甘肅桃抗南方根結(jié)線蟲基因的分子標(biāo)記研究.pdf

1、桃樹是世界上廣泛栽培的果樹之一。根結(jié)線蟲病是常見的危害桃正常生長的一種重要病害，選育抗性砧木是預(yù)防此類病害的主要途徑，尋找與抗根結(jié)線蟲性狀緊密連鎖的分子標(biāo)記對桃樹育種和抗根結(jié)線蟲機(jī)理的研究有重要意義。本研究以對南方根結(jié)線蟲免疫的紅根甘肅桃和對南方根結(jié)線蟲高感品種貝蕾及其雜交所得的BC1代190株實(shí)生群體為試材，通過SSR，SRAP分子標(biāo)記技術(shù)對抗南方根結(jié)線蟲基因進(jìn)行了分子標(biāo)記研究并構(gòu)建分子遺傳連鎖圖譜，以期對培育或選育抗根結(jié)線蟲桃品種以

2、及進(jìn)一步的相關(guān)研究打下一定基礎(chǔ)。 主要研究內(nèi)容如下： （1）試驗(yàn)對紅根甘肅桃和貝蕾及其隨機(jī)挑選的190株BC1代群體進(jìn)行了田間南方根結(jié)線蟲卵塊的接種鑒定，經(jīng)過精細(xì)管理，最終BC1群體中有107株感染南方根結(jié)線蟲，表現(xiàn)為高感，83株沒有被侵染，表現(xiàn)為免疫，鑒定結(jié)果符合1：1孟德爾遺傳規(guī)律。 （2）以CTAB法提取基因組DNA，去除RNA后作為SSR，SRAP分析的模板。試驗(yàn)建立了適合桃SSR，SRAP分析的PCR反

3、應(yīng)體系，SSR體系為：模板DNA1.0μL，10×buffer（MgCl2）1.0μL，dNTP0.6μL，上下游引物各（10mM）0.35μL， TaqDNApoierase（5u/ul）0.2μL，ddH2O6.5μL，共計(jì)10μL。SRAP體系為模板DNA1.0μL，10×buffer（MgCl2）2.0μL，dNTP0.6μL，引物各（10mM）0.3μL， TaqDNApoierase（5u/ul）0.2μL，ddH2O5.6

4、μL，共計(jì)10μL。 （3）從BC1群體中挑選5個感病單株和5個免疫單株分別構(gòu)建感病和抗病基因池，用135對SSR引物和64對SRAP引物對紅根甘肅桃、貝蕾、基因混合池進(jìn)行篩選，得到39對SSR引物和43對SRAP引物符合遺傳規(guī)律和實(shí)驗(yàn)要求，經(jīng)擴(kuò)增電泳并統(tǒng)計(jì)分析后，共得到141條差異明顯的擴(kuò)增條帶，最終構(gòu)建出一個覆蓋全部8條染色體的較緊密的遺傳連鎖圖譜，覆蓋基因組總長為1267.3cM，連鎖群的平均長度為158.4 cM，標(biāo)記間