棉花不同生育期根際細(xì)菌群落組成分析.pdf

1、植物的根際是由廣泛的微生物群落組成的一個(gè)十分復(fù)雜的生境。本研究應(yīng)用不依賴(lài)培養(yǎng)技術(shù)的分子生物學(xué)方法，如T-RFLP(末端限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性分析)、構(gòu)建16SrDNA克隆文庫(kù)和DGGE(變性梯度凝膠電泳)分析了不同生育期的健康棉花和黃枯萎病棉花植株根際細(xì)菌的群落演替規(guī)律。 T-RF群落圖譜分析表明在健康和生病棉花的根際土壤中細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)是動(dòng)態(tài)的并隨著棉花的生長(zhǎng)而發(fā)生規(guī)律性的變化。棉花根際細(xì)菌主要有Proteobacteria，F(xiàn)i

2、rmicutes，Bacteroidetes和Acidobacterteria的各個(gè)屬、科或目。用Bio-Dap軟件進(jìn)行了每個(gè)樣品多樣性指數(shù)的計(jì)算，健康花鈴期根際有最高的香濃指數(shù)(H')和辛普森指數(shù)倒數(shù)(1/D)，但是生病吐絮期根際有最高的物種均度(E)。 用27F和1492R這對(duì)引物分別建立了蕾期健康根際土壤樣品、蕾期生病根際土壤樣品、花鈴期健康根際土壤樣品、花鈴期生病根際土壤樣品、吐絮期健康根際土壤樣品和吐絮期生病根際土壤樣

3、品的16S rDNA克隆文庫(kù)。經(jīng)過(guò)RFLP分析，對(duì)168個(gè)不同帶型的克隆測(cè)序表明79.2％與不可培養(yǎng)的細(xì)菌有最高的相似性。Acidobacteria和Proteobacteria是優(yōu)勢(shì)菌門(mén)。在Proteobacteria中，alpha，beta和gamma亞組是優(yōu)勢(shì)菌。其他的細(xì)菌主要屬于下面這些細(xì)菌門(mén)：WS3，Deinococcus-Thermus，Verrucomicrobia， Firmicutes， Bacteroidetes，

4、Actinobacteria，Thermomicrobia，Gemmatimonadetes，Planctomycetes，Proteobacteria，Acidobacteria Cyanobacteria。還有3％-8％的序列是未分級(jí)序列。 用QuantityOne軟件分析DGGE圖譜后發(fā)現(xiàn)，所有樣品被聚為兩類(lèi)，也就是，健康棉花根際樣品被聚為一類(lèi)，生病的棉花根際樣品被聚為一類(lèi)。三條來(lái)自DGGE的優(yōu)勢(shì)條帶的序列長(zhǎng)度均為550-