福建省兩種雙生病毒的致病機(jī)制研究.pdf

1、本文對(duì)福建省雜草上的雙生病毒進(jìn)行了鑒定，并對(duì)其致病機(jī)制作了初步研究。 從福建省福州地區(qū)采集了表現(xiàn)有典型雙生病毒癥狀的野葛(Pueraria montana)病樣，通用引物PA/PB對(duì)野葛樣品進(jìn)行了特異PCR檢測(cè)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，樣品中有大約500 bp的條帶，表明此野葛中極有可能含有雙生病毒。隨機(jī)選擇了三個(gè)克隆Yg1、Yg2及Yg3進(jìn)行序列測(cè)定，測(cè)序結(jié)果表明此三個(gè)克隆之間的差異極小，核苷酸序列同源性均在98.8％以上(登錄號(hào)FJ539

2、016，F(xiàn)J539017和FJ539018)，說明此樣品很可能是由同一種雙生病毒侵染。在此基礎(chǔ)上，我們對(duì)Yg3樣品中的雙生病毒的全基因組進(jìn)行了研究。 通過一對(duì)背靠背引物獲得了Yg3的全基因組序列，測(cè)序表明，Yg3 DNA-A全長(zhǎng)2729 nt(登錄號(hào)FJ539014)，具有典型的粉虱傳雙生病毒特征：共編碼6個(gè)開放閱讀框(open reading frames，ORF)，其中正義鏈編碼2個(gè)ORFs，分別為AV1和AV2，反義鏈編碼

3、AC1、AC2、AC3和AC4四個(gè)ORFs，其莖環(huán)結(jié)構(gòu)區(qū)含有TAATATTAC保守序列。經(jīng)NCBI檢索和BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn)，Yg3 DNA-A與野葛花葉病毒DNA-A(Kudzu mosaic virus-[Vietnam：Hoabinh：2005]DNA-A，KuMV-[VN：Hoa：05]DNA-A，登錄號(hào)DQ641690)同源性最高，為92.9％。 用Beta01/Beta02特異引物并未發(fā)現(xiàn)有DNA-β存在，然而用Tem

4、pliPhiTM Kit試劑盒擴(kuò)增得到2677 bp的片段(登錄號(hào)FJ539015)，NCBI BLAST比對(duì)發(fā)現(xiàn)其與野葛花葉病毒DNA-B(Kudzu mosaic virus-[Vietnam：Hoabinh：2005]DNA-B，KuMV-[VN：Hoa：05]DNA-B，登錄號(hào)DQ641691)同源性最高，為81.7％。由此，我們確定Yg3為野葛花葉病毒(Kudzu mosaic virus，KuMV)的一個(gè)分離物，并將其命名為

5、野葛花葉病毒分離物Yg3(Kudzu mosaic virus Yg3 isolate，KuMV-Yg3)。Yg3 DNA-B編碼兩個(gè)ORFs，即反義鏈上的BC1和正義鏈上的BV1，同時(shí)也含有保守序列TAATATTAC。 為了研究KuMV DNA-A和DNA-B在致病中的作用，我們構(gòu)建了KuMV-Yg3DNA-A和DNA-B的侵染性克隆，注射本氏煙(Nicotiana benthamiana)后發(fā)現(xiàn)，共同接種DNA-A和DNA-

6、B的煙草葉片出現(xiàn)黃色褪綠斑點(diǎn)癥狀，而單獨(dú)接種DNA-A或DNA-B的煙草中未出現(xiàn)任何癥狀。 另外，我們對(duì)勝紅薊黃脈病毒福建煙草分離物F2(Ageratumyellow vein virus-F2，AYVV-F2)的DNA-A(登錄號(hào)EF527823)及其伴隨DNA-β(登錄號(hào)EF527824)及本實(shí)驗(yàn)室保存的一個(gè)缺陷型DNA-β(ADNA，登錄號(hào)FJ605171)進(jìn)行了侵染性克隆的構(gòu)建，以期對(duì)其致病機(jī)制進(jìn)行初步探討。注射煙草后發(fā)