番茄抗根結(jié)線蟲基因SlMi導(dǎo)入萵苣的研究.pdf

1、植物根結(jié)線蟲（Meloidogyne spp．）是一種專性寄生病害，可寄生于3000多種植物，是世界四大植物侵染性病原之一，給我國和世界農(nóng)業(yè)帶來了巨大的經(jīng)濟損失。本研究根據(jù)同源序列法從番茄中克隆到抗根結(jié)線蟲基因SIMi，并建立了萵苣高效再生和遺傳轉(zhuǎn)化體系，將該基因通過農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法轉(zhuǎn)入到缺乏抗性資源的萵苣中，為萵苣的抗根結(jié)線蟲育種奠定了基礎(chǔ)，并對異源基因在萵苣中的成功應(yīng)用提供了范例。主要研究結(jié)果如下： 1．建立了萵苣的再

2、生與轉(zhuǎn)化體系。通過對16種培養(yǎng)基的篩選比較發(fā)現(xiàn)，不同的萵苣品種在不同的培養(yǎng)基中其分化頻率有較大差別。其中耐熱二白皮的分化能力最強，在7種培養(yǎng)基中的分化頻率均超過了90％，其最優(yōu)分化培養(yǎng)基為MS+6—BA0．5mg/L+NAA0．20 mg/L，分化頻率達99．21％；華選一號次之，在4種培養(yǎng)基中的分化頻率超過90％，其最優(yōu)分化培養(yǎng)基為MS+6—BA1．0 mg/L+NAA0．25 mg/L，分化頻率達97．58％；耐抽薹生菜在3種培養(yǎng)基

3、中的分化頻率超過90％，其最優(yōu)分化培養(yǎng)基為MS+6—BA0．5 mg/L+NAA0．25 mg/L，分化頻率達94．94％。以華選一號為受體進行了轉(zhuǎn)化體系的建立，以Kam為100 mg/L時對抗性芽的篩選效果最好。 2．根據(jù)GenBank中已公布的番茄根結(jié)線蟲抗性基因Mi（AF039682）的序列信息，利用同源序列法克隆了該基因，并構(gòu)建了SIMi基因的正義遺傳轉(zhuǎn)化載體。 3．利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的方法，成功的將番茄抗根結(jié)線蟲基

4、因SIMi導(dǎo)入到萵苣華選一號中，獲得24棵卡那霉素抗性植株。對其中的4棵進行PCR和Southern Blot檢測，結(jié)果表明在3棵植株中有外源基因的整合，其拷貝數(shù)1—3個不等。 4．萵苣轉(zhuǎn)基因植株的半定量RT—PCR分析結(jié)果表明，有3棵轉(zhuǎn)化植株靶基因的表達量比對照明顯增加。 5．轉(zhuǎn)基因植株的根結(jié)線蟲抗性評價結(jié)果表明3棵轉(zhuǎn)基因植株對根結(jié)線蟲的抗性明顯提高。 6．對轉(zhuǎn)基因植株T1代進行了種子發(fā)芽率、種子形態(tài)學(xué)的分析，