高油、低酚棉種質(zhì)創(chuàng)新研究初探.pdf

1、中圖分類號：0812密級：公開UDC570學(xué)校代碼：10049訝謄￡解■刪罵二腳碩士學(xué)位論文(學(xué)歷碩士)高油、低酚棉種質(zhì)創(chuàng)新研究初探PreliminaryStudyonInnovationofNewCottonSpecieswithHighOilandLowGossypolContent研究生姓名：指導(dǎo)教師：學(xué)科專業(yè)：研究方向：論文開題日期：圭占日日畝五日日日日王立安教授李偉明研究員生物化學(xué)與分子生物學(xué)基因工程2012年10月14日二O

2、一四年三月十日h拿尤乒已4◆摘要棉花是重要的經(jīng)濟(jì)作物，它不但給人類提供纖維原料，而且棉籽中含有極為豐富的蛋白質(zhì)、脂肪、維生素等營養(yǎng)物質(zhì)。棉籽是非常重要的植物油料植物蛋白資源。然而，棉籽中含有少量的棉酚及其衍生物，容易破壞人和單胃動物的胃粘膜，引起消化功能的紊亂，這成為長期阻礙人們更好地開發(fā)和利用棉籽的重要原因。目前，有關(guān)棉籽含油量及油分改良的遺傳研究還比較少；雖然有低酚棉品種的問世，但由于其較低的抗病蟲害性而導(dǎo)致棉花整體效益降低。所以研

3、發(fā)含油量高、棉酚低(植株高酚、棉籽低酚)的種質(zhì)資源對棉花育種具重要意義。本研究構(gòu)建了以棉花種子Q一球蛋白啟動子驅(qū)動的磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(Phosphoenolpyruvatecarboxylase，PEPC)基因的RNAi載體以及()一6一杜松烯合成酶基因的RNAi載體，特異性抑制棉花種子中PEPC的活性及棉酚的合成，進(jìn)而達(dá)到高油、低酚(植株高酚、棉籽低酚)棉的育種目標(biāo)。主要結(jié)果如下：1克隆了棉花種子a一球蛋白啟動子，與已報(bào)道的序列

4、相似性達(dá)998％；構(gòu)建了Q一球蛋白啟動子GUS報(bào)告基因的雙元表達(dá)載體，通過凍融法將該載體轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404，獲得了可直接用于植物轉(zhuǎn)化的含有該載體的農(nóng)桿菌生物工程菌。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將該基因轉(zhuǎn)入煙草，PCR檢測獲得轉(zhuǎn)基因植株，為鑒定該啟動子表達(dá)的組織特異性以及棉花種子特異性表達(dá)基因工程奠定了基礎(chǔ)。2克隆了棉花PEPC基因，與已報(bào)道基因的序列相似性達(dá)956％；構(gòu)建了fit一球蛋白啟動子驅(qū)動的PEPC基因的RNAi載體，并采用凍融法

5、將其轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404，獲得了含有上述載體的農(nóng)桿菌生物工程菌。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化棉花愈傷組織，獲得了抗性愈傷組織和胚狀體。3克隆了棉花()一6一杜松烯合成酶基因，經(jīng)比對該基因?qū)儆贑DAlC家族；構(gòu)建了Q一球蛋白啟動子驅(qū)動的()一6一杜松烯合成酶基因的RNAi載體，采用凍融法將其轉(zhuǎn)入根癌農(nóng)桿菌LBA4404，獲得了含有上述載體的農(nóng)桿菌生物工程菌。采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法轉(zhuǎn)化棉花下胚軸，并經(jīng)誘導(dǎo)獲得了抗性愈傷組織胚狀體。關(guān)鍵詞：棉花Q一