家蠶BmL130基因的表達分析及組織定位研究.pdf

1、我們從本實驗室構(gòu)建的家蠶蛹cDNA文庫中篩選得到一條新的cDNA序列，經(jīng)NCBI比對分析后確定其為一未知基因，命名為BmL130(Bomby.moriL130)。BmL130基因長為135.bp，開放閱讀框大小為96.bp，預(yù)測該基因編碼322個氨基酸殘基，分子量大小為37.2.kD，等電點為6.40。從GenBank等數(shù)據(jù)庫中利用Blast檢索，發(fā)現(xiàn)與Bomby.mor.EST序列同源性較高的均為一些假想蛋白，這些蛋白功能未知。

2、>　　 我們根據(jù)cDNA序列的ORF框設(shè)計上下游引物，PCR擴增后經(jīng)Bam.I和Xh.I雙酶切，插入融合表達載體pET-28a(+)的相應(yīng)酶切位點，成功構(gòu)建重組融合蛋白表達質(zhì)粒并轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)感受態(tài)細胞，經(jīng)PCR、酶切鑒定以及測序分析證實重組正確。IPTG誘導(dǎo)后裂解菌作SDS-PAGE分析，在4.kD處有一濃集特異性蛋白條帶，重組蛋白以包涵體的形式表達，通過親和層析純化了重組蛋白，并使用該重組蛋白免疫新西蘭大白兔制備多