木瓜屬種質(zhì)資源的SRAP分子標(biāo)記與評(píng)價(jià).pdf

1、木瓜屬(Chaenomeles)起源于我國，既是著名的觀賞花木又是傳統(tǒng)的中藥材，在園林綠化和中藥材、食品及化妝品生產(chǎn)中具有廣泛的應(yīng)用。木瓜屬植物在我國約有三千多年的栽培歷史。由于本屬植物種間雜交容易，表型可塑性強(qiáng)，因此品種和類型十分豐富，這為園林應(yīng)用提供了豐富的素材，但也造成了種質(zhì)資源鑒別和品種分類的困難。
　　 本文在廣泛收集全國木瓜屬種質(zhì)資源的基礎(chǔ)上，利用SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對(duì)98份木瓜屬種質(zhì)進(jìn)行了研究，對(duì)供試材料進(jìn)行聚類分

2、析，編制了木瓜屬的分子檢索表并進(jìn)行了核心種質(zhì)的初步構(gòu)建，為品種分類及鑒定、雜交育種的親本選擇和種質(zhì)資源保護(hù)等研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 主要研究結(jié)果如下：
　　 1.運(yùn)用二次正交旋轉(zhuǎn)組合設(shè)計(jì)得到木瓜屬SRAP-PCR反應(yīng)的最優(yōu)體系，即Mg2+1.5mmol·L-1、dNTPs0.4mmol·L-、引物0.379μmol·L-1、TaqDNA聚合酶2U、模板DNA67.15ng，總體積為25μl。各因素對(duì)PCR反應(yīng)的影響大小依

3、次為：TaqDNA聚合酶>Mg2+>dNTPs>模板DNA>引物。
　　 2.以SAS軟件為基礎(chǔ)，對(duì)PCR反應(yīng)的5個(gè)因素進(jìn)行了單因子效應(yīng)分析和雙因子交互效應(yīng)分析，初步闡明了各因素之間的相互作用關(guān)系并總結(jié)出一定的規(guī)律，為PCR反應(yīng)的優(yōu)化提供借鑒。
　　 3.從157對(duì)SRAP引物中篩選出能穩(wěn)定擴(kuò)增的引物32對(duì)，并利用其中較優(yōu)的17對(duì)引物對(duì)所有供試材料進(jìn)行了擴(kuò)增，共檢測(cè)到525個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，多態(tài)位點(diǎn)百分?jǐn)?shù)為100％，平均每對(duì)

4、引物擴(kuò)增出30.9個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)；有效等位位點(diǎn)數(shù)(Ne)在1.0471～1.2274之間，平均值為1.1289；Nei's遺傳多樣性指數(shù)(H)在0.0428～0.1652之間，均值為0.1007；Shannon信息指數(shù)(Ⅰ)在0.0986～0.2863之間，均值為0.1911。
　　 4.98份供試材料之間的Nei遺傳相似系數(shù)范圍是0-0.6596，平均值為0.2192，表明各材料間親緣關(guān)系較遠(yuǎn)。采用UPGMA聚類法可將98份材料

5、分為9類，其中種源為一級(jí)分類標(biāo)準(zhǔn)，雜交品種依據(jù)其雜交親本的來源首先聚類；花色、花型、瓣型及種源地作為二級(jí)分類標(biāo)準(zhǔn)互相影響小類群的劃分。對(duì)9個(gè)類的遺傳多樣性分析顯示，木瓜屬植物類間變異在總的遺傳變異中平均占23.2％，各類間的遺傳距離均不大且基因流動(dòng)性較高(Nm=1.6580)，這也驗(yàn)證了木瓜屬植物種間雜交容易、雜交品種較多的現(xiàn)狀。
　　 5.篩選出了6對(duì)核心引物用于構(gòu)建木瓜屬指紋圖譜，其中引物ME3-EM3與另外5對(duì)引物中任意一

6、對(duì)兩兩組合均可以鑒別出所有品種。結(jié)合引物ME3-EM3和ME6-EM1擴(kuò)增出的19條多態(tài)性條帶，借鑒常規(guī)植物檢索表編制方法，編制了98個(gè)品種的分子標(biāo)記檢索表。
　　 6.以SRAP標(biāo)記為基礎(chǔ)，構(gòu)建木瓜屬種質(zhì)資源的核心種質(zhì)。按照10％～80％的整體取樣比例，依據(jù)分組法和不分組法分別取樣，對(duì)比兩方法的異同。另外，結(jié)合C語言編程，提出了適用于本屬植物核心種質(zhì)構(gòu)建的方法：多態(tài)位點(diǎn)數(shù)最高法。與目前常用的核心種質(zhì)構(gòu)建方法相比，該方法簡(jiǎn)單高效