葡萄灰霉病菌拮抗細(xì)菌B-,1-、B-,5-拮抗機(jī)理及田間防治研究.pdf

1、B1、B5是從葡萄果穗附生微生物區(qū)系分離獲得的2株對葡萄灰霉病菌（Botrytis cinerea）具有很強(qiáng)的拮抗作用的拮抗細(xì)菌。經(jīng)鑒定B5屬于芽孢桿菌屬（Bacillus sp．），B1待鑒定。本文測定了B1、B5的抑制作用、發(fā)酵條件、抑菌蛋白活性及特性，同時(shí)研究了B1、B5與化學(xué)農(nóng)藥混配的田間防治效果，得出以下主要結(jié)論： 1.拮抗細(xì)菌B1、B5的抑制作用 通過對菌株B1、B5抑菌效果、機(jī)制和抗真菌譜進(jìn)行測定，結(jié)果表明

2、，B1、B5和葡萄灰霉病菌對峙培養(yǎng)5d后，均產(chǎn)生明顯的抑菌帶，抑菌帶寬度為6．90～9．67 mm，培養(yǎng)10d后，仍然保持穩(wěn)定的抑菌效果；B1、B5的發(fā)酵原液對葡萄灰霉病菌孢子萌發(fā)具有顯著的抑制作用，抑制率為97．51%～98．12%； B1、B5對病菌的作用機(jī)制表現(xiàn)為使病菌菌絲畸形、原生質(zhì)濃縮、菌絲斷裂、抑制病菌分生孢子的萌發(fā)、導(dǎo)致孢子芽管扭曲。對峙培養(yǎng)表明，B1、B5均具有較廣的抗真菌譜，對10種供試病原真菌的菌絲生長抑制率都在50

3、%以上。 2.拮抗細(xì)菌B1、B5發(fā)酵條件的測定 為提高拮抗菌株B1、B5發(fā)酵生產(chǎn)的菌量和抑菌活性，對其搖床發(fā)酵培養(yǎng)基成分及發(fā)酵條件進(jìn)行研究。結(jié)果表明拮抗細(xì)菌B1的最佳碳氮源為乳糖和硝酸銨，最適培養(yǎng)條件為：溫度28～33℃、培養(yǎng)時(shí)間36～48h、起始pH6．0、裝液量50ml/250ml； B5菌株的最佳碳氮源為葡萄糖和蛋白胨，最適發(fā)酵條件是：溫度28～33℃、培養(yǎng)時(shí)間36～48h、起始pH7．0、裝液量50ml/250m

4、l； 3.拮抗細(xì)菌B1、B5抑菌蛋白活性及其特性研究 對B1、B5發(fā)酵液分別經(jīng)70%和80%的（NH4）2SO4鹽析得到的蛋白粗提液對葡萄灰霉病菌營養(yǎng)生長的抑制效果最佳，抑菌圈直徑為21．5mm、22．4 mm。B1、B5抑菌蛋白對高溫較穩(wěn)定，均在80℃以內(nèi)處理30·min后其抑菌活性基本不變；B1、B5抑菌蛋白均對蛋白酶K比較穩(wěn)定；在pH5～10范圍內(nèi)均表現(xiàn)很強(qiáng)的抑菌活性，中性條件下的抑菌效果最佳，堿性條件的抑菌活性強(qiáng)

5、于酸性條件；且B1、B5抑菌蛋白耐儲(chǔ)存，在常溫下放置30d抑菌活性保持不變。 4.菌-藥結(jié)合田間防效測定 本試驗(yàn)篩選出0．1mg/ml的多菌靈（25%可濕性粉劑）對拮抗菌B1、B5無抑制作用，并與B1、B5混配有協(xié)同增效作用。試驗(yàn)結(jié)果表明，B1、B5與0．1mg/ml多菌靈混配對葡萄灰霉病菌室內(nèi)離體果防治效果分別達(dá)到了87．41%和88．50%，大棚溫室防治效果也可達(dá)80%，其中B5與0．1mg/ml多菌靈混配的防治效果