利用分子標記評估中國對蝦放流效果研究.pdf

1、中國對蝦是一種大型的經(jīng)濟蝦類,主要分布于我國黃渤海海域及朝鮮半島西海岸,同時是我國重要的漁業(yè)資源之一。但是由于受到過度捕撈、水域污染、工程建設等諸多人為因素的影響,到上世紀80年代初中國對蝦野生資源已嚴重衰退。漁業(yè)資源增殖在修復水域生態(tài)環(huán)境和恢復漁業(yè)資源等方面的工作中是較為常用并有效的手段。20世紀80年代初我國開始了中國對蝦的增殖和放流工作,并取得了很好的經(jīng)濟效益和社會效益。但是長期以來,受傳統(tǒng)放流標志的限制,對中國對蝦增殖放流效果一

2、直缺少一種可以精確評估的手段和方法。本文以分子標記為手段,探討了一種中國對蝦資源增殖放流效果評估的新方法,即利用特定中國對蝦家系個體摻入到放流群體中,形成“內(nèi)標”,回捕后利用微衛(wèi)星標記結(jié)合家系父母本識別“內(nèi)標”個體,據(jù)其數(shù)量推算放流量,從而實現(xiàn)放流回捕率效果評估的目的。以期為中國對蝦增殖放流的有效評估提供科學依據(jù),研究結(jié)果報道如下:
　　微衛(wèi)星分子標記符合孟德爾遺傳規(guī)律,且為共顯性遺傳標記,因此本文以自主開發(fā)的中國對蝦微衛(wèi)星序列中

3、,篩選出多態(tài)性豐富的FCKR002、FCKR005、FCKR007、FCKR009和FCKR013位點,結(jié)合已公開的EN0033、RS0622和RS1101三個位點,按照其退火溫度的不同,組成兩組四重 PCR反應體系,分別命名為高溫組和低溫組。組內(nèi)引物分別標以6-FAM、VIC、NED和PET熒光標記,通過ABI3130基因分析儀自動檢測個體的基因型。通過條件優(yōu)化建立了兩組微衛(wèi)星四重PCR反應體系,通過檢測發(fā)現(xiàn)該兩組 PCR反應體系均可

4、以較好的擴增出微衛(wèi)星位點遺傳信息,可以精確的進行個體的基因分型。
　　在隨機抽取200個中國對蝦個體中,利用優(yōu)化后的兩個四重 PCR反應體系共8個微衛(wèi)星位點,評估該兩個體系用于個體/家系的識別能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn),隨機抽取的中國對蝦遺傳多樣性檢測顯示,8個微衛(wèi)星位點在200個個體中共獲得225個等位基因,平均28.13個,平均 PIC值0.8939。在雙親基因型均未知、單親已知和雙親已知這三種情況下,兩組四重 PCR反應體系結(jié)合使用的累

5、積排除概率均達到99.99％以上水平,單獨使用的累積排除概率也可以達到95%以上。
　　在模擬放流的1786尾中國對蝦中,使用低溫組反應體系檢測基因型,利用Cervus軟件結(jié)合父母本信息,檢測分子識別檢測結(jié)果為191/300,三個家系的識別結(jié)果為35/100、64/100和92/100;結(jié)合物理 VIE熒光標志佐證的識別檢測結(jié)果為186/300,三個家系的識別結(jié)果為34/100、60/100和92/100。分子標記的檢出率要大于物

6、理標記的檢出率,對此我們再利用高溫組檢測以增加其排除概率,結(jié)果發(fā)現(xiàn)并不能排除多檢出的個體分屬正確的各家系。因此從一定程度上說明了分子標志較物理標志的優(yōu)越性。
　　此外,本研究還對模擬放流中投放的個體和混合背景群體進行了遺傳結(jié)構(gòu)上的分析以及“內(nèi)標”個體在投放數(shù)量的比例進行了研究。發(fā)現(xiàn)在標志個體摻入前后,一個世代上的期望雜合度并沒有顯著性差異(p>0.05);在進行增殖放流過程中,“內(nèi)標”家系的選擇是比較重要的,應選擇與放流群體各種指