新麥草種質(zhì)材料抗旱性鑒定與評價(jià)及其遺傳多樣性研究.pdf

1、采用溫室模擬早境脅迫-復(fù)水方法，以來自于國內(nèi)外的14份新麥草（Psathyrostachys juncea）種質(zhì)資源為研究材料，通過幼苗期溫室盆栽試驗(yàn)，系統(tǒng)測定了干旱脅迫下新麥草種質(zhì)材料苗期的葉片相對含水量、葉綠素、相對電導(dǎo)率、丙二醛和脯氨酸含量5個(gè)抗旱生理指標(biāo)。全面分析了這些指標(biāo)的變化規(guī)律，對這14份新麥草種質(zhì)的抗旱性進(jìn)行了綜合評價(jià)，結(jié)果顯示： 14份新麥草種質(zhì)材料苗期隨干旱脅迫時(shí)間延長，其葉片相對含水量、葉綠素含量、植株相對

2、生長率均呈下降趨勢，相對電導(dǎo)率、丙二醛含量與游離脯氨酸含量則有增加趨勢，復(fù)水后均有不同程度的恢復(fù)。選取新麥草種質(zhì)材料苗期干旱脅迫28d的葉片相對含水量、葉綠素含量、丙二醛含量、相對電導(dǎo)率、游離脯氨酸含量等指標(biāo)，采用歐氏距離法進(jìn)行綜合聚類分析，可將15份新麥草種質(zhì)材料的抗旱性劃分為3個(gè)抗旱級別，即相對抗旱的材料包括XMC01、XMC06、XMC10、XMC11，中度抗旱的包括XMC02、XMC04、XMC08、XMC09、XMC12、XM

3、C13，相對旱敏感的包括XMC3、XMC05、XMC07、XMC14。 為了深化新麥草種質(zhì)資源遺傳多樣性及有利基因的發(fā)掘與研究，本人利用ISSR（簡單重復(fù)間序列）標(biāo)記對15份新麥草種質(zhì)資源進(jìn)行遺傳多樣性檢測。為獲得穩(wěn)定的新麥草ISSR反應(yīng)體系，對反應(yīng)條件中的dNTP、Taq酶濃度、引物濃度、Mg2+濃度等因子進(jìn)行了優(yōu)化，建立的適合新麥草的ISSR-PCR最佳反應(yīng)體系為：25μl的反應(yīng)體系中含有dNTP2．5μl、Taq酶0．2μ

4、l、Primers1μl、Mg2+1．5μl、2．5μl10×buffer、2μl模板DNA和ddH2O15．3μl。反應(yīng)擴(kuò)增程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性3min，94℃變性30s，46℃～60℃（退火溫度因引物不同而不同）退火45s，72℃延伸1min30s，進(jìn)行35個(gè)循環(huán)，最后72℃延伸10min。 ISSR標(biāo)記結(jié)果表明，ISSR標(biāo)記能夠揭示材料間較高的遺傳多樣性。試驗(yàn)從25條引物中篩選出引物8條擴(kuò)增條帶較多、信號強(qiáng)、背景清晰的引物

5、，通過這8個(gè)ISSR引物對15份新麥草材料進(jìn)行擴(kuò)增，共獲得84個(gè)擴(kuò)增位點(diǎn)，其中多態(tài)性位點(diǎn)72個(gè)，多態(tài)性比率（PPB）為85．7%。通過遺傳相似系數(shù)（GS）的計(jì)算，供試材料間的GS值在0．4405～0．9048之間，說明其遺傳分化程度較高，遺傳多樣性豐富，運(yùn)用ISSR分子標(biāo)記能夠較好的揭示野生新麥草的遺傳多樣性及親緣關(guān)系。通過UPGMA聚類分析，將15份新麥草分為四大類，組間遺傳距離的差異是導(dǎo)致供試材料整體遺傳差異較大的主要因素，而組內(nèi)材