天灸對(duì)lewis肺癌

1、<p>　申請(qǐng)代碼：C03050309</p><p>　受理部門(mén)：</p><p>　收件日期：</p><p>　受理編號(hào)：</p><p><b>　　國(guó)家自然科學(xué)基金</b></p><p><b>　　申 請(qǐng) 書(shū)</b></p><p&

2、gt;<b>　　資助類別：面上項(xiàng)目</b></p><p>　　亞類說(shuō)明：自由申請(qǐng)項(xiàng)目</p><p><b>　　附注說(shuō)明： </b></p><p>　　項(xiàng)目名稱：天灸對(duì)Lewis肺癌化療小鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因表達(dá)及其免疫功能的影響</p><p>　　申 請(qǐng) 者：王勇

3、 電話： 053182614117 </p><p>　　依托單位：山東中醫(yī)藥大學(xué) </p><p>　　通訊地址：濟(jì)南市經(jīng)十路53號(hào) </p><p>　　郵政編碼：250014 單位電話：0531-2622196 </p><p>　　電子郵件：wangyong820318@yahoo.com </p>

4、<p>　　申報(bào)日期： 2006年5月20日</p><p>　　國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)</p><p>　　基本信息1YThcng7</p><p>　　項(xiàng)目組主要成員（注: 項(xiàng)目組主要成員不包括項(xiàng)目申請(qǐng)者，國(guó)家杰出青年科學(xué)基金類項(xiàng)目不填寫(xiě)此欄。）</p><p>　　說(shuō)明: 高級(jí)、中級(jí)、初級(jí)、博士后、博

5、士生、碩士生人員數(shù)由申請(qǐng)者負(fù)責(zé)填報(bào)（含申請(qǐng)者），總?cè)藬?shù)自動(dòng)生成。</p><p>　　經(jīng)費(fèi)申請(qǐng)表 （金額單位：萬(wàn)元）</p><p><b>　　報(bào)告正文</b></p><p>　?。ㄒ唬┝㈨?xiàng)依據(jù)與研究?jī)?nèi)容：</p><p>

6、;　　1、項(xiàng)目的立項(xiàng)依據(jù)（附主要的參考文獻(xiàn)目錄）：</p><p>　　肺癌的發(fā)病率在我國(guó)居常見(jiàn)腫瘤的前列，而且絕大多數(shù)肺癌患者就診時(shí)腫瘤 已達(dá)晚期，大部分病人失去了手術(shù)的機(jī)會(huì)。目前，化療是治療腫瘤的重要方法，約 70-80%的肺癌患者接受化療[1]?；煖p輕病情的同時(shí)也對(duì)正常組織細(xì)胞、臟器 的生理功能有一定程度的破壞作用,并抑制機(jī)體的免疫功能和骨髓造血功能等, 從而影響化療的繼續(xù)進(jìn)行。因此,防治化療毒性反應(yīng)是癌

7、癥治療的重要課題。</p><p>　　天灸是將具有刺激性的藥物貼敷在穴位上，使局部皮膚充血、發(fā)泡，甚至化 膿，有如灸瘡，故曰天灸。天灸通過(guò)刺激相應(yīng)的腧穴或患處，調(diào)理臟腑，行氣活 血，調(diào)和陰陽(yáng)，達(dá)到治療疾病目的的一種外治法。因?yàn)槠淇梢砸鹌つw局部起泡 所以也叫做“發(fā)泡灸”；相對(duì)于火灸、艾灸來(lái)講，因?yàn)椴恍枰獰嵩矗砸步凶?“冷灸”；利用藥物本身對(duì)皮膚的刺激性就可以達(dá)到灸的效果，所以也叫做“自 灸”。天灸是傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)

8、中較為獨(dú)特的外治法，有數(shù)千年的歷史，一直沿用至今， 現(xiàn)也稱為穴位藥物貼敷療法。它將中醫(yī)透皮給藥與經(jīng)絡(luò)穴位相結(jié)合，通過(guò)藥物刺 激經(jīng)絡(luò)、腧穴，對(duì)機(jī)體產(chǎn)生內(nèi)在的調(diào)節(jié)作用，從而達(dá)到治療疾病的目的?，F(xiàn)代研 究認(rèn)為，天灸對(duì)皮膚產(chǎn)生刺激，擴(kuò)張毛細(xì)血管，改善局部血液循環(huán)；刺激皮膚的 神經(jīng)感受器，通過(guò)神經(jīng)反射達(dá)到提高機(jī)體免疫力的作用。另一方面由于天灸集艾 灸、中藥于一體，可以使腧穴局部自動(dòng)加熱有利于藥物的吸收，藥物的有效成份 經(jīng)皮膚表面的角質(zhì)層、毛囊皮脂

9、腺及汗管等滲透吸收進(jìn)血液、淋巴液、內(nèi)分泌液 中，發(fā)揮一定的藥理作用。 </p><p>　　天灸療法越來(lái)越受到學(xué)者和專家們的重視，尤其是近十幾年來(lái)，在理論探討 和臨床應(yīng)用等方面，均有突破性的創(chuàng)新，并開(kāi)始用于疑難雜癥的治療。例如趙氏[2] 觀察天灸治療非感染性尿道綜合征，與西藥組比較，天灸組痊愈 13(40.6%)好轉(zhuǎn) 14(43.7%)無(wú)效 5(15.7%)總有效率 84.3%；對(duì)照組痊愈 2（6%）好轉(zhuǎn) 9(3

10、3%)無(wú)效 19(61%)總有效率 39%。兩組比較差異有顯著性（P<0.01）。說(shuō)明天灸在治療 尿道綜合癥方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。發(fā)泡療法用于治療慢性氣管炎[3]和支氣管哮喘[9]有大 量報(bào)導(dǎo)，還有用于三叉神經(jīng)痛[4]、過(guò)敏性鼻炎[5][6]、乳腺纖維囊腫[7]、腮腺炎、風(fēng)濕性關(guān) 節(jié)炎、硬皮病[8]、肩周炎[10]、肱骨外上髁炎[11]、慢性乙型肝炎[12]、獲得性寒冷性蕁麻疹、 額竇炎、梅核氣、慢性潰瘍性結(jié)腸炎、強(qiáng)直性脊椎炎[13]

11、、胃脘痛[14]均獲得滿意的療效，臨床例證不勝枚舉。在基礎(chǔ)理論研究方面，據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，天灸可調(diào)節(jié)化療 大鼠下丘腦、垂體中β-內(nèi)啡肽（β-Ep）水平[15]，改善環(huán)磷酰胺大鼠的造血功能和 免疫功能，提高荷瘤小鼠的T淋巴細(xì)胞的應(yīng)答能力和NK細(xì)胞[1</p><p>　　本研究選擇肺癌作為研究對(duì)象，一是因?yàn)榉伟┦俏覈?guó)最常見(jiàn)的腫瘤之一，積極開(kāi)展中西醫(yī)結(jié)合防治肺癌研究具有較大的現(xiàn)實(shí)意義；二是約 70-80%的肺癌患者接受化療

12、?；煖p輕病情的同時(shí)也對(duì)正常組織細(xì)胞、臟器的生理功能有一定程度的破壞作用,并抑制機(jī)體的免疫功能和骨髓造血功能等, 從而影響化療的繼續(xù)進(jìn)行。因此,防治化療毒性反應(yīng)是癌癥治療的重要課題，而天灸正是防治化療毒性反應(yīng)的臨床和基礎(chǔ)行之有效的方法。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)研究移植性 Lewis肺癌小鼠經(jīng)天灸治療和順鉑化療后機(jī)體的免疫功能和腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的表達(dá)了解天灸在肺癌治療過(guò)程中的增效減毒作用.本實(shí)驗(yàn)采用 MTT 法檢測(cè) Lewis 肺癌化療小鼠脾臟 NK

13、細(xì)胞活性，采用放射免 疫分析法檢測(cè) Lewis 肺癌化療小鼠外周血白細(xì)胞介素-2（IL-2）水平，研究天灸 對(duì)小鼠免疫功能的影響。此研究的意義在于為天灸在臨床治療肺癌過(guò)程中的增效減毒作用提供理論依據(jù)，為中西醫(yī)結(jié)合治療肺癌方面進(jìn)行一些有益的嘗試。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1] 張小東譯;《腫瘤治療學(xué)》.人民衛(wèi)生出版社,200

14、1.4,421-428</p><p>　　[2]趙立巖,李南玲,天灸治療非感染性尿道綜合征 32 例臨床觀察,中國(guó)中西 醫(yī)結(jié)合雜志,2003，23(11):822. </p><p>　　[3] 左愛(ài)欣,三伏天灸治療慢性支氣管炎 150 例,河北中醫(yī),1997，19(2):37.</p><p>　　[4] 周念興,天灸療法治療三叉神經(jīng)痛臨床觀察,實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志

15、,1995， 9(2):34. </p><p>　　[5] 夏 翠 霞 , 三 伏 天 灸 治 療 過(guò) 敏 性 鼻 炎 360 例 , 遼 寧 中 醫(yī) 雜 志,1996,23(4):184. </p><p>　　[6] 史正耀,大蒜天灸治療過(guò)敏性鼻炎 120 例,陜西中醫(yī),1997，18(1):31.</p><p>　　[7] 汪慧敏,貼敷加天灸治療乳腺纖維囊

16、腫,浙江中醫(yī)雜志,1997，32(8):374. </p><p>　　[8] 劉玉環(huán),張仁尊,崔淑杰,天灸治療硬皮病,針灸臨床雜志,1997， 13(3):39-40. </p><p>　　[9] 王建新,天灸療法防治支氣管哮喘 72 例臨床小結(jié),現(xiàn)代中醫(yī),1997， 10(3):161-163.</p><p>　　[10] 章進(jìn),太淵穴天灸方治療肩周炎 48

17、 例,中醫(yī)外治雜志,1998，7(6):14-15.</p><p>　　[11] 高素秋,天灸治療肱骨外上髁炎 100 例,江蘇中醫(yī),1999，20(6):39. </p><p>　　[12] 陳海英,林咸明,劉勇,天灸結(jié)合穴位注射治療慢性乙型肝炎療效與 HB， DNA 含量之間的關(guān)系,中國(guó)針灸,1999，19(12):729-730. </p><p>　　[

18、13] 楊平梅,天灸發(fā)泡法治療風(fēng)濕痹癥,針刺研究,2000，25(2):151-152.</p><p>　　[14] 袁堅(jiān)榮,劉炳權(quán),天灸治療虛寒性胃痛 365 例臨床觀察,針灸臨床雜 志,2001，17(8):52. </p><p>　　[15] 孫德利,方劍喬,陳華德,天灸對(duì)環(huán)磷酰胺大鼠β-內(nèi)啡肽含量的影響,中國(guó)中醫(yī)藥科技,20018(5):279-280. </p>

19、<p>　　[16] 韓毳,李學(xué)武,劉震,天灸抗小鼠移植性腫瘤作用及對(duì)免疫功能的影響,天津中醫(yī),200118(5):30-31. [17] 孫德利,陳漢平,吳煥淦,天灸對(duì)小鼠造血功能的影響及其機(jī)理的探討,針 刺研究,1999，24(3):206-211.</p><p>　　2.項(xiàng)目的研究?jī)?nèi)容、研究目標(biāo)以及擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題。</p><p><b>　　2.1研究?jī)?nèi)容

20、：</b></p><p>　?。?）天灸對(duì) Lewis 肺癌化療小鼠的減毒作用。</p><p>　?。?）天灸對(duì) Lewis 肺癌化療小鼠脾 NK 細(xì)胞活性及血清 IL-2 水平的研究。</p><p>　?。?）天灸對(duì) Lewis 肺癌化療小鼠的癌細(xì)胞生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)移及 nm23-M1 基因表達(dá)的研究。</p><p><b

21、>　　2.2研究目標(biāo)：</b></p><p>　　通過(guò)天灸腎俞穴，觀察其對(duì)Lewis肺癌小鼠體重變化、飲食情況、脾臟NK細(xì)胞活性、血清IL-2水平、腫瘤組織形態(tài)學(xué)、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因（nm23-M1）的蛋白表達(dá)、nm23-M1基因的 mRNA 表達(dá)的影響，為開(kāi)拓天灸防治化療反應(yīng)提供基礎(chǔ)研究，為臨床應(yīng)用提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。</p><p>　　2.3擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：<

22、;/p><p>　?。?）腎俞穴在小鼠身上的定位。</p><p>　?。?）小鼠脾臟NK細(xì)胞活性、小鼠血清IL-2水平的測(cè)定。</p><p>　?。?）腫瘤組織形態(tài)學(xué)的觀察。</p><p>　?。?）腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的蛋白表達(dá)。</p><p>　?。?）nm23-M1基因的mRNA表達(dá)</p><

23、;p>　　3.擬采取的研究方案及可行性分析：</p><p><b>　　3.1研究方案：</b></p><p>　　（1）參照林文注主編的《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》大鼠的腎俞穴的定位。</p><p>　?。?）用MTT法和用放射免疫分析法：MTT法：①制備脾細(xì)胞：貼敷治療結(jié)束后隔日取材, 摘眼球取血，脫頸處死小鼠，75% 乙醇溶液浸泡消毒，無(wú)菌

24、取脾，置于少量冷不完全 1640 培養(yǎng)液中（按 10.4g 加 1000ml 雙蒸水、加入終濃度為 20mM 的 HEPES、16mM 的 NaHCO3、1mM 的丙酮酸鈉, 配成不完全 1640 培養(yǎng)基,過(guò)濾除菌；），研磨，200 目篩網(wǎng)過(guò)濾，濾液移入 50ml 離心管， 1500r/min 4℃離心 10 min。棄上清，以無(wú)菌 Tris-NH4Cl 溶液（Tris， 以雙蒸水配成 0.17M 溶液，用鹽酸調(diào) PH 至 7.2-7.

25、4；NH4Cl，以雙蒸水配成 0.16M 溶液，4℃保存?zhèn)溆?。臨用時(shí)二者以體積比 1:9 混合成工作液。）作用 10min 破壞 紅細(xì)胞，同上法離心后棄上清，冷不完全 1640 培養(yǎng)液重懸，洗滌 2 次，洗滌后 用完全1640培養(yǎng)液（不完全1640培養(yǎng)液臨用時(shí)加入100 u/ml的青霉素和100 μ g/ml 的鏈霉素、2mM 的 L-谷氨酰胺，配成含 10%滅活胎牛血清的完全 1640 培養(yǎng) 基。）重懸并調(diào)細(xì)胞濃</p>

26、<p>　?。?）HE染色，光鏡觀察：小鼠的腫瘤組織，切成 2mm 厚，放入 10%福爾馬林溶液內(nèi)固定。用低溫石蠟 包埋，4祄 連續(xù)切片，①切片常規(guī)脫蠟至水;②蘇木素染色 10m; ③1%鹽酸酒精分 化; ④流水沖洗 2h 藍(lán)化; ⑤脫水 70%乙醇、80%乙醇、90%乙醇各 5m，95%乙醇Ⅰ 15m; ⑥入伊紅酒精溶液 5m;95%乙醇Ⅱ5m;100%乙醇Ⅰ5m;100%乙醇Ⅱ5m; ⑦透 明:二甲苯Ⅰ15m;二甲苯Ⅱ1

27、5m; ⑧中性樹(shù)膠封片，室溫晾干，光鏡下觀察。</p><p>　?。?）用免疫組織化學(xué)法：①切片常規(guī)脫蠟至水;②3%H2O2 室溫滅活內(nèi)源性過(guò)氧化物酶 10min,蒸餾水洗 3 次;③微波抗原修復(fù):切片浸入 1mmol/LEDTA（PH8.0）液中,微 波爐中加熱至 100℃,5min,冷卻后再加熱至 100℃,5min,冷卻;④滴加抗原修復(fù) 液,室溫 10min, PBS 沖洗 3 次;⑤血清封閉,室溫 20

28、min;⑥滴加一抗 1：100 稀釋 的一抗 nm23-M1，30μl，4℃過(guò)夜。PBS 洗 5min×3 次。同時(shí)用 PBS 代替一抗作 陰性對(duì)照;⑦滴加生物素化山羊抗兔 IgG,37℃,20min, PBS 洗 5min×3 次;⑧滴加 試劑 SABC,37℃20min, PBS 洗 5min×4 次;⑨DAB 顯色, 室溫 5-30m，光鏡下控制 時(shí)間。⑩常規(guī)脫水,透明, 中性樹(shù)膠封片。計(jì)算機(jī)圖象分析

29、 nm23-M1 表達(dá)的面積 與整個(gè)視野的面積比。</p><p>　?。?）采用實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法：①?gòu)慕M織中提取總 RNA。 腫瘤組織加 Trizol 后（100mg 組織/1ml Trizol），用槍頭充分?jǐn)噭?dòng)以使液 體粘稠，室溫放置 5 分鐘，使其充分裂解。4℃ 12000g 離心 15 分鐘，取上清。 按 200μl 氯仿/mlTrizol 加入氯仿（預(yù)冷），充分搖勻 15 秒，室溫放置 15

30、 分鐘。4℃ 12000g 離心 15 分鐘。 吸取上層水相，至另一個(gè)預(yù)冷的離心管中。 按 0.5ml 異丙醇/ml Trizol 加入異丙醇（預(yù)冷）混勻，室溫放置 5-10min。 4℃ 12000g 離心 10min，棄上清，RNA 沉于管底。 按 1ml 75%乙醇/ml Trizol 加入 75%乙醇（預(yù)冷），溫和震蕩離心管，懸浮 沉淀。 4℃ 7500g 離心 5min，盡量棄上清。室溫晾干 5-10min。用 50μl RN

31、ase-free H2O,溶解 RNA 樣品，55-60℃ 10min。-80℃保存待測(cè)。②用分光光度法測(cè)定所提取 RNA 的濃度 分光光度計(jì)先用 1ml 水校正零點(diǎn)。比色杯使用前用濃鹽酸:甲醇（1:1）浸泡 1 小</p><p><b>　　3.2可行性分析：</b></p><p>　?。?）腎俞是足太陽(yáng)膀胱經(jīng)的穴位，是腎氣輸注于體表的部位，具有較好的培補(bǔ)腎元的

32、功效，先天得充則后天得養(yǎng)，對(duì)于提高機(jī)體的防治化療毒性反應(yīng)有很好的作用。</p><p>　?。?）本課題組成員學(xué)歷、年齡結(jié)構(gòu)合理，具有較扎實(shí)的理論基礎(chǔ)和熟練的操作技能。</p><p>　?。?）本課題組對(duì)天灸的理論知識(shí)和臨床應(yīng)用具有扎實(shí)的基礎(chǔ)，本實(shí)驗(yàn)室能熟練的操作MTT法和用放射免疫分析法、HE染色，光鏡觀察、用免疫組織化學(xué)法、實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR法。</p><

33、p>　?。?）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 C57BL/6J 近交系小鼠，7～8 周齡，體重 17～21g，60 只，雌雄各半，清潔 級(jí)。動(dòng)物由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物研究中心提供。</p><p>　　因此，本實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目可行性強(qiáng)，可按期保質(zhì)完成。</p><p>　　4. 本項(xiàng)目的特色與創(chuàng)新之處。</p><p>　　本項(xiàng)目的特色在于：采用現(xiàn)代科學(xué)技術(shù)將天灸腎俞穴在抗腫瘤化療中的增效減

34、毒作用機(jī)制、加強(qiáng)化療對(duì) Lewis 肺癌小鼠癌細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用、對(duì)化療小鼠免疫功能有調(diào)節(jié)作用、對(duì)化療小鼠 nm23-M1 基因表達(dá)的促進(jìn)作用比較客觀的表示出來(lái)。</p><p>　　本項(xiàng)目的創(chuàng)新在于：（1）首次開(kāi)展天灸對(duì)肺癌化療小鼠腫瘤組織的 nm23-M1 基因蛋白含量的研究。（2）首次開(kāi)展天灸對(duì)肺癌化療小鼠腫瘤組織的 nm23-M1 基因 mRNA 表達(dá)的研 究。 本實(shí)驗(yàn)以中醫(yī)天灸療法為研究目標(biāo)，運(yùn)用現(xiàn)代免

35、疫學(xué)、分子生物學(xué)技術(shù)等現(xiàn) 代科學(xué)手段，開(kāi)展了天灸“腎俞”穴對(duì)抗腫瘤化療增效減毒機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究，更深入探討了天灸的治病機(jī)理并取得了重要的研究成果。目前這方面的研究達(dá)到分 子水平、基因水平的研究較少，我們運(yùn)用基因?qū)W技術(shù)，將“天灸療法”的實(shí)驗(yàn)研 究提高到新的水平。豐富了中醫(yī)天灸理論。隨著進(jìn)一步研究，將天灸與化療藥物 作用有機(jī)結(jié)合，將開(kāi)發(fā)出有效的化療藥物減毒增效劑和減毒增效方法。</p><p>　　5.年度研究計(jì)劃及預(yù)

36、期研究結(jié)果。</p><p>　　5.1年度研究計(jì)劃：</p><p>　　2006.7－2006.8 完成試驗(yàn)材料和試劑的準(zhǔn)備，查閱資料，查新檢索。</p><p>　　2006.9－2006.10 完成小鼠脾 NK 細(xì)胞活性及血清 IL-2 水平的測(cè)定。</p><p>　　2006.11－2007.1 完成腫瘤組織形態(tài)學(xué)的觀察

37、、腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的蛋白表達(dá)和nm23-M1基因的mRNA表達(dá)。</p><p>　　2007.2－2007.5 課題總結(jié)、鑒定并申報(bào)成果。</p><p>　　5.2 預(yù)期研究結(jié)果：</p><p>　　（1）天灸療法可以使小鼠血清 IL-2 含量升高，脾臟 NK 細(xì)胞活性增強(qiáng)，天灸組的 NK 細(xì)胞活性最強(qiáng)</p><p>　?。?）天

38、灸對(duì)化療小鼠 nm23-M1 基因表達(dá)有促進(jìn)作用。</p><p>　?。?）天灸療法對(duì) Lewis 肺癌化療小鼠有減毒作用：抑制化療肺癌小鼠體重減輕，食欲降低，飲食量減少。</p><p>　?。?）所獲研究成果，擬在國(guó)家級(jí)刊物發(fā)表學(xué)術(shù)論文5－6篇，及時(shí)進(jìn)行成果鑒定，并申報(bào)科技進(jìn)步獎(jiǎng)。</p><p>　?。ǘ┭芯炕A(chǔ)與工作條件</p><p

39、>　　1. 工作基礎(chǔ)</p><p>　　1.1 研究工作積累</p><p>　　實(shí)踐積累：2000多年的實(shí)踐證明，天灸對(duì)虛弱疾病患者（本實(shí)驗(yàn)為移植性 Lewis肺癌小鼠）機(jī)體的恢復(fù)有很好的效果。</p><p>　　理論積累：通過(guò)對(duì)國(guó)內(nèi)有關(guān)天灸治療研究情況進(jìn)行檢索，掌握了該領(lǐng)域的研究現(xiàn)狀，從而選擇恰當(dāng)?shù)那腥朦c(diǎn)進(jìn)行研究。</p><

40、;p>　　技術(shù)積累：本實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)完全掌握了天灸技術(shù)的操作，掌握了分子生物學(xué)、現(xiàn)代免疫學(xué)技術(shù)，為完成本實(shí)驗(yàn)打下了良好的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。</p><p>　　已取得的研究工作成績(jī)</p><p>　　已經(jīng)初步經(jīng)實(shí)驗(yàn)得知天灸腎俞可以提高大鼠的造血功能，試驗(yàn)結(jié)果表明可以提高大鼠自身的免疫能力。</p><p>　　2. 工作條件</p><p>

41、;　　山東中醫(yī)藥大學(xué)、山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院、山東省中醫(yī)藥研究所具備了與本次實(shí)驗(yàn)相關(guān)的儀器，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院動(dòng)物研究中心提供實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 C57BL/6J 近交系小鼠，7～8 周齡，體重 17～21g，60 只，雌雄各半，清潔 級(jí)。本校實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物中心有良好的SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)設(shè)備和條件。設(shè)備和設(shè)施完全滿足本項(xiàng)目的實(shí)驗(yàn)所需。</p><p>　　3. 申請(qǐng)人簡(jiǎn)歷</p><p>　　王勇，男，1972

42、年3月出生。1995年畢業(yè)于山東中醫(yī)藥大學(xué)針灸專業(yè)，獲碩士學(xué)位。1998年畢業(yè)于山東中醫(yī)藥大學(xué)針灸專業(yè)，獲博士學(xué)位，主任醫(yī)師，一直從事中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤的工作。近期發(fā)表的于本課題有關(guān)的論文有：</p><p>　　1. 王勇. 天灸的歷史沿革. 山東中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào) 2003；10（1）：48 </p><p>　　2. 王勇. 天灸的臨床應(yīng)用綜述. 中國(guó)針灸雜志2005；

43、21（1）：4</p><p>　　在本項(xiàng)研究中負(fù)責(zé)課題設(shè)計(jì)、組織實(shí)施、實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)收集、整理、統(tǒng)計(jì)等工作。</p><p>　　程勇，男，1964年12月11日生。1990年畢業(yè)于大連醫(yī)科大學(xué)腫瘤病理專業(yè)，獲醫(yī)學(xué)碩士學(xué)位，2000年畢業(yè)于山東中醫(yī)藥大學(xué)中西醫(yī)結(jié)合腫瘤專業(yè)，獲醫(yī)學(xué)博士學(xué)位，主任醫(yī)師，一直從事中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤的研究，近年來(lái)發(fā)表論文10余篇。近期發(fā)表的與本課題相關(guān)的論文有：<

44、;/p><p>　　1.程勇.　中西醫(yī)結(jié)合防治腫瘤的理論探討.　中國(guó)中醫(yī)學(xué)雜志　2000；5（4）：23</p><p>　　2.程勇.　天灸對(duì)肺癌一組移植小鼠脾臟NK細(xì)胞活性、小鼠血清IL-2水平的影像.　2005；6（15）：45</p><p>　　在本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中負(fù)責(zé)天灸的實(shí)施和小鼠脾臟NK細(xì)胞活性、小鼠血清IL-2水平的測(cè)定和腫瘤組織形態(tài)學(xué)的觀察。</p&g

45、t;<p>　　郭俊國(guó)，男，1972年3月24日出生。1994年畢業(yè)于山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥專業(yè)，獲藥學(xué)碩</p><p>　　士學(xué)位，現(xiàn)任山東省中醫(yī)藥研究所實(shí)驗(yàn)師，近期發(fā)表學(xué)術(shù)論文1篇。</p><p>　　在本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中負(fù)責(zé)小鼠的飼養(yǎng)及體內(nèi)試驗(yàn)。</p><p>　　張加余，男，1969年5月23日出生。2004年業(yè)于山東中醫(yī)藥大學(xué)中藥專業(yè)，獲藥學(xué)博士&

46、lt;/p><p>　　學(xué)位，現(xiàn)任山東中醫(yī)藥大學(xué)副教授，近期發(fā)表論文2篇。</p><p>　　在本項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中負(fù)責(zé)動(dòng)物造模及實(shí)驗(yàn)。</p><p>　　馬本緒，男，1965年1月2日出生。2000年畢業(yè)于山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院，獲博士學(xué)位，現(xiàn)任</p><p>　　山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院副教授，近期發(fā)表的與本課題有關(guān)的論文有：</p><p

47、>　　馬本緒.　人類基因組計(jì)劃的展望.　中西醫(yī)結(jié)合臨床雜志　2002；5（1）：5</p><p>　　在本實(shí)驗(yàn)中負(fù)責(zé)腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因的蛋白表達(dá)和nm23-M1基因的mRNA表達(dá)</p><p>　　簽字和蓋章頁(yè)(此頁(yè)自動(dòng)生成,打印后簽字蓋章) </p><p>　　申 請(qǐng) 者：王勇 依托單位：山東中醫(yī)藥大學(xué) &

48、lt;/p><p>　　項(xiàng)目名稱：天灸對(duì)Lewis肺癌化療小鼠腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因表達(dá)及其免疫功能的影響 </p><p>　　資助類別：面上項(xiàng)目 亞類說(shuō)明：自由申請(qǐng)項(xiàng)目 </p><p><b>　　附注說(shuō)明： </b></p><p><b>　　申請(qǐng)者承諾：</b>

49、;</p><p>　　我保證申請(qǐng)書(shū)內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得基金資助，我將履行項(xiàng)目負(fù)責(zé)人職責(zé)，嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，認(rèn)真開(kāi)展工作，按時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。若填報(bào)失實(shí)和違反規(guī)定，本人將承擔(dān)全部責(zé)任。</p><p>　　簽字： </p><p>　　項(xiàng)目組主要成員承諾：</p><p&g

50、t;　　我保證有關(guān)申報(bào)內(nèi)容的真實(shí)性。如果獲得基金資助，我將嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的有關(guān)規(guī)定，切實(shí)保證研究工作時(shí)間，加強(qiáng)合作、信息資源共享，認(rèn)真開(kāi)展工作，及時(shí)向項(xiàng)目負(fù)責(zé)人報(bào)送有關(guān)材料。若個(gè)人信息失實(shí)、執(zhí)行項(xiàng)目中違反規(guī)定，本人將承擔(dān)相關(guān)責(zé)任。</p><p>　　依托單位及合作單位承諾：</p><p>　　已按填報(bào)說(shuō)明對(duì)申請(qǐng)人的資格和申請(qǐng)書(shū)內(nèi)容進(jìn)行了審核。申請(qǐng)項(xiàng)目如獲資助，我單位保證

51、對(duì)研究計(jì)劃實(shí)施所需要的人力、物力和工作時(shí)間等條件給予保障，嚴(yán)格遵守國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)有關(guān)規(guī)定，督促項(xiàng)目負(fù)責(zé)人和項(xiàng)目組成員以及本單位項(xiàng)目管理部門(mén)按照國(guó)家自然科學(xué)基金委員會(huì)的規(guī)定及時(shí)報(bào)送有關(guān)材料。</p><p>　　依托單位公章 合作單位公章1 合作單位公章2 </p><p>　　日期：