小麥外源抗黃矮病基因Bdv2的標(biāo)記開發(fā)及對(duì)突變體的鑒定.pdf

1、小麥黃矮病（wheatyellow dwarf disease，WYD）是小麥的主要病害之一，是由蚜蟲傳播的大麥黃矮病毒（BYDV）引起，常造成巨大損失。小麥的近緣種—中間偃麥草對(duì)大麥黃矮病毒具有高度抗性，已至少包含三個(gè)抗黃矮病基因，分別定位于7St、7E、和2Ai—2染色體上。其中有一個(gè)基因被精確定位在中間偃麥草7X（St）染色體長(zhǎng)臂端部，被命名為Bdv2。通過遠(yuǎn)緣雜交與生物技術(shù)已將中間偃麥草的黃矮病抗性基因（Bdv2）導(dǎo)入普通小麥基

2、因組，選育出抗黃矮病的小麥．中間偃麥草易位系HW642等。為了檢測(cè)追蹤通過遠(yuǎn)緣雜交導(dǎo)入小麥背景的外源染色體，使用含外源染色體的附加/易位系及其親本材料，基于小麥第七群已定位EST，開發(fā)外源染色體特異的EST—PCR標(biāo)記，旨在快速有效地追蹤和檢測(cè)與小麥第七同源群抗黃矮病基因相連鎖的標(biāo)記，本試驗(yàn)共設(shè)計(jì)了75對(duì)基于定位在小麥第七同源群染色體上的EST引物，在AGE—PAGE—SSCP分離擴(kuò)增產(chǎn)物，篩選出中間偃麥草抗黃矮病7XL染色體特異標(biāo)記1

3、4對(duì)（比率是18.7％），標(biāo)記開發(fā)結(jié)果表明，利用小麥已定位EST開發(fā)小麥近緣種特異的EST—PCR標(biāo)記是可行的。而且這些EST—PCR標(biāo)記不同于中間偃麥草2Ai—2染色體抗黃矮病基因，14個(gè)EST—PCR標(biāo)記與Bdv2相連鎖的那條特異帶已經(jīng)克隆測(cè)序并通過序列分析，結(jié)果指出這些特異帶的序列信息顯示了很高的同源性與原始wEST的序列，BLAST結(jié)果也顯示了這些序列分別編碼蛋白激酶P450，中心蛋白（RCA），轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白（G—蛋白亞基）和假定的

4、蛋白。 因攜帶Bdv2的中間偃麥草染色體片段與小麥部分同源染色體親緣關(guān)系遠(yuǎn)、很難發(fā)生交換分離，難以精細(xì)定位Bdv2與分子標(biāo)記之間的遺傳距離，分離抗黃矮病基因非常困難。然而，創(chuàng)造不同類型的抗黃矮病基因Bdv2感病突變體，可為Bdv2、分子標(biāo)記精細(xì)定位、Bdv2基因分離和研究Bdv2介導(dǎo)的抗黃矮病機(jī)制提供堅(jiān)實(shí)的材料基礎(chǔ)。本試驗(yàn)采用兩種誘變方法獲得突變?nèi)后w，一種是化學(xué)誘變劑甲基磺酸乙酯（Eethyl methanesulfonate）

5、EMS誘變處理小麥HW642種子，另一種60Co—γ輻射誘變小麥HW642雌配子成熟期（開花前2～3天）進(jìn)行成株輻射，后與普通小麥雜交，將獲得的M2代材料接種毒蚜BYDV—GAV，進(jìn)行了生物學(xué)性狀與一些農(nóng)藝學(xué)性狀的鑒定，并對(duì)M2代接種進(jìn)行表型感病鑒定，EMS表型發(fā)病變異率約為13.7％，在分子水平上，檢測(cè)突變頻率是7.3％；60Co—γ表型發(fā)病變異率約為10.7％，在分子水平上，檢測(cè)突變頻率是58.3％。部分感病突變體通過基因組原位雜交