農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化Bt和抗菌肽融合基因獲得轉(zhuǎn)基因油菜的研究.pdf

1、油菜在中國國民經(jīng)濟中占有舉足輕重的地位，是中國最重要的油料作物之一，同時也是中國最主要的經(jīng)濟作物之一。油菜在中國有著十分廣泛的種植區(qū)域，但它極易遭受到各種病蟲害的侵害，其中白斑病和黑斑病都屬于真菌引起的病害。本研究采取抗菌肽與Bt相融合的基因構(gòu)建植物表達載體并用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法轉(zhuǎn)入油菜，以草甘膦為篩選標記獲得抗真菌和鱗翅目害蟲的轉(zhuǎn)基因油菜作物。 1.PCAMBA1300的改造，利用XholⅠ酶切位點去除潮霉素抗性標記基因，獲得1

2、3P質(zhì)粒。 2.利用BamHⅠ和HindⅢ酶切位點，將抗除草劑基因EPSPS轉(zhuǎn)入13P，獲得有抗除草劑功能的13P—EPSPS質(zhì)粒。 3.利用BamHⅠ、HindⅢ和DraⅢ等酶切位點及平端連接技術(shù)將抗蟲抗病融合基因轉(zhuǎn)入13P—EPSPS質(zhì)粒，獲得抗蟲、抗病、抗除草劑的13P—EPSPS—Bt—AMP質(zhì)粒。 4.將油菜種子接入固體MS。培養(yǎng)基，無菌培養(yǎng)5天，取其子葉柄做為受體材料，進行農(nóng)桿菌的侵染。 5.