牦牛和食蟹猴隱孢子蟲感染情況調(diào)查及分子生物學(xué)鑒定.pdf

1、目前隨著社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展，人與動物直接或間接接觸機(jī)會越來越多，關(guān)于野生動物感染隱孢子蟲的報(bào)道越來越受到人們的關(guān)注。但國內(nèi)外關(guān)于牦牛和非人靈長類動物猴的報(bào)道有限，基于與人類的特殊關(guān)系，本研究對我國某些種類野生動物隱孢子蟲感染情況進(jìn)行詳細(xì)調(diào)查。獲得60個(gè)牦牛隱孢子蟲分離株和24個(gè)食蟹猴隱孢子蟲分離株，對分離株進(jìn)行基于18S rRNA基因和GP60基因的序列分析，鑒定其感染種類和基因亞型，從而可以評價(jià)其公共衛(wèi)生意義。
　　 1.為了解牦牛

2、寄生蟲感染情況，用改良抗酸染色法和飽和蔗糖溶液漂浮法檢查來自青海的犢牦牛糞便樣品456份。結(jié)果：飽和蔗糖溶液漂浮法，球蟲平均感染率為62.7％(286/456)，1～5月齡的感染率分別為53.6％(15/28)、46.2％(24/52)、62.0％(98/158)、66.0％(68/103)、70.4％(81/115)；改良抗酸染色法，隱孢子蟲平均感染率為13.2％(60/456)，1～5月齡的感染分別為27.8％(13/28)、9.1

3、％(12/52)、10.1％(16/158)、13.6％(14/103)、4.3％(5/115)。不同月齡牦牛的隱孢子蟲感染率有所不同，球蟲的感染率相當(dāng)高，應(yīng)引起重視。為進(jìn)一步確切掌握牦牛隱孢子蟲感染情況和牦牛隱孢子蟲遺傳特征，作者對己分離到的牦牛隱孢子蟲陽性分離株進(jìn)行卵囊純化，DNA提取，應(yīng)用巢式 PCR-RFLP法和序列分析法，對牦牛隱孢子蟲分離株擴(kuò)增分析。結(jié)果2個(gè)分離株均與 Cryptosporidium ryane(FJ4631

4、93)相近，同源性為100％，這也是國內(nèi)外首次在牦牛體內(nèi)發(fā)現(xiàn) Cryptosporidium ryane。
　　 2.作者對采集于南寧的245份食蟹猴糞樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)調(diào)查，結(jié)果表明：應(yīng)用飽和蔗糖溶液漂浮法和改良抗酸染色法，隱孢子蟲感染率為9.8％(24/245)。利用巢式 PCR擴(kuò)增到4個(gè)食蟹猴隱孢子蟲分離株18S rRNA基因部分片段，和13個(gè) GP60基因部分片段。對4個(gè)食蟹猴隱孢子蟲分離株進(jìn)行18S rRNA基因位點(diǎn)、GP60

5、基因位點(diǎn)的擴(kuò)增、克隆、測序，序列長度均為830bp左右。利用 Clustal X1.81、phylip3.67和 DNAstar4.0等生物學(xué)軟件對序列進(jìn)行比對、構(gòu)建進(jìn)化樹以及同源性分析。結(jié)果顯示基于18S rRNA基因的4個(gè)分離株和 C. muris等腸道寄生的隱孢子蟲在一個(gè)群上。同源性分析顯示，4個(gè)分離株與 GenBank上下載的 C. muris的同源性均為100％；基于 GP60基因的13個(gè)分離株和 C. hominiss等腸道