傳染性支氣管炎病毒分離株基因組序列測定及分子特征研究.pdf

1、本研究通過對雞傳染性支氣管炎病毒（IBV）基因序列的分析，設(shè)計保守引物，同時結(jié)合RACE5'端測序的方法，對IBV的一分離株JH06011進行全基因組測序。JH06011全長基因組為27，651bp，GC含量38.2％，具有典型的IBV病毒基因編碼特征5'-1a-1b-S(S1，S2)-3a，3b，3c(E)-M-5a，5b-N-Poly(A)-3'，編碼6個不同基因。通過基因組序列分析，發(fā)現(xiàn)JH06011與四川株SAIBK與SC021

2、202株的同源性較高，分別是94.6％和92.7％，與疫苗株H52、H120的同源性均為89.4％。點突變廣泛分布于結(jié)構(gòu)蛋白和部分非結(jié)構(gòu)蛋白基因的序列中，而插入、缺失主要發(fā)生在基因1 nsp3區(qū)、S基因的高變區(qū)(HVR)。此外，本研究還從山東濰坊某雞場產(chǎn)蛋雞卵巢組織中分離到一株IBV變異株，命名為WF2011，通過設(shè)計保守引物擴增獲得基因2～基因6的基因組序列。同源性比較和系統(tǒng)進化分析發(fā)現(xiàn)，WF2011與常見的參考毒株的同源性普遍較低，

3、S1基因的同源性在61.8％到86.0％之間，且與LX4、SAIBK和Mass類型的毒株存在較大的遺傳距離。因此，認為WF2011是一株在分子水平上變異程度比較大的IBV變異株。
　　 本研究還對同一時期從浙江金華地區(qū)分離到的兩毒株JH06011和JH06111致病性進行比較研究，發(fā)現(xiàn)JH06011感染1日齡和7日齡的雛雞死亡率為100％，而JH06111對這兩個日齡段的雛雞不致死。JH06011感染的雞腎組織中腎小管上皮細胞變

4、性、排列松散，而JH06111感染的雞腎組織病變較輕微。對感染雞腎組織的病毒核酸進行RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn)JH06011 S1基因和M基因的檢出為100％，而JH06111的檢出率分別為71.4％和85.7％，以上結(jié)果表明JH06011的致病性比JH06111強。這兩毒株感染雞的臨床表現(xiàn)、病理變化、組織中病毒載量存在一定的差異。
　　 進一步將JH06011和JH06111兩毒株的基因組序列進行比較分析。兩毒株的基因組同源性為91