江蘇部分地區(qū)克氏原螯蝦WSSV調(diào)查及ELISA檢測技術(shù).pdf

1、克氏原螯蝦(Procambarus clarkii)俗稱小龍蝦，原產(chǎn)于美國南部和墨西哥北部，后由美國傳入日本，上世紀(jì)30年代末期由日本引入我國，因其味道鮮美，營養(yǎng)豐富，現(xiàn)己成為我國市場上深受歡迎的水產(chǎn)品，而江蘇省是我國主要的克氏原螯蝦生產(chǎn)地區(qū)，區(qū)位優(yōu)勢明顯。然而，自2007年5月份開始，在江蘇省的徐州、盱眙、淮安、揚州、常州等地先后發(fā)生了克氏原螯蝦病害，死亡率最高達(dá)50％，使克氏原螯蝦養(yǎng)殖業(yè)遭受了巨大損失，經(jīng)檢測，確定致病原為白斑綜合征

2、病毒(WSSV)。
　　白斑綜合征病毒(WSSV)是一種具囊膜、桿狀的雙鏈環(huán)狀DNA病毒。由WSSV引起的對蝦白斑綜合征疾病自1992年首次發(fā)現(xiàn)于我國臺灣以來，現(xiàn)如今已在世界范圍內(nèi)爆發(fā)流行，被世界動物衛(wèi)生組織(OIE)、聯(lián)合國糧農(nóng)組織(FAO)及亞太水產(chǎn)養(yǎng)殖中心網(wǎng)(NACA)列為需要報告的重要水生動物疾病病原之一。雖然在過去20余年，對WSSV的病原學(xué)、分子生物學(xué)以及致病機(jī)理等方面已經(jīng)有了深入研究，但是目前對由WSSV所引起的疾病

3、尚無有效治療方法，使得人們在應(yīng)對它時必須側(cè)重于早期的防控，而這又主要依賴于早期快速的診斷和篩查。
　　本論文通過調(diào)查江蘇省部分地區(qū)養(yǎng)殖克氏原螯蝦中白斑綜合征的流行狀況，獲得了第一手?jǐn)?shù)據(jù)，并初步純化出WSSV，制備了WSSV囊膜蛋白VP26和VP28的多克隆抗體，以嘗試建立ELISA快速檢測技術(shù)，便于基層推廣應(yīng)用。
　　1、江蘇省部分地區(qū)克氏原螯蝦WSSV調(diào)查
　　2014-2015年江蘇省克氏原螯蝦養(yǎng)殖持續(xù)保持較強(qiáng)地上

4、升勢頭，養(yǎng)殖面積不斷擴(kuò)大，克氏原螯蝦養(yǎng)殖業(yè)已逐步成為我省重要的淡水水產(chǎn)支柱產(chǎn)業(yè)。但隨著養(yǎng)殖業(yè)的高速發(fā)展，克氏原螯蝦暴發(fā)性流行病問題日益突出，尤以白斑綜合征病毒病感染最為普遍。本課題組與江蘇省淡水水產(chǎn)研究所合作，建立了克氏原螯蝦WSSV測報系統(tǒng)，按照行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)SN/T1151.2-2011對蝦白斑病檢疫技術(shù)規(guī)范聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)檢測方法檢測，對江蘇省南京市、楚州區(qū)、姜堰區(qū)、盱眙縣等部分地區(qū)克氏原螯蝦WSSV病害情況進(jìn)行了統(tǒng)計、分析，發(fā)

5、現(xiàn)當(dāng)前白斑綜合征病毒病己成為克氏原螯蝦養(yǎng)殖業(yè)的最主要病害，并呈不斷蔓延趨勢。
　　2、基于WSSV囊膜蛋白VP26、VP28的ELISA檢測技術(shù)
　　在目前常用的幾種病原檢測方法中，酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)試驗成本較低、簡單實用且靈敏度高、特異性強(qiáng)，而且不需要任何儀器設(shè)備，便于生產(chǎn)實際應(yīng)用，是一種早期診斷的良好方法。本實驗成功表達(dá)、獲取了WSSV的VP26、VP28蛋白;用獲取的蛋白免疫新西蘭大耳兔制備多克隆抗體;參照已有