己烯雌酚對(duì)性反轉(zhuǎn)雞性別決定相關(guān)基因及學(xué)習(xí)記憶的影響.pdf

1、環(huán)境激素是具有動(dòng)物內(nèi)分泌干擾作用的化合物，廣泛存在于自然界。由環(huán)境激素引起的動(dòng)物內(nèi)分泌系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)和生殖系統(tǒng)功能的異常，嚴(yán)重威脅人類健康和野生動(dòng)物遺傳安全性，成為社會(huì)發(fā)展需要面對(duì)的重大科學(xué)課題。人工合成雌激素己烯雌酚(DES)，曾作為藥物及飼料添加劑廣泛使用，后發(fā)現(xiàn)其具有較高的生殖毒性，已被禁用。目前，DES作為研究環(huán)境激素作用的藥物模型，仍受到廣泛關(guān)注。本文以DES為代表，研究了環(huán)境雌激素對(duì)雞生殖系統(tǒng)和性別決定相關(guān)基因的影響，調(diào)查了

2、DES對(duì)胚胎暴露雛雞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育和學(xué)習(xí)記憶能力的影響，結(jié)果如下： 比較了幾種常用的注射方法在雞不同胚胎發(fā)育時(shí)期的注射效果，探討DES對(duì)雞胚影響的評(píng)價(jià)方法。采用雞性連鎖基因CHD標(biāo)記雞胚的遺傳性別，結(jié)合性腺器官和組織切片觀察，調(diào)查了DES暴露引起的雞生殖系統(tǒng)變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在雞受精卵孵化開(kāi)始前(EO)采用卵黃注射，胚胎存活率、孵化率最高。0.1mg/eggDES暴露，可以實(shí)現(xiàn)衣莎褐品種雞胚性別的完全轉(zhuǎn)化，使ZZ基因型雄性雞性腺發(fā)育

3、為卵巢，性腺組織結(jié)構(gòu)發(fā)生明顯雌性化變化，表現(xiàn)為精小管消失，近腔面空泡增多，并出現(xiàn)大量的卵巢髓質(zhì)血管組織。表明DES能抑止精原細(xì)胞增殖，影響雄性性腺的發(fā)育和生理功能，導(dǎo)致性腺雌性化發(fā)育。證明我們已經(jīng)建立了高效的DES誘發(fā)雌性化性反轉(zhuǎn)雞胚技術(shù)。 采用半定量RT-RCR方法，調(diào)查DES引起的性反轉(zhuǎn)雞胚中孤兒核受體類固醇生成因子(SF1)、抗繆勒氏管激素(AMH)、兩性和鼠源單克隆抗體-3相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子1(DMRT1)、W染色體蛋白激酶C

4、抑制因子(WPKCI)、雌特異性表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子1(FET1)、先天性瞼裂狹小綜合癥基因(FOXL2)6種性別決定相關(guān)基因在性腺分化發(fā)育過(guò)程中的時(shí)序表達(dá)，從基因水平尋找DES引起性反轉(zhuǎn)的原因，進(jìn)一步探討雞(鳥(niǎo)類)性別決定相關(guān)基因的調(diào)控網(wǎng)絡(luò)和作用機(jī)制。結(jié)果表明，雞胚胎期DES暴露，能上調(diào)3d-11d(E3-E11)遺傳雄性(性反轉(zhuǎn)雌性)雞胚中SF1基因的表達(dá)量，表明SF1基因可能具有促雌化效應(yīng)。AMH在脊椎動(dòng)物中具有促進(jìn)雄性發(fā)育的作用，正常雞

5、胚E7以后才檢測(cè)到表達(dá)，并且在雄性性腺中的表達(dá)量顯著高于雌性。DES暴露后，遺傳雌性雞胚性腺中AMH的表達(dá)受到抑制；性反轉(zhuǎn)雌性中表達(dá)上調(diào)，但對(duì)DES暴露導(dǎo)致的雌性化沒(méi)有抑制作用。因此認(rèn)為，AMH基因主要是影響性別決定后(7d后)雄性雞胚性腺的生長(zhǎng)和發(fā)育，對(duì)早期性別決定和分化可能沒(méi)有重要影響。DMRT1基因與雄性性別決定密切相關(guān)，DES暴露抑制了DMRT1在性別分化前和分化啟動(dòng)時(shí)期(E3-E7)的表達(dá)。表明該基因?qū)π坌詻Q定至關(guān)重要，DMR

6、T1基因在遺傳雄性雞胚性腺中表達(dá)量的下調(diào)可能直接促使了其雌性化反轉(zhuǎn)的發(fā)生。WPKCI基因只在遺傳雌性個(gè)體表達(dá)，胚胎DES暴露后，導(dǎo)致WPKCI基因在性別分化期(E7-E11)表達(dá)量顯著上調(diào)。表明WPKCI對(duì)卵巢的形成和發(fā)育有十分重要的促進(jìn)作用。FET1基因是低表達(dá)量的雌特異性基因，胚胎DES暴露，能夠引起11d(E11)時(shí)期的表達(dá)量短暫上調(diào)，但在其他調(diào)查時(shí)期沒(méi)有檢測(cè)到轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。推測(cè)FET1基因可能只與性別分化后(11d后)的雌性生殖腺生

7、長(zhǎng)和發(fā)育相關(guān)。FOXL2基因在DES暴露后，13d(E13)時(shí)期的表達(dá)量較高，而其前幾乎檢測(cè)不到轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物。推測(cè)，F(xiàn)OXL2基因在DES暴露導(dǎo)致的雌性化過(guò)程中所起的作用較小，可能通過(guò)參與雌激素的合成，在性別分化后的雌性生殖腺生長(zhǎng)和發(fā)育過(guò)程中產(chǎn)生影響。 采用一次性被動(dòng)回避(PAL)和繞行學(xué)習(xí)兩種國(guó)際通用的小雞實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?，調(diào)查了胚胎期DES暴露后，孵化1d齡和9d齡雛雞學(xué)習(xí)記憶能力的變化。結(jié)果表明，正常的雌性和雄性雛雞之間的學(xué)習(xí)記憶能力