河南省7株支氣管炎病毒的分離鑒定及分子生物學(xué)特性分析.pdf

1、雞傳染性支氣管炎（InfeetiouSbronchitis，IB）是由冠狀病毒科、冠狀病毒屬的傳染性支氣管炎病毒（IBV）引起的一種急性、高度接觸性傳染病。IBV主要侵害雛雞的呼吸道、生殖系統(tǒng)及腎臟，引起產(chǎn)蛋雞的產(chǎn)蛋量和蛋的品質(zhì)下降，導(dǎo)致雞的生產(chǎn)性能降低。由于病毒自身基因組易發(fā)生點(diǎn)突變、基因缺失、插入及重組，導(dǎo)致病毒不斷產(chǎn)生變異，新的血清型和基因型不斷出現(xiàn)。由于不同血清型IBV之間僅有部分或完全沒有交叉保護(hù)作用，使得實(shí)際生產(chǎn)中免疫接種失

2、敗的現(xiàn)象不斷發(fā)生。盡管廣泛及頻繁地使用疫苗免疫，但近年來(lái)河南許多雞場(chǎng)仍發(fā)生IB，造成了較大的危害及經(jīng)濟(jì)損失。因此，了解和掌握目前河南省養(yǎng)雞生產(chǎn)上IBV流行毒株的分子變化的特征就成為一項(xiàng)有效防控IB的前提工作。 本試驗(yàn)從河南省的鶴壁，濮陽(yáng)，商丘，新鄭，洛陽(yáng)，漯河，駐馬店七個(gè)地區(qū)疑患傳染性支氣管炎的發(fā)病雞群中采集病料，應(yīng)用雞胚尿囊腔接種的方法進(jìn)行病毒分離和培養(yǎng)，對(duì)有病變的雞胚，取其尿囊液進(jìn)行常規(guī)的細(xì)菌檢查，菌檢陰性的通過血凝試驗(yàn)（H

3、A）、致雞胚矮小化試驗(yàn)、雞胚蛋重比評(píng)價(jià)傳染性支氣管炎病毒致侏儒化試驗(yàn)，對(duì)新城疫病毒增殖干擾的試驗(yàn)及利用反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-PCR）技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果共有7株分離物均具有IBV感染特征，無(wú)直接血凝性，毒株對(duì)NDV有明顯的干擾作用，病毒傳代物有明顯的致雞胚矮小化作用，用RT-PCR方法成功擴(kuò)增到IBVS1基因高變區(qū)。 為了解河南省雞場(chǎng)流行IB毒株的遺傳變異情況，對(duì)河南省從07年6月份到08年12月分離到的雞傳染性支氣管炎病

4、毒S1基因高變區(qū)進(jìn)行克隆、測(cè)序及序列比較和分析，系統(tǒng)進(jìn)化關(guān)系顯示這7株傳染性支氣管炎病毒屬于同一個(gè)基因群，其S1高變區(qū)之間核苷酸序列的同源性為97。0％（HN-LY與HN-ZMD）～99.8％（HN-LH與HN-PY），推導(dǎo)出氨基酸序列為93.5％（HN-ZMD與HN-LY）～100％（HN-PY與HN-HB）。表明在同一時(shí)期分離的毒株之間同源性較高，缺乏明顯的地域性差異。 對(duì)比NCBI已發(fā)表的序列，與其中氨基酸同源性較高的是吉

5、林分離株（CK/CH/LJL/07V）和北京分離腎型毒株（A2），最高分別為99.3％和95.4％；與疫苗株H120、疫苗株H52、疫苗株Ma5、M41、USA的Beaudette株、USA的Conn/B13dpvcontact株之間氨基酸同源性為74.2％～78.8％；與澳大利亞T株、河南06年分離株HN99之間的氨基酸同源性為69.3％～72.9％，表明在河南省傳染性支氣管炎病毒存在變異。 研究的結(jié)果表明，IBV的感染存在于