鵝肥肝中差異表達基因的篩選及分析.pdf

1、為了探索鵝肥肝形成的分子機理，本研究以12只朗德鵝為試驗材料，分填肥組和對照組，每組6只，運用mRNA差異顯示(DDRT-PCR)技術(shù)，檢測填肥組和對照組之間的差異表達片段，將所獲得的差異片段克隆測序后與GenBank中已知基因進行序列比對，尋找差異片段的同源基因或序列，并推測差異表達基因的功能。另外，由于鵝肥肝的形成與脂肪代謝密切相關(guān)，本研究還選擇了7個脂肪性狀的候選基因：脂肪細胞型脂肪酸結(jié)合蛋白(Adipocyte fatty ac

2、id binding protein，A-FABP)、肝臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(liver fatty acid binding protein，L-FABP)、過氧化物酶體增殖物受體α(proxisome proliferators-activated receptor alpha,PPARa)和γ(proxisome proliferators-activated receptor gmma，PPARγ)、脂蛋白酯酶(lipoprote

3、inlipase，LPL)、肝X受體-α(liver X receptor-α，LXRa)及脂聯(lián)素(aidponectin,AdipoQ)，利用半定量RT-PCR技術(shù)檢測候選基因和新獲得的差異表達基因在鵝肥肝中的表達水平，探討它們在肥肝形成中的作用機理。結(jié)果如下： (1) 用90對引物組合在填肥組和對照組間檢測到40條差異表達片段，經(jīng)片段回收、二次PCR及克隆測序后共成功獲得了22條差異片段序列。經(jīng)序列比對，在22條差異表達片段

4、中，發(fā)現(xiàn)了8條與已知功能基因高度同源；6條與已知EST序列或eDNA序列同源，但其功能未知；8條在GenBank中沒有找到相似序列，歸為新EST序列。 (2)8條已知功能的差異表達基因為：纖維蛋白原α(fibrinogen alpha chain，F(xiàn)GA)基因、纖維蛋白素原γ(fibrinogen gamma chain，F(xiàn)GG)基因、色素框同源物6(Chromobox homolog 6，CBX6)基因、RNA結(jié)合基序7(RN

5、A binding motif protein7.RBM7)基因、跨膜蛋白53(transmembrane protein 53，TMEM53)基因、基質(zhì)金屬蛋白酶11(matrix metallopeptidase-11，MMP-11)基因、C18orfl基因和鋅指蛋白469(zinc finger protein 469，ZNF469)基因。 (3)DDRT-PCR結(jié)合半定量RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)，在鵝肥肝中表達上調(diào)的基因有FGA、C

6、BX6、TMEM53、MMP-11、ZNF469、A-FABP、L-FABP和PPARγ基因。而呈現(xiàn)下調(diào)趨勢的有5條基因，它們是編碼FGG、RBM 7、C18orfl、PPARa和LPL的基因。另外，LXRa基因在對照組和填肥組肝臟之間沒有顯著的表達差異，AdipoQ基因在兩組間均不表達。 (4) 上述基因與脂肪代謝、腫瘤的轉(zhuǎn)移、RNA修飾及調(diào)控有密切的關(guān)系，在強飼的高能飼料誘導下，這些基因在肝臟中的特異性表達變化可能是促進鵝肝