豚鼠妊娠母體和胎兒卵巢發(fā)育及PCNA和Caspase-3表達特性研究.pdf

1、豚鼠是進行人類和家畜生殖生物學研究的良好實驗動物模型，但是有關妊娠期豚鼠卵巢發(fā)育以及胎兒卵巢發(fā)生發(fā)育的組織形態(tài)學及其相關機制的報道很少。本研究采用人工授精技術獲得妊娠母鼠，進而在妊娠期不同時間點(30、40、50、60、68天和出生后1天)采用組織學、免疫組織化學和免疫印跡分析等手段深入分析妊娠母鼠和胎兒豚鼠卵巢發(fā)育的形態(tài)學變化以及細胞增殖和細胞凋亡標記物的定位和相關蛋白信號的變化，力圖闡明妊娠母鼠和胎兒豚鼠卵巢發(fā)育的規(guī)律和這一過程中細

2、胞增殖和細胞凋亡相關蛋白信號作用機制，為人類和家畜繁殖學提供理論基礎。
　　1.在本研究中，通過觀察胎兒期30、40、50、60、68天和出生后1天的豚鼠卵巢細胞形態(tài)學變化，發(fā)現(xiàn)從妊娠期30天到出生后1天卵巢中的卵泡發(fā)育存在動態(tài)變化。研究結果還顯示，妊娠期40～50天是豚鼠胎兒卵巢卵泡發(fā)育的關鍵時期。此外，當采用細胞增殖的標記——增殖細胞核抗原(PCNA)和細胞凋亡的標記-caspase-3進行免疫組織化學染色，發(fā)現(xiàn)PCNA主要是

3、在健康卵泡中表達，而caspase-3則主要在閉鎖卵泡中表達。結果表明:豚鼠的卵泡發(fā)生和發(fā)育發(fā)生在胎兒時期，這不同于常用的實驗動物大鼠和小鼠，因此，豚鼠可以為研究人類和家畜進行胎兒和新生兒卵巢的卵泡形成，發(fā)育和閉鎖提供一個很好的動物模型。
　　2.在胎兒期豚鼠卵巢發(fā)育過程中，伴隨著顆粒細胞的增殖，原始卵泡大量出現(xiàn)，同時，大多數(shù)卵母細胞會不斷出現(xiàn)死亡，卵泡不斷閉鎖，這是細胞內凋亡因素與抗凋亡因素共同作用的結果，因此需要深入分析其精確

4、機制。我們采用免疫印跡(WB)和灰度分析對胎兒期豚鼠不同時間點（胎兒期30、40、50、60、68天和出生后1天）細胞增殖與細胞凋亡因素的變化進行分析，結果發(fā)現(xiàn)，在胎兒期30、40、50、60、68和出生后1天等不同時間點，p-Erk1/2與細胞周期蛋白CyclinD的表達逐漸升高在妊娠期60天時達到最高，然后開始下降(Pb，Pc＜0.05，Pd，Pe＜0.01);而進一步對細胞凋亡因素分析，凋亡相關蛋白Caspase-3與Bax的表達

5、在妊娠期50天逐漸升高，妊娠期68天和出生后1天持續(xù)高表達(Pb，Pc＜0.05)。因此，在胎兒期豚鼠卵巢發(fā)育過程中，細胞增殖與細胞凋亡的共同作用調控了卵巢的發(fā)育。
　　3.妊娠期是從受精開始到分娩為止的一段時間，是新生生命在母體內生活的時期，在這一時期，卵巢并未呈現(xiàn)靜止狀態(tài)而是保持著與發(fā)情周期不同的卵泡發(fā)育。本研究采用組織學和免疫組織化學方法觀察妊娠期豚鼠卵巢其細胞增殖與凋亡。結果顯示:在胎兒期不同時間點（30、40、50、60

6、、68天和出生后1天）母鼠卵巢的卵泡發(fā)育并未停止，除了在卵巢上觀察到發(fā)育的黃體外，在卵巢上均有各級卵泡，而且，在卵巢上還存在大量的閉鎖卵泡。細胞增殖標記物PCNA以及細胞凋亡標志物caspase-3主要定位于各級卵泡諸如初級卵泡、次級卵泡、三級卵泡早期的顆粒細胞、膜細胞中，但未發(fā)現(xiàn)在卵母細胞中定位，此外，在卵巢間質細胞中PCNA和caspase-3表達顯著。但是caspase-3定位于少量黃體細胞中。本研究證實在妊娠期母鼠卵巢出現(xiàn)的卵泡

7、發(fā)育與閉鎖與細胞的凋亡、增殖密切相關。
　　4.為了研究PCNA、caspase-3蛋白在豚鼠老年卵巢卵泡發(fā)育過程中的作用，取60月齡老年豚鼠的卵巢組織樣，采用免疫組織化學方法對其在豚鼠卵巢中的表達進行了細胞定位，結果表明:在老年豚鼠卵巢中，caspase-3主要在卵母細胞、顆粒細胞、膜細胞以及間質細胞中表達，不過相對于顆粒細胞，間質細胞中caspase-3的表達較多，此外，黃體細胞中caspase-3也有表達;PCNA在卵母細胞