總結(jié) </b></p><p>　　青?；【鶴-67經(jīng)過這些年的研究，在急性毒性檢測方面與明亮發(fā)光桿菌以及費氏弧菌等常用菌屬步調(diào)相差不大，在相關(guān)分子結(jié)構(gòu)、基因等方向也開始進行研究。在用發(fā)光細菌對環(huán)境激素毒性以及“三致”、遺傳毒性等方面，常用菌屬都還不多。靈敏、快速、準確、廉價的遺傳毒性測定，對研究全球

17、日益不斷的激素污染而言將會是一個極大的鼓舞。 </p><p><b>　　參考文獻： </b></p><p><b>　　[1] </b></p><p>　　李宏圖， 英國工業(yè)革命時期的環(huán)境污染和治理[J]. 探索與爭鳴， 2009（2）： 60～64. </p><p>　　[2]J Tlg

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36、;p>　　Abstract： A new micro-plate luminomery forthe toxicity bioassay of environmental pollutant on the new freshwater luminecentbacteria， Vibrio-qinghaiensis s p.-Q67 as testingbiont， was developed using VeritasTM Mic

37、roplateluminometer to measure the luminous intensity. With the studiesof freshwater luminescent bacteria Q-67 ongoing，apart fromPhoto-bacterium phosphorus and Vibrio-fischeri bacteria，it has become the major bacteria on