熒光假單胞菌對食用菌的促生作用及其機(jī)理研究.pdf

1、食用菌栽培料一般經(jīng)巴氏殺菌、堆積發(fā)酵處理或采用生料。食用菌生長發(fā)育過程中，培養(yǎng)料中存在多種其他微生物，有些微生物對食用菌的生長發(fā)育具有促進(jìn)作用，如假單胞菌、嗜熱革節(jié)孢菌等，尤其是假單胞菌對平菇、杏鮑菇和雙孢蘑菇具有較強(qiáng)的促生作用。然而，假單胞菌對食用菌的促生作用機(jī)理還了解甚少。 本實驗主要目的是研究熒光假單胞菌的分離、篩選和鑒定及其對食用菌菌絲生長、原基分化、子實體形成以及對產(chǎn)量影響。從鄭州市區(qū)周邊及安徽文昌取得根際土土樣、從平

2、菇栽培料、雙孢菇覆土料栽培料樣品共計60份樣。采用稀釋平板涂布法分離、劃線純化得到1017個單菌落。從中分離篩選產(chǎn)熒光的假單胞菌菌株，通過對菌落特征、細(xì)菌形態(tài)的觀察和檢測并利用熒光假單胞菌在特定培養(yǎng)基KB培養(yǎng)基中會產(chǎn)生水溶性色素，在紫外光照射下能產(chǎn)生的熒光的特性，初步篩選出70株為熒光假單胞菌；以此為出發(fā)菌株進(jìn)一步將分離到的菌株與平菇（天達(dá)-300）菌種分別在PDA平板和裝有棉籽殼的試管中共培養(yǎng)，與對照相比較發(fā)現(xiàn)所分離出的菌株對平菇菌絲

3、的生長有不同程度的促進(jìn)作用，同時發(fā)現(xiàn)分離出來的其它不發(fā)光菌株對平菇菌絲的生長也有促進(jìn)作用。促進(jìn)作用最明顯者菌絲生長速度可達(dá)到對照的1．87倍。從而優(yōu)選出三種菌株：0、b、22。經(jīng)16S rDNA鑒定，結(jié)合其形態(tài)生理生化特性，該3株菌均為熒光假單胞菌（Pseudomonas fluorescens）。 不同菌液對不同種食用菌香菇、平菇、雞腿蘑、白靈菇、雙孢蘑菇、杏鮑菇的促生效果不同。在平菇、杏鮑菇、雙孢蘑菇、雞腿蘑菌絲生長的共培養(yǎng)

4、實驗中，熒光假單胞菌的促進(jìn)作用明顯，以平菇、雙孢蘑菇最為顯著。白靈菇菌絲生長的共培養(yǎng)實驗中，沒有觀察到明顯的促進(jìn)作用。然而在香菇菌絲生長的共培養(yǎng)實驗中發(fā)現(xiàn)顯著的抑制作用。平菇、杏鮑菇出菇實驗結(jié)果表明，添加菌液的菇袋，菌絲滿袋時間較不添加菌液的對照提前5-8天。原基分化、子實體形成也提前約一周的時間，同時出菇產(chǎn)量提高了11．9％。 關(guān)于促進(jìn)作用機(jī)制的初步研究結(jié)果表明，不同培養(yǎng)基培養(yǎng)所得菌液促進(jìn)生長作用效果差異顯著，以PDB為最佳。

5、經(jīng)0．2μ m無菌濾膜過濾所得上清液亦有促進(jìn)作用，但其促進(jìn)作用弱于純菌體和菌液。篩選出的三種菌株間拮抗實驗結(jié)果表明其間無拮抗作用，則可考慮三者之間的復(fù)配。 熒光假單胞菌對食用菌的促生作用機(jī)理是否與植物相同即通過降解乙烯合成前體物1-氨基環(huán)丙烷-1-羧酸（ACC）從而減少乙烯的抑制作用，本研究應(yīng)用離子色譜法和稀釋平板計數(shù)法（采用ACC為唯一氮源的培養(yǎng)基）分別測定了雙孢蘑菇培養(yǎng)料、覆土和鮮土中的ACC含量和ACC脫氨酶產(chǎn)生菌的數(shù)量。

6、離子色譜法測定雙孢蘑菇培養(yǎng)料、覆土和鮮土中的ACC含量簡便快速。雙孢蘑菇培養(yǎng)料和覆土中的ACC含量顯著高于鮮土，雙孢蘑菇培養(yǎng)料和覆土中ACC脫氨酶產(chǎn)生菌的數(shù)量及其占細(xì)菌總數(shù)的比例同樣明顯高于鮮土，ACC脫氨酶產(chǎn)生菌主要是熒光假單胞菌。添加乙烯抑制劑AgNO3的滅菌土，雞腿蘑也有子實體形成，表明雙孢蘑菇雞腿蘑可能具有乙烯合成的ACC途徑，覆土中ACC脫氨酶產(chǎn)生菌利用ACC，消除了菌絲合成高濃度乙烯對子實體形成和發(fā)育的抑制作用可能是雙孢蘑菇