正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選石榴皮中總多酚的提取工藝研究

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文</b></p><p>　　正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選石榴皮中</p><p>　　總多酚的提取工藝研究</p><p>　二級(jí)學(xué)院中藥學(xué)院</p><p>　專 業(yè)中藥學(xué)（中藥分析與鑒定方向）</p><p>　班 級(jí)2011級(jí)（3）班</p&g

2、t;<p>　學(xué)生姓名湯苑蘭</p><p>　學(xué) 號(hào)1106503343</p><p>　指導(dǎo)教師何洋</p><p>　2015年4月</p><p><b>　　誠(chéng) 信 聲 明</b></p><p>　　我聲明，所呈交的畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）是本人在老師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作

3、及取得的研究成果。據(jù)我查證，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文（設(shè)計(jì)）中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含為獲得其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。我承諾，論文（設(shè)計(jì)）中的所有內(nèi)容均真實(shí)、可信。</p><p>　　畢業(yè)論文（設(shè)計(jì)）作者（簽名）： </p><p>　　年 月 日</p><p><

4、b>　　目 錄</b></p><p><b>　　摘要Ⅰ-Ⅱ</b></p><p><b>　　1 前言1</b></p><p><b>　　2 材料與儀器3</b></p><p>　　2.1試劑與試藥3</p><p

5、><b>　　2.2主要儀器3</b></p><p><b>　　3 方法4</b></p><p>　　3.1 石榴皮總多酚含量測(cè)定方法4</p><p>　　3.2 方法學(xué)考察5</p><p>　　3.3 石榴皮中總多酚的提取工藝優(yōu)化6</p><p>

6、;<b>　　4 結(jié)果7</b></p><p>　　4.1 石榴皮總多酚含量測(cè)定方法7</p><p>　　4.2 方法學(xué)考察結(jié)果7</p><p>　　4.3 石榴皮中總多酚的乙醇提取工藝優(yōu)化結(jié)果10</p><p><b>　　5 討論14</b></p><p&

7、gt;　　5.1 提取條件分析14</p><p>　　5.2 石榴皮總多酚的顯色條件分析15</p><p>　　5.3 最大吸收波長(zhǎng)選擇16</p><p>　　5.4 正交試驗(yàn)結(jié)果分析16</p><p><b>　　5.5 其他16</b></p><p><b>　　

8、6 結(jié)論17</b></p><p><b>　　參考文獻(xiàn)18</b></p><p><b>　　綜述20</b></p><p><b>　　致謝32</b></p><p>　　正交設(shè)計(jì)法優(yōu)選石榴皮中總多酚的提取工藝研究</p><

9、p>　　摘要：目的 對(duì)石榴皮中總多酚的提取工藝進(jìn)行研究，并運(yùn)用正交設(shè)計(jì)法對(duì)其提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，以獲得最佳的提取工藝。方法 以沒(méi)食子酸為對(duì)照，選取磷鉬鎢酸法對(duì)其顯色，用紫外分光光度法在760nm處測(cè)定總多酚的吸光度，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線法計(jì)算石榴皮中總多酚的含量。采用L9（34）正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，以石榴皮中總多酚含量為考察指標(biāo)，考察乙醇濃度、提取時(shí)間、乙醇用量、提取溫度4個(gè)因素對(duì)總多酚提取的影響。結(jié)果 最佳的提取工藝為固定超聲波功率100W，

10、乙醇濃度為30%，提取溫度為60℃，料液比為1:30（g·mL-1），提取時(shí)間為40min。結(jié)論 該工藝經(jīng)試驗(yàn)含量測(cè)定方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好，提取工藝經(jīng)濟(jì)、合理，值得進(jìn)一步推廣，對(duì)進(jìn)一步的工藝開(kāi)發(fā)有較好的參考價(jià)值。 </p><p>　　關(guān)鍵詞：石榴皮；總多酚；紫外可見(jiàn)分光光度法；正交設(shè)計(jì)法</p><p>　　Study on the Extraction Process b

11、y Orthogonal Design of Total Polyphenols in Pomegranate Peel</p><p>　　Abstract: Objective Study on the extractive process of polyphenols quantities and using the orthogonal experimental design method to sele

12、ct the best one. Methods Used gallic acid as a control matter selected the phosphomolybdic tungstic acid to carry out its color determined the absorbance at 760nm of polyphenols by using the ultraviolet spectrophotometry

13、 then calculated the total quantities of polyphenols according to standard curve method. By using the L9(34) orthogonal experimental design,met</p><p>　　Keywords:pomegranate peel;total polyphenols;ultraviole

14、t spectrophotometry; method orthogonal experimental design</p><p><b>　　1 前言</b></p><p>　　石榴皮(Punicagmnate Peel)系石榴科（Punicaceae）石榴屬（Punica L.）植物石榴（Punica granatum L.）的干燥果皮，秋季果實(shí)成熟，果皮開(kāi)裂

15、時(shí)采摘，去除種子及隔瓤，曬干或微火烘干。石榴皮是包裹在石榴果實(shí)外層的外皮，占石榴的20%~30%，大小不一，厚1.5~3mm，為不規(guī)則的片狀或瓢狀。外表面紅棕色、棕黃色或暗棕色，略有光澤，粗糙，有多數(shù)疣狀突起，有的有突起的筒狀宿萼及粗短果?；蚬：邸?nèi)表面紅棕色或黃色，有隆起呈網(wǎng)狀的果蒂殘痕。質(zhì)硬而脆，斷面黃色，略顯顆粒狀。作為傳統(tǒng)中藥，在《中國(guó)藥典》（2010年版）第一部記載：“性酸、溫、澀；具有澀腸止瀉、止血、驅(qū)蟲(chóng)等作用。用于久瀉、

16、久痢、便血、脫肛、崩漏、白帶、蟲(chóng)積腹痛”。</p><p>　　石榴，別名安石榴、榭榴、丹若、金龐、海榴、甘石榴、天漿、若榴等，原產(chǎn)于伊朗及阿富汗等中亞地區(qū)，現(xiàn)在主要分布在亞熱帶及溫帶地區(qū)。據(jù)史書(shū)《博物志》記載：“漢張騫出使西域，得涂林安石榴種以歸，名為安石榴”。在中國(guó)至今已有2000多年栽培歷史，常被人們譽(yù)為“天下奇果，九州名果”。石榴果皮和根皮可入藥，且是印染和制革工業(yè)的原料。我國(guó)目前已形成了河南滎陽(yáng)和開(kāi)封、

17、陜西臨潼、山東棗莊、安徽懷遠(yuǎn)、四川會(huì)理、云南蒙自和新疆葉城8大石榴主產(chǎn)區(qū)，栽植面積達(dá)64668hm2，居世界首位，產(chǎn)量達(dá)38萬(wàn)多噸[1]。</p><p>　　隨著石榴越來(lái)越受到人們的喜愛(ài)，石榴已經(jīng)成為我國(guó)重點(diǎn)發(fā)展的水果之一，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)石榴皮的研究也越來(lái)越多。有文獻(xiàn)報(bào)道[2]，1929年，Emanuele Flaccomio分析了新鮮石榴果皮的成分，石榴皮含鞣花單寧10.4~21.3%，蠟0.8%，樹(shù)脂4.5%

18、，甘露醇1.8%，糖2.7%，樹(shù)膠3.2%，沒(méi)食子酸4%等。1963年，S．Rajadurai等[3]人又從石榴皮中分析出異斛皮甙和石榴皮堿。1995年，云南省農(nóng)科院生物技術(shù)研究所[4]對(duì)蒙自石榴皮的氨基酸組分進(jìn)行了分析，石榴皮含有多種氨基酸。另外，一系列的實(shí)驗(yàn)研究表明石榴皮有凝集精液和體內(nèi)抗免生育的作用，對(duì)生殖器皰疹病毒、淋球菌和白色念珠菌有明顯的抑制和殺滅作用，而且沒(méi)有副作用[5]。因此，石榴皮在避孕、控制和治療性傳播疾病方面很有發(fā)

19、展前景[6]。Saito等[7]從日本上千種藥用植物中篩選具有抗氧化能力的可食用植物，結(jié)果表明石榴皮提取物列第一，檢測(cè)表明其抗氧化活性與多酚含量相關(guān)。石榴中多酚物質(zhì)主要分布于石榴皮中，約為10.4%~21.3%[8]。</p><p>　　石榴皮多酚是一類(lèi)具有多酚羥基化合物的總稱，主要包括鞣質(zhì)類(lèi)（水解鞣質(zhì)）和黃酮類(lèi)化合物（黃酮醇、黃烷醇、花色苷）等。石榴皮其他的化學(xué)成分有甾體類(lèi)和三萜類(lèi)、甘油三酯、有機(jī)酸和酚酸、脂

20、肪酸和生物堿類(lèi)。石榴皮多酚作為石榴皮中一種重要的生理活性成分，具有抗氧化、抗菌、抗突變、抗癌和降血脂等生物學(xué)功效，在食品、醫(yī)藥和化妝品等領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用價(jià)值[9-11]。</p><p>　　石榴皮多酚提取方法各異，有直接煎熬提取法，微波提取法，超聲波提取法，超臨界流體萃取法等，王玲等[12]探討了石榴皮多酚的最佳超聲提取工藝條件為：目數(shù)為60~80目，提取功率為385W。料液比1:25，提取時(shí)間120s，提取三

21、次，多酚得率高達(dá)21.4%。郭曉萍等[13]采用煎熬法提取石榴皮鞣質(zhì)的工藝為：抽提比1:40，溫度90℃，時(shí)間40min，鞣質(zhì)的含量為17.3%。姜萍等[14]采用超臨界CO2萃取，得到萃取條件為：溫度44℃，壓力25Mpa，乙酸乙酯為夾帶劑，萃取時(shí)間120min，得率能到57. 83%。石榴皮總多酚的測(cè)定一般是采用分光光度計(jì)法，張茜等[15]采用的Folin-酚法對(duì)石榴皮提取物中多酚的含量進(jìn)行測(cè)定，以沒(méi)食子酸的量為對(duì)照品。</p

22、><p>　　近年來(lái)，隨著人們對(duì)石榴皮營(yíng)養(yǎng)保健價(jià)值的認(rèn)識(shí)，石榴皮的研究成為熱點(diǎn)。我國(guó)的石榴資源十分豐富，種植面積不斷擴(kuò)大，石榴的綜合利用尚有很大的空間，而石榴皮除部分藥用外幾乎都被丟棄，這造成很大的資源浪費(fèi)。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)石榴皮的研究均主要集中在有效成分的抗氧化作用及其產(chǎn)生的藥理活性、藥效及作用機(jī)制方面。但是，對(duì)于石榴皮中多酚類(lèi)成分（含量為石榴皮干質(zhì)量的10%~</p><p>　　20%）的

23、制備工藝方面的研究極少。而且前期藥效試驗(yàn)也已證明，石榴皮多酚含量與其生物活性呈明顯的正相關(guān)性。為了合理利用這部分廢棄資源，更好地開(kāi)發(fā)、利用石榴皮中的多酚，筆者采用紫外-可見(jiàn)分光光度法，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品，對(duì)石榴皮中的多酚進(jìn)行含量測(cè)定，正交試驗(yàn)優(yōu)選石榴皮總多酚最佳的制備工藝進(jìn)行研究，以期為與石榴皮相關(guān)的保健食品的研究及資源開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)和檢測(cè)手段。 </p><p><b>　　2 材料與儀器</

24、b></p><p>　　2.1試劑與試藥 </p><p><b>　　2.2 主要儀器</b></p><p><b>　　3 方法</b></p><p>　　3.1 石榴皮總多酚含量測(cè)定方法</p><p>　　3.1

25、.1 總多酚含量的測(cè)定</p><p>　　采用磷鉬鎢酸法[16]，以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)品。</p><p>　　福林試劑(FC試劑)的配制：在1000mL的圓底燒瓶?jī)?nèi)加入50g鎢酸鈉、12.5g鉬酸鈉、350mL蒸餾水，85%的濃磷酸25mL及濃鹽酸50mL，充分混勻，加熱回流10h，再加入15g硫酸鋰，15mL雙氧水，然后開(kāi)口繼續(xù)煮沸15min，待雙氧水完全揮發(fā)，呈亮黃色。冷卻后定容至50

26、0mL，過(guò)濾，濾液呈黃綠色，置于棕色試劑瓶中，此液放置于冰箱中備用。</p><p>　　3.1.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備</p><p>　　取沒(méi)食子酸標(biāo)準(zhǔn)品約7mg，精密稱定，用蒸餾水溶解并定容至50mL，得濃度為0.1446 mg·mL-1的對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅰ。同法制備對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ，沒(méi)食子酸的濃度為45.11mg·mL-1。</p><p>　　

27、3.1.3 供試品溶液的制備</p><p>　　取石榴皮粗粉約0.5g，精密稱定，加40%乙醇溶液15mL，50℃超聲處理30min，濾過(guò)，濾液稀釋至50mL，再取1mL 稀釋至20mL，作為供試品溶液。</p><p>　　3.1.4 選擇測(cè)定波長(zhǎng)</p><p>　　精密吸取0.5mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅰ置于25mL的棕色容量瓶中，加蒸餾水至10.0mL，然后分別

28、加入福林試劑0.5mL，混勻，在0.5~8min內(nèi)加入1.5mL20%</p><p>　　Na2CO3溶液，充分混合后定容，作為對(duì)照品溶液，30℃避光放置1.5h后置于1cm的比色皿中，以缺對(duì)照品溶液作為空白對(duì)照，照分光光度法（中國(guó)藥典2010年版附ⅣA）[17]，在200~800nm范圍內(nèi)掃描，分析掃描出來(lái)的圖譜，找出沒(méi)食子酸對(duì)照品的最大吸收波長(zhǎng)。</p><p>　　精密吸取1.0m

29、L供試品液于25mL的棕色容量瓶中，按上顯色法操作，找出石榴皮總多酚的最大吸收波長(zhǎng)。</p><p>　　結(jié)合兩者的最大吸收波長(zhǎng)確定測(cè)定波長(zhǎng)。</p><p><b>　　3.2 方法學(xué)考察</b></p><p>　　3.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制</p><p>　　分別精密吸取0.2 、0.4、0.6、0.8

30、、1.0、1.2、1.4mL的對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅰ，置于25mL的棕色容量瓶中，加蒸餾水至10.0mL，然后分別加入福林試劑0.5mL，混勻，在0.5~8min內(nèi)加入1.5mL20%Na2CO3溶液，充分混合后定容，作為對(duì)照品溶液，30℃避光放置1.5h后置于1cm的比色皿中，以缺對(duì)照品溶液作為空白對(duì)照，在選出的最大吸收波長(zhǎng)（λ為760nm）處，測(cè)定吸光度，每個(gè)樣品平行測(cè)定3次，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。</p><p>　　3

31、.2.2 精密度試驗(yàn)</p><p>　　取石榴皮粉末約0.5g，精密稱定，按“3.1.3”項(xiàng)下供試品制備的方法，制備供試品溶液，于760nm波長(zhǎng)處，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定吸光度的方法，測(cè)定吸光度，平行測(cè)定6次。</p><p>　　3.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)</p><p>　　取石榴皮粉末約0.5g，精密稱定，按“3.1.3”項(xiàng)下供試品制備的方法，制備供試品溶液，于760

32、nm波長(zhǎng)處，分別在0，0.5，1.0，1.5，2.0，2.5h時(shí)，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定吸光度的方法，測(cè)定吸光度。</p><p>　　3.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)</p><p>　　取石榴皮粉末約0.5g，6份，精密稱定，按“3.1.3”項(xiàng)下供試品制備的方法，制備供試品溶液6份，于760nm波長(zhǎng)處，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定吸光度的方法，測(cè)定吸光度。</p><p>　　3.2.5加

33、樣回收率試驗(yàn)</p><p>　　取已知含量的供試品粉末（總多酚的含量為183.9mg·g-1）9份，每份約為0.5g，精密稱定，分別加入對(duì)照品儲(chǔ)備液Ⅱ，按“3.1.3”項(xiàng)下供試品制備的方法，制備供試品溶液每個(gè)濃度3份，逐一測(cè)定吸光度。</p><p>　　3.2.6樣品含量測(cè)定</p><p>　　取三批石榴皮粉末各3份，每份約為0.5g，精密稱定，按“

34、3.1.3”項(xiàng)下供試品制備的方法，制備供試品溶液6份，于760nm波長(zhǎng)處，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定吸光度的方法，測(cè)定吸光度，并計(jì)算石榴皮中總多酚的含量。</p><p>　　3.3石榴皮中總多酚的提取工藝優(yōu)化</p><p>　　3.3.1 石榴皮總多酚的乙醇提取單因素試驗(yàn)</p><p>　?。?）提取溫度的選擇</p><p>　　固定乙醇濃度為

35、40%，料液比為1:30，超聲提取30min，研究不同提取溫度（50℃，55℃，60℃，65℃，70℃）對(duì)石榴皮總多酚提取效果的影響。</p><p>　　（2）乙醇濃度的選擇</p><p>　　固定料液比1:30，50℃超聲提取30min，選擇10%，20%，30%，40%，50%不同濃度乙醇溶液作溶劑，研究不同濃度的乙醇對(duì)石榴皮總多酚提取效果的影響。</p><p

36、>　　（3）提取時(shí)間的選擇</p><p>　　固定乙醇濃度為40%，料液比為1:30，50℃超聲提取，研究不同超聲提取時(shí)間（20min，30min，40min，50min，60min）對(duì)石榴皮總多酚提取效果的影響。</p><p><b>　?。?）料液比的選擇</b></p><p>　　固定乙醇濃度為40%，50℃超聲提取30min

37、，研究不同比例的料液比（1:30，1:40，1:50，1:60，1:70）對(duì)石榴皮總多酚提取效果的影響。</p><p>　　3.3.2 石榴皮總多酚的乙醇提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)</p><p>　　根據(jù)單因素試驗(yàn)結(jié)果，以乙醇濃度、提取溫度、料液比和提取時(shí)間為主要考察因素，以測(cè)得樣品總多酚的提取率為主要考察指標(biāo)，按表3-1的正交因子水平L9（34）設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，每個(gè)試驗(yàn)平行做三次（每次試驗(yàn)中干燥

38、的石榴皮粉末的用量約0.5g，均精密稱定），以確定最佳提取條件。</p><p>　　表3-1 石榴皮總多酚的提取工藝因素水平表</p><p><b>　　4 結(jié)果</b></p><p>　　4.1石榴皮總多酚含量測(cè)定方法</p><p>　　4.1.1測(cè)定波長(zhǎng)的選定</p><p>　　在2

39、00~800nm范圍內(nèi)掃描波長(zhǎng)得到?jīng)]食子酸標(biāo)準(zhǔn)液的最大吸收波長(zhǎng)為761nm，與760nm處相近，而樣品的最大吸收波長(zhǎng)為760nm，且文獻(xiàn)亦有用760nm作為最大吸收波長(zhǎng)，故而選定760nm為測(cè)定波長(zhǎng)。</p><p>　　4.2 方法學(xué)考察結(jié)果</p><p>　　4.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制結(jié)果</p><p>　　取對(duì)照品系列溶液，以不含沒(méi)食子酸的空白溶液為參比，

40、于760 nm處測(cè)定吸光度值A(chǔ)，以總多酚吸光度值（A）為縱坐標(biāo)，總多酚對(duì)照品溶液濃度（C）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。石榴皮總多酚測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4-1，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果見(jiàn)圖4-1。用最小二乘法作線性回歸，得回歸方程為A=1.133×10-1 C+6.400×10-3，相關(guān)系數(shù)r=0.9996(r>0.9990)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，沒(méi)食子酸在1.157~8.098μg·mL-1濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系。&

41、lt;/p><p>　　表4-1 石榴皮總多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定結(jié)果</p><p>　　圖4-1 總多酚含量測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)曲線（以沒(méi)食子酸為標(biāo)準(zhǔn)）</p><p>　　4.2.2 精密度試驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　儀器精密度試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-2，吸光度的RSD為0.12%（n=6），表明儀器的精密度良好。</p><p>　　表4-

42、2 儀器精密度試驗(yàn)結(jié)果（n=6）</p><p>　　4.2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-3，由結(jié)果計(jì)算得總多酚的吸光度值為0.425，RSD為0.61%（n=6），表明供試品溶液在2.5h內(nèi)穩(wěn)定。</p><p>　　表4-3 穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果（n=6）</p><p>　　4.2.4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果<

43、/p><p>　　重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-4，由結(jié)果計(jì)算得樣品總多酚含量的平均值為185.0 mg·g-1。重復(fù)性試驗(yàn)RSD為0.97%（n=6），表明方法的重現(xiàn)性較好，方法可行。</p><p>　　表4-4 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果（n=6）</p><p>　　4.2.5加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果</p><p>　　加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-5，加

44、樣回收率試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，總多酚（以沒(méi)食子酸計(jì)）的平均回收率為99.80%，RSD為1.2%（n=3），符合分析要求。</p><p>　　表4-5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果（n=3）</p><p>　　4.2.6樣品含量測(cè)定結(jié)果</p><p>　　含量測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表4-6，三個(gè)批次石榴皮中總多酚的含量分別為183.9mg·g-1、198.3mg·g-1

45、和226.9mg·g-1，RSD分別為0.01%，0.01%和0.01%，符合要求。</p><p>　　表4-6 樣品含量測(cè)定結(jié)果（n=9）</p><p>　　4.3石榴皮中總多酚的乙醇提取工藝優(yōu)化結(jié)果</p><p>　　4.3.1 石榴皮總多酚的乙醇提取單因素試驗(yàn)結(jié)果</p><p>　?。?）提取溫度的選擇結(jié)果</p

46、><p>　　提取溫度的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-7，圖4-2，在其他因素不變的情況下，石榴皮總多酚提取含量隨著提取溫度的升高而變化，其中50℃~60℃為提取總多酚含量的最佳范圍。</p><p>　　表4-7 提取溫度的選擇</p><p>　　圖4-2 提取溫度對(duì)石榴皮總多酚提取效果的影響</p><p>　?。?）乙醇濃度的選擇結(jié)果</p>

47、;<p>　　乙醇濃度的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-8，圖4-3，在其他因素不變的情況下，剛開(kāi)始隨著乙醇濃度的增加，石榴皮總多酚的得率也增加，乙醇濃度20%~40%為提取總多酚的最佳范圍。</p><p>　　表4-8 乙醇濃度的選擇</p><p>　　圖4-3 乙醇濃度對(duì)石榴皮總多酚提取效果的影響</p><p>　?。?）提取時(shí)間的選擇結(jié)果</p>

48、;<p>　　提取時(shí)間的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-9，圖4-4，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在其他因素不變的情況下，隨著提取時(shí)間的延長(zhǎng)，石榴皮總多酚的得率呈增大趨勢(shì)，提取時(shí)間30min~50min為提取總多酚的最佳范圍。</p><p>　　表4-9 提取時(shí)間的選擇</p><p>　　圖4-4 提取時(shí)間對(duì)石榴皮總多酚提取效果的影響</p><p>　　（4）料液比的選擇結(jié)果

49、</p><p>　　料液比的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-10，圖4-5，在其他因素不變的情況下，石榴皮總多酚提取含量隨著料液比的增加而降低，料液比1:30~1:50為提取總多酚的最佳范圍。 </p><p>　　表4-10 料液比的選擇</p><p>　　圖4-5 料液比對(duì)石榴皮總多酚提取效果的影響</p><p>　　4.3.2 石榴皮總多酚的乙醇

50、提取正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)結(jié)果</p><p>　　石榴皮總多酚的乙醇提取正交試驗(yàn)的試驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4-11。</p><p>　　表4-11 石榴皮總多酚的提取工藝正交試驗(yàn)結(jié)果分析</p><p>　　由表分析可知：石榴皮粉末在超聲提取時(shí)，4種因素最佳組合為A2B3C1D2，即乙醇濃度為30%，提取溫度為60℃，料液比為1:30，提取時(shí)間為40min。在此條件下進(jìn)行重復(fù)試驗(yàn)，重

51、復(fù)試驗(yàn)平均值為187.4 mg·g-1，RSD為0.10%，與預(yù)測(cè)值較為接近,說(shuō)明采用正交設(shè)計(jì)法得到的工藝參數(shù)可靠,具有一定的實(shí)用價(jià)值。</p><p>　　根據(jù)極差分析，本實(shí)驗(yàn)四個(gè)因素的主次關(guān)系是C＞A＞B＞D，即料液比＞乙醇濃度＞提取溫度＞提取時(shí)間，說(shuō)明料液比對(duì)總多酚得率的影響最大，提取時(shí)間影響最小。</p><p><b>　　5 討論</b><

52、/p><p>　　5.1 提取條件分析 </p><p>　　5.1.1提取溫度的影響</p><p>　　溫度對(duì)于細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的溶出起著重要作用，溫度過(guò)低，溶出速率慢，效率低，但溫度過(guò)高，對(duì)于熱敏性物質(zhì)的性質(zhì)產(chǎn)生影響，同時(shí)能量消耗大。本實(shí)驗(yàn)中，剛開(kāi)始隨著提取溫度的升高，石榴皮總多酚的得率也增加，提取溫度為55℃時(shí)總多酚得率最高。這是由于隨著溫度升高，分子運(yùn)動(dòng)速度加快

53、，多酚的滲透、溶解、擴(kuò)散速度也加快，從而促進(jìn)了原料中石榴皮總多酚的溶出，使得多酚得率得以提高。當(dāng)溫度繼續(xù)上升，石榴皮中總多酚得率呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，原因可能是多酚類(lèi)物質(zhì)的穩(wěn)定性較差，長(zhǎng)時(shí)間受熱發(fā)生氧化或水解反應(yīng)，使提取出來(lái)的多酚含量反而更低。因此，最佳提取溫度是55℃。</p><p>　　5.1.2溶劑濃度的影響</p><p>　　由于石榴皮多酚結(jié)構(gòu)中含有多個(gè)羥基，極性較大，可溶于水、乙醇、

54、丙酮等親水性有機(jī)溶劑。然而，甲醇和乙醇作溶劑時(shí)多酚得率相差不大，且乙醇的安全性高，成本低，來(lái)源廣，易回收，因此本實(shí)驗(yàn)選用乙醇作為提取溶劑，并對(duì)其濃度進(jìn)行考察。</p><p>　　植物體內(nèi)多酚常與蛋白質(zhì)多糖等大分子通過(guò)氫鍵、疏水鍵等形成復(fù)合物，乙醇濃度過(guò)大或過(guò)小都可降低石榴皮總多酚的提取得率。這主要是由于石榴皮多酚的成分很復(fù)雜，兼有脂溶性和水溶性成分，根據(jù)“相似相溶”原理，合適的乙醇體積分?jǐn)?shù)才有利于有效成分最大化

55、地溶出。乙醇濃度過(guò)低時(shí)，水含量高，不能破壞多酚與大分子之間的鍵，多酚提取的得率不高；研究表明，在中等極性溶劑中多酚類(lèi)提取的得率較高；乙醇濃度過(guò)高，會(huì)造成脂溶性成分浸出增加，影響多酚的提取，進(jìn)而降低多酚的得率。</p><p>　　其中，濃度為30%乙醇溶液提取出石榴皮總多酚含量最高。 </p><p>　　5.1.3提取時(shí)間的影響</p><p>　　浸提時(shí)間長(zhǎng)短直

56、接影響提取效率的高低，浸提時(shí)間短，可以提高效率，但可能提取率低；提取時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，生產(chǎn)效率低，且多酚易氧化而受損。實(shí)驗(yàn)中，提取時(shí)間增大，石榴皮總多酚的得率也隨著增加，提取時(shí)間為40min時(shí)總多酚得率最高，但超過(guò)40min時(shí)，總多酚得率反而下降。這是因?yàn)?，超聲波?duì)細(xì)胞壁有破壞作用，在一定提取時(shí)間范圍內(nèi)，提取時(shí)間越長(zhǎng)，越有利于多酚物質(zhì)的釋放，但若提取時(shí)間超過(guò)這個(gè)范圍，浸出的多酚物質(zhì)，在溶液中被氧化，導(dǎo)致提取率降低。因此，提取時(shí)間不宜超過(guò)40mi

57、n。</p><p>　　5.1.4料液比的影響</p><p>　　料液比是影響原料中多酚提取的重要因素之一。適當(dāng)?shù)牧弦罕燃瓤墒乖现械亩喾宇?lèi)物質(zhì)得到充分提取，還可減少溶劑的消耗及回收成本。實(shí)驗(yàn)中，石榴皮總多酚提取含量隨著提取溶劑體積的增大，提取量反而呈線性下降趨勢(shì)，原因可能是其他不良物質(zhì)的溶出抑制了多酚類(lèi)物質(zhì)，使提取量反而降低。料液比的選擇應(yīng)綜合考慮有機(jī)溶劑的節(jié)省以及對(duì)石榴皮總多酚提取

58、率的影響，最終選擇1:30作為最佳料液比例。 </p><p>　　5.2 石榴皮總多酚的顯色條件分析 </p><p>　　多酚是一類(lèi)復(fù)雜的具有沉淀蛋白質(zhì)性質(zhì)的水溶性多元酚類(lèi)化合物，見(jiàn)光分解，所以本實(shí)驗(yàn)應(yīng)避光操作。多酚的經(jīng)典含量測(cè)定方法有很多種，如重量法、容量法、比色法等，最常用的有皮粉法、高錳酸鉀法、干酪素法、絡(luò)合量法。皮粉法是國(guó)際公認(rèn)的多酚含量測(cè)定方法?！吨袊?guó)藥典》一部多酚含量測(cè)定法

59、一直沿用皮粉法，由于該法專屬性不強(qiáng)，皮粉用量大，實(shí)驗(yàn)周期長(zhǎng)，已不適用于日常分析測(cè)定。通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明，采用紫外分光光度比色法，測(cè)定總多酚含量專屬性強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)周期短，測(cè)定結(jié)果穩(wěn)定，重現(xiàn)性好。如田樹(shù)革用Folin-Ciocalteu比色法測(cè)定石榴不同部位總多酚的含量[18]，其主要原理是因?yàn)閴A性條件下，多酚物質(zhì)能與加入試劑中的亞鐵離子發(fā)生反應(yīng)，生成紫藍(lán)色的絡(luò)合物，性質(zhì)比較穩(wěn)定，因此用紫外分光光計(jì)就可測(cè)得吸光度值。本實(shí)驗(yàn)選用磷鉬鎢酸法，該法較絡(luò)合滴

60、定法、高錳酸鉀法具有精密度高、重現(xiàn)性好、回收率高、操作簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，是測(cè)定石榴皮中總多酚的一種好方法。</p><p>　　5.3 最大吸收波長(zhǎng)選擇</p><p>　　取對(duì)照品溶液經(jīng)顯色處理后，以磷鉬鎢酸法所加入的顯色試劑加蒸餾水定容至25mL為空白，將待測(cè)液盛于比色皿中，置于比色池中，在200~800nm波長(zhǎng)段掃描，確定最大吸收波長(zhǎng)。結(jié)果顯示，供試品在761nm處有最大吸收，而對(duì)照

61、品在760nm處有最大吸收，與在761nm處的吸光度相差不大，故選擇760nm為測(cè)定波長(zhǎng)。</p><p>　　5.4 正交試驗(yàn)結(jié)果分析</p><p>　　極差R的結(jié)果表明，乙醇濃度、提取溫度、料液比、提取時(shí)間4因素對(duì)石榴皮總多酚提取含量的影響的顯著性為：料液比＞乙醇濃度＞提取溫度＞提取時(shí)間。石榴皮總多酚超聲提取的最優(yōu)水平搭配為A2B3C1D2，即乙醇濃度為30%，提取溫度為60℃，料液

62、比為1:30，提取時(shí)間為40min。恰當(dāng)?shù)奶崛r(shí)間和合適的提取溫度可使石榴皮總多酚的溶出率更高。 </p><p><b>　　5.5 其他</b></p><p>　　5.5.1 粉碎度的確定 </p><p>　　試驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)粉的提取效率略高于粗粉，這是因?yàn)?，粒徑減小意味著藥材完整的細(xì)胞結(jié)構(gòu)被破壞，細(xì)胞內(nèi)的有效成分更容易提取出來(lái)，但提

63、取過(guò)程中易產(chǎn)生暴沸，造成危險(xiǎn)，不利于操作。故在藥材粉碎時(shí)，要注意過(guò)篩好藥材粉末，在盡量破壞其細(xì)胞結(jié)構(gòu)，使石榴皮粒徑盡可能地小的同時(shí)，石榴皮應(yīng)該具有必要的機(jī)械結(jié)構(gòu)性能，以保證溶劑在粒子與粒子之間滲透良好，以便于操作。此外，不同一批粉碎的藥材，對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響也比較大，故在粉碎藥材時(shí)，應(yīng)盡可能的增大粉碎量，以確保藥材粉末能完成整個(gè)實(shí)驗(yàn)，從而減少誤差。</p><p>　　5.5.2 實(shí)驗(yàn)環(huán)境的影響</p>

64、<p>　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，若實(shí)驗(yàn)進(jìn)行的環(huán)境變化較大時(shí)，如晴天與陰天、潮濕與干燥的天氣，對(duì)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果影響較大。故在開(kāi)展實(shí)驗(yàn)前，應(yīng)考慮到天氣等方面的問(wèn)題，計(jì)劃好實(shí)驗(yàn)的進(jìn)程，以減少不必要的誤差。</p><p><b>　　6 結(jié)論</b></p><p>　　多酚類(lèi)化合物廣泛存在于自然界植物中，臨床應(yīng)用廣泛，為了綜合開(kāi)發(fā)利用石榴皮資源和解決環(huán)境污染問(wèn)題，本

65、實(shí)驗(yàn)建立了石榴皮中總多酚含量測(cè)定方法和對(duì)樣品進(jìn)行測(cè)定。本次實(shí)驗(yàn)測(cè)定石榴皮總多酚含量時(shí)，選用測(cè)定總多酚常用的沒(méi)食子酸作為對(duì)照品。</p><p>　　由單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)的直觀分析結(jié)果可知，從總多酚這一指標(biāo)看，因素C（料液比）的影響最大，差異性顯著，其次是A（乙醇濃度）的影響，提取時(shí)間的影響最小。石榴皮總多酚的最佳提取工藝為乙醇濃度為30%，提取溫度為60℃，料液比為1:30，提取時(shí)間為40min。本實(shí)驗(yàn)優(yōu)選出的

66、工藝簡(jiǎn)單，操作容易、方便，且穩(wěn)定性好，且超聲提取法具有耗時(shí)短、節(jié)能、提取效率高等優(yōu)點(diǎn)，作為中藥有效成分提取的新方法，具有廣闊的應(yīng)用前景，為石榴皮總多酚的進(jìn)一步研究提供了初步科學(xué)依據(jù)。 </p><p>　　石榴皮中多酚化合物不易分離，而且很容易被還原，使測(cè)定結(jié)果不精確。想要找到一種方便、實(shí)用、結(jié)果又準(zhǔn)確的測(cè)定方法，不僅要在提取分離純化上下功夫，還要加強(qiáng)對(duì)各種組成物質(zhì)基本的物理化學(xué)特性進(jìn)行更進(jìn)一步的研究。此外，石榴

67、皮總多酚的成分很復(fù)雜，僅以沒(méi)食子酸為對(duì)照品無(wú)法測(cè)定出全部的石榴皮總多酚，測(cè)定結(jié)果只是水解多酚的含量，所以對(duì)石榴皮中總多酚含量的測(cè)定還有待進(jìn)一步研究。相信隨著研究的深入,石榴皮將更好的造福于人類(lèi)。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 王愛(ài)偉，孟繁錫，劉春鴿，等．我國(guó)石榴產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀、發(fā)展對(duì)策及前景分析[J]．中國(guó)果業(yè)信息，2006，23

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76、　　綜述</b></p><p>　　石榴皮總多酚的提取研究進(jìn)展</p><p>　　石榴皮(Punicagmnate Peel)系石榴科（Punicaceae）石榴屬（Punica L.）植物石榴（Punica granatum L.）的干燥果皮。石榴皮是包裹在石榴果實(shí)外層的外皮，占石榴的20%~30%，大小不一，厚1.5~3mm，為不規(guī)則的片狀或瓢狀。外表面紅棕色、棕黃色或

77、暗棕色，略有光澤，粗糙，有多數(shù)疣狀突起，有的有突起的筒狀宿萼及粗短果?；蚬：邸?nèi)表面紅棕色或黃色，有隆起呈網(wǎng)狀的果蒂殘痕。質(zhì)硬而脆，斷面黃色，略顯顆粒狀。作為傳統(tǒng)中藥，收載于《中國(guó)藥典》。石榴皮性酸，味苦澀，有澀腸止瀉、止血、驅(qū)蟲(chóng)等功效，主要治療細(xì)菌性痢疾、阿米巴痢疾和多種感染性疾病。</p><p>　　石榴皮也是石榴加工的副產(chǎn)物，其中含有很大成分的多酚含量，在干石榴皮中大約占10%~30%左右，多酚獨(dú)特的化

78、學(xué)結(jié)構(gòu)賦予了其獨(dú)特的生理活性。多種研究表明，多酚具有抗腫瘤、抑菌及抗病毒、抗心腦血管疾病、抗氧化和延緩衰老等生理活性[1-3]。石榴皮多酚已在食品、醫(yī)藥和化妝品領(lǐng)域獲得廣泛應(yīng)用。 本文主要對(duì)石榴皮總多酚及其提取研究的國(guó)內(nèi)外研究現(xiàn)狀進(jìn)行綜述。</p><p><b>　　1 石榴皮總多酚</b></p><p>　　石榴皮總多酚是石榴皮中多酚羥基化合物的總稱，包括鞣花單

79、寧、沒(méi)食子單寧、鞣花酸、沒(méi)食子酸、兒茶素、花色素、綠原酸、阿魏酸和櫟精等多種化合物，占干重量的10%~20%，研究表明其具有抗氧化、抗衰老、抗菌、抗突變、降血壓和潤(rùn)膚美容的作用，在食品、醫(yī)藥和日用化學(xué)品等領(lǐng)域有巨大的應(yīng)用價(jià)值。</p><p><b>　　1.1 植物多酚</b></p><p>　　植物多酚（Plant Polyphenol），又稱植物單寧，最早是H

80、aslam提出的。它是一類(lèi)廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物，在維管植物中僅次于纖維素、邊纖維素、木質(zhì)素，廣泛存在于植物的皮、根、莖、葉、果中，含量可達(dá)20%。植物多酚是一類(lèi)源自于植物體內(nèi)的天然大分子化合物，人類(lèi)對(duì)其認(rèn)識(shí)和利用具有悠久的歷史，從遠(yuǎn)古時(shí)代開(kāi)始應(yīng)用于制革、治病和染色，到近現(xiàn)代大量用于石油開(kāi)采、木材加工、水污染處理、醫(yī)藥、食品、化妝品等多個(gè)領(lǐng)域。植物多酚的研究越來(lái)越受到重視，關(guān)于植物多酚的生理活性的研究是近年來(lái)多酚研究的熱點(diǎn)之一

81、。常見(jiàn)的含多酚物質(zhì)較多的植物超過(guò)600多種，我國(guó)擁有大量的多酚資源，其中石榴就是其中含多酚含量較多的植物之一，特別是在石榴皮中。隨著人們對(duì)石榴多酚的認(rèn)識(shí)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)石榴多酚的研究報(bào)道也越來(lái)越多。石榴中含有多酚類(lèi)化合物，黃酮類(lèi)化合物，生物堿，有機(jī)酸和類(lèi)雌激素成分等，而多酚類(lèi)化合物占其中主要部分。</p><p>　　多酚的種類(lèi)很多，目前已經(jīng)分離鑒定了8000多種多酚類(lèi)物質(zhì)[4]。按結(jié)構(gòu)可分為酚酸類(lèi)（phenoli

82、c acids）、類(lèi)黃酮類(lèi)（flavonoids）及1，2-二苯乙烯（stilbenes）和木酚素類(lèi)（lignans）。酚酸類(lèi)在植物中的含量十分豐富，最常見(jiàn)的是咖啡酸（caffeic acid），其它如阿魏酸（ferulic acid）、綠原酸（chlorogenic acid）等。類(lèi)黃酮又分為黃酮類(lèi)（flavones）、二氫黃酮類(lèi)（flavanones）、黃酮醇類(lèi)（flavonols）、黃烷醇類(lèi)（flavanols）、異黃酮類(lèi)（iso

83、flavonoids）、花色素類(lèi)（anthocyanidins）、原花色素類(lèi)（proanthocyanidins）。1，2-二苯乙烯類(lèi)化合物在植物中的分布并不十分廣泛，最常見(jiàn)的為白藜蘆醇，化學(xué)名為3，4，5-三羥基-1，2-二苯乙烯（3，4，5-trihydroxystlbene）。葡萄酒中含有較多的白藜蘆醇[5]。木酚素類(lèi)物質(zhì)最早在人類(lèi)的血漿和尿液中發(fā)現(xiàn)，后來(lái)在亞麻植物中發(fā)現(xiàn)。人類(lèi)營(yíng)養(yǎng)中主要的膳食木酚素來(lái)源是谷物及其他富含纖維的食物，

84、在一些谷物中木酚素含量</p><p><b>　　1.2 石榴多酚</b></p><p>　　石榴是富含多酚的水果之一，不同部位所含的多酚種類(lèi)和數(shù)量也不同。石榴中多酚的種類(lèi)主要為鞣質(zhì)類(lèi)化合物、酚酸和黃酮類(lèi)化合物等。</p><p>　　1.2.1 鞣質(zhì)類(lèi)化合物</p><p>　　鞣質(zhì)類(lèi)是石榴中最普遍的一類(lèi)酚類(lèi)物質(zhì)

85、，其中以可水解鞣質(zhì)類(lèi)為主，結(jié)構(gòu)形式多樣，在不同部位鞣質(zhì)類(lèi)化合物分布有所不同。據(jù)報(bào)道[7-8]，石榴汁中的主要鞣質(zhì)成分有沒(méi)食子酸、安石榴林和安石榴苷；石榴皮中的鞣質(zhì)含量高，主要為安石榴林和安石榴苷。除此之外，已報(bào)道的成分還有沒(méi)食子酸、沒(méi)食子酰雙內(nèi)酯、鞣花酸、鞣云實(shí)精、英國(guó)棟鞣花酸、石榴皮亭A、石榴皮亭B、木麻黃寧、特里馬素Ⅰ、二鞣花酸鼠李糖基（1-4）吡喃葡萄糖營(yíng)、5-O-galloyopunicacotein D、2，3-（S）-六羥基

86、聯(lián)苯二甲?；?D-葡萄糖等。</p><p>　　1.2.2 黃酮類(lèi)化合物</p><p>　　目前，從石榴中分離得到的黃酮類(lèi)成分主要有黃酮、黃酮醇、花色素、黃烷-3-醇類(lèi)等[9-10]。果皮和果汁中含有大量的花色素類(lèi)化合物。在果汁中含有6種花色素類(lèi)化合物，其種類(lèi)和含量隨著果實(shí)的成熟程度而發(fā)生變化。在成熟早期，以天竺癸素、矢車(chē)菊素和飛燕草素的3，5-二葡萄糖苷為主，其中飛燕草素3，5-二

87、葡萄糖苷是主要成分。隨著果實(shí)的成熟，單糖苷的含量不斷增加，最后超過(guò)二糖苷，后期的主要成分為矢車(chē)菊素衍生物。果汁中除了6種花色素類(lèi)成分外，還有蘆丁、槲皮素、兒茶素、兒茶酚、山萘素和原花青素等化合物。果皮中含有天竺葵素和矢車(chē)菊素衍生物、槲皮素、異槲皮苷、山萘素、表兒茶素和原花青素等化合物。石榴籽種皮中則含有飛燕草色素、矢車(chē)菊素的單糖苷和二糖苷、山萘素、兒茶素和表兒茶素等化合物。</p><p>　　1.2.3 酚酸類(lèi)

88、化合物</p><p>　　石榴酚酸類(lèi)化合物主要有咖啡酸、綠原酸、新綠原酸、原兒茶酸、阿魏酸、鄰-香豆酸、對(duì)-香豆酸。李建科等[11]利用高效液相色譜測(cè)得，石榴汁中含有原兒茶酸、綠原酸、阿魏酸、咖啡酸、沒(méi)食子酸等酚酸化合物。石榴皮中含有原兒茶酸、沒(méi)食子酸、綠原酸、咖啡酸等酚酸化合物。石榴籽中含有沒(méi)食子酸、綠原酸、咖啡酸、阿魏酸等酚酸化合物。</p><p>　　2石榴皮多酚提取方法<

89、/p><p>　　多酚物質(zhì)的提取方法一般有熱水提取法、溶劑提取法、堿性稀醇或堿性水提取法、超聲波輔助提取法、微波提取法、超臨界CO2流體萃取法、超高壓流體萃取法和生物酶解提取法等。在石榴多酚的提取過(guò)程中，根據(jù)不同的要求與條件，選擇適宜的提取方法將有助于提取效率的提高和提取效果的增強(qiáng)，從而獲得較高的提取率和產(chǎn)品純度，得到理想的實(shí)驗(yàn)效果，為后續(xù)實(shí)驗(yàn)創(chuàng)造有利的條件。</p><p><b>

90、;　　2.1 溶劑提取法</b></p><p>　　溶劑提取法是天然產(chǎn)物活性成分提取中廣泛采用的工藝，其原理是，根據(jù)植物中各種成分在溶劑中的溶解性質(zhì)，選用對(duì)活性成分溶解度大，對(duì)不需要溶出成分的溶解度小的溶劑，將活性成分從植物組織內(nèi)溶解出來(lái)的方法[12]。當(dāng)溶劑加入到植物原料中時(shí)，溶劑由于擴(kuò)散，滲透作用通過(guò)細(xì)胞壁透入細(xì)胞內(nèi)，溶解有效物質(zhì)，將所需成分大部分溶出[13]。一般溶劑提取法的操作步驟是將提取劑

91、加入到粉碎的石榴皮、花等組織中，在一定溫度下，浸提一定時(shí)間，過(guò)濾后得濾液，即粗產(chǎn)品。濾液可進(jìn)一步加工，如上吸附樹(shù)脂等，得到高純度的產(chǎn)品。</p><p>　　目前，多酚的浸提方法主要是有機(jī)溶劑提取法，常用的有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等，這些有機(jī)溶劑對(duì)多酚都有良好的溶解能力，不與多酚物質(zhì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，且浸出雜質(zhì)少、易于分離。選擇有機(jī)溶劑時(shí)，可以根據(jù)主體酚類(lèi)的含量、酚類(lèi)分子量進(jìn)行選擇，亦可調(diào)節(jié)溶液的pH值來(lái)控制萃取

92、物的組分。該方法在實(shí)際操作中主要考慮的因素有：提取溶劑的選擇、料液比、提取溫度、提取時(shí)間以及浸提次數(shù)等。</p><p>　　賈冬英等[14]采用體積分?jǐn)?shù)為20%的乙醇做溶劑，料液比1:20，在50℃條件下提取1h，多酚得率達(dá)22.86%，取得了很好的效果；孫蘭萍等[15]亦采用50%的乙醇作為提取溶劑，在料液比25:1，70℃條件下提取1.5h，石榴皮多酚得率達(dá)16.28%；王曉瑜等[16]通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)采用甲醇、

93、乙醇、乙酸乙酯和水分別對(duì)新疆石榴皮總多酚進(jìn)行提取，結(jié)果多酚得率是甲醇＞乙醇＞水＞乙酸乙酯。由于甲醇和乙醇作溶劑時(shí)多酚得率相差不大，并且三種溶劑中乙醇的安全性最高，價(jià)格最為低廉，來(lái)源廣，回收率高，因此選用乙醇作為提取溶劑。由此可見(jiàn)，石榴皮多酚的提取在提取溶劑的選取上，乙醇備受青睞。</p><p>　　溶劑提取法是石榴多酚非常成熟的提取工藝，具有成本低、對(duì)活性物質(zhì)選擇性強(qiáng)、易操作控制等優(yōu)點(diǎn)，在工業(yè)上獲得了廣泛應(yīng)用。

94、但存在著安全性低、耗時(shí)長(zhǎng)、提取率低和污染大等缺點(diǎn)。近年來(lái)，國(guó)家對(duì)環(huán)境污染不斷加大治理，溶劑提取法有逐漸被淘汰的趨勢(shì)。</p><p>　　2.2 微波輔助提取法</p><p>　　微波輔助提取法是利用微波能來(lái)提高提取率的一種新型、高效的提取方法。微波是頻率在0.3~300GHz之間，波長(zhǎng)在30cm和1mm之間的電磁波。物料經(jīng)微波加熱，內(nèi)部溫度升高、壓力增大，當(dāng)壓力達(dá)到一定程度時(shí)，原料物細(xì)

95、胞發(fā)生破裂，細(xì)胞內(nèi)的欲提取物質(zhì)溶入提取溶劑中；再者，微波產(chǎn)生的電磁志加速了被萃取成分由物料內(nèi)部向萃取溶劑界面的擴(kuò)散速率，從而縮短了萃取時(shí)間[17-18]。一般工藝流程是將乙醇加入原料中，再置于微波反應(yīng)裝置中處理，最后過(guò)濾即得產(chǎn)品。微波提取的影響因素主要包括溶媒、微波輻射劑量、功率和提取時(shí)間等。</p><p>　　王玲等[19]通過(guò)單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)確定微波輔助法提取石榴皮多酚的最佳提取工藝條件為：提取功率為3

96、85W，料液比為1:25（W/V），提取時(shí)間為120s，提取次數(shù)為3次。在此條件下，石榴皮多酚得率最高達(dá)21.4%。李志洲等[20]利用響應(yīng)面法優(yōu)化提取石榴皮中多酚類(lèi)物質(zhì)的提取工藝條件，采用微波輔助提取石榴皮多酚時(shí)發(fā)現(xiàn)，以80%乙醇為提取溶劑，在微波功率300W、料液比1:8.6（g·mL-1）時(shí)，粒度40目下僅僅用微波處理了49s所得多酚收率0.84 mg·g-1。宋薇薇等[21]在最佳實(shí)驗(yàn)條件下：乙醇濃度為40%

97、、提取功率為242W、提取時(shí)間為60s、料液比為1:35時(shí)，提取3次粗提取物多酚含量為19.548g/100g；劉洪等[22]采用微波提取法對(duì)四川會(huì)理石榴皮中的多酚進(jìn)行提取，通過(guò)正交試驗(yàn)確定的最佳提取工藝：30%乙醇溶液，料液比1:20，提取功率300W，提取溫度60℃，提取時(shí)間100s，提取3次多酚得率達(dá)26.91%。各因素對(duì)石榴皮多酚得率的影響由大到小依次為提取功率＞提取溫度＞提取時(shí)間＞提取次數(shù)。</p><p&

98、gt;　　由此可看出，由于微波產(chǎn)生的電磁波加速了被分離物質(zhì)向萃取溶劑界面的擴(kuò)散速率，從而大大的縮短了萃取時(shí)間，另外微波輔助提取法還具有高效性、強(qiáng)選擇性、操作簡(jiǎn)便、多酚得率較高、副產(chǎn)物較少、產(chǎn)物易于純化等優(yōu)點(diǎn)，為提取工藝的綜合研究找到了一條新途徑。但提取溫度高，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，功率過(guò)大都會(huì)導(dǎo)致多酚類(lèi)物質(zhì)受熱破壞，反而對(duì)提取不利。所以微波提取石榴多酚應(yīng)嚴(yán)格控制微波功率及微波時(shí)間，這點(diǎn)在一定程度上影響了其廣泛應(yīng)用，這將是今后科研工作者亟待解決的問(wèn)題

99、。</p><p>　　2.3 超聲波輔助提取法</p><p>　　超聲波是一種高頻機(jī)械波，頻率范圍為15~60kHz，一般高于20kHz。超聲波輔助法是利用超聲波使植物組織在溶劑中瞬時(shí)產(chǎn)生空穴效應(yīng)，讓其細(xì)胞破裂，從而溶劑滲透到植物細(xì)胞內(nèi)部，溶解其活性成分。超聲提取多酚工藝過(guò)程即將乙醇加入石榴粉中，再置于超聲波裝置中處理，最后過(guò)濾即得產(chǎn)品。超聲波輔助提取具有提取效率高、不破壞有效成分、可

100、防止提取物在長(zhǎng)時(shí)間高溫或空氣暴露條件下發(fā)生降解或褪色等變化的特點(diǎn)，目前已廣泛用于提取生物堿等生物活性成分。超聲波輔助提取法主要影響因素包括超聲波頻率、強(qiáng)度、作用時(shí)間和溫度等。</p><p>　　以新疆石榴皮為原料，采用二次通用旋轉(zhuǎn)回歸組合設(shè)計(jì)對(duì)超聲波輔助提取石榴皮多酚工藝進(jìn)行研究表明，最佳提取工藝條件為乙醇濃度50%，料液比1:25，超聲時(shí)間30min，超聲波功率360W。在此條件下，石榴皮多酚得率達(dá)到21.2

101、2%±0.06%[23]。趙艷紅等[24]通過(guò)響應(yīng)曲面法優(yōu)化超聲波提取石榴皮多酚，探討了在該最佳提取條件下石榴皮多酚得率與二次提取時(shí)間的關(guān)系，還對(duì)搖床振蕩提取和超聲波輔助提取進(jìn)行了比較，超聲波提取不需要加熱，總提取時(shí)間僅為35min，為搖床振蕩提取時(shí)間的1/7。得到了可供工業(yè)化生產(chǎn)參考的最佳提取條件：乙醇體積分?jǐn)?shù)為59%，超聲時(shí)間（第1次26min，第二次10min），超聲功率90W（超聲強(qiáng)度為0.2W/cm），提取量達(dá)321

102、.26 mg·g-1；焦士蓉等[25]通過(guò)正交試驗(yàn)，在以溶劑為40%乙醇、料液比為1:30、提取時(shí)間為30min、提取溫度為60℃的最佳提取工藝條件下提取3次。按此最佳條件提取石榴皮多酚，其提取率為25.45%。陳紅梅等[26]以超聲波輔助提取法得到多酚最佳提取工藝條件為：超聲波功率為180W，提取溫度為70℃，液固比為15:1（mg·mL-1），</p><p>　　2.4 超臨界流體萃取

103、法</p><p>　　超臨界流體萃取分離是指以超臨界流體作萃取劑，利用兼有流體和氣體雙重性質(zhì)的特點(diǎn)，通過(guò)控制壓力和溫度影響超臨界流體溶解能力而進(jìn)行選擇性萃取和分離的新技術(shù)。在超臨界狀態(tài)下，將超臨界流體與待分離的物質(zhì)接觸，使其有選擇性地把極性大小、沸點(diǎn)高低和分子量大小的成分依次萃取出來(lái)。目前，人們較多選用元素的CO2作為超臨界流體，超臨界CO2萃取技術(shù)是近代化工分離中出現(xiàn)的高新技術(shù)，將傳統(tǒng)的蒸餾和有機(jī)溶劑萃取結(jié)合

104、一體，具有類(lèi)似氣體的穿透力和類(lèi)似于液體的較大密謀和溶解度，具有良好的溶劑特性，可作為溶劑進(jìn)行萃取、分離單體，同時(shí)具有安全、衛(wèi)生、高品質(zhì)、高效率、可以在常溫下運(yùn)行的特點(diǎn)，特別適合對(duì)揮發(fā)性和熱敏性物質(zhì)的提取，并能保證提取物的“純天然性”。該方法考慮的主要因素有萃取溫度、時(shí)間和壓力，為了提高萃取能力，常加入適當(dāng)?shù)姆菢O性或極性溶劑，即夾帶劑（亦稱改性劑），增強(qiáng)溶質(zhì)在其中的溶解度和選擇性。</p><p>　　于基成等[2

105、8]通過(guò)單因素條件的選擇以及正交試驗(yàn)的優(yōu)化，采用超臨界CO2萃取技術(shù)提取綠茶中茶多酚的最優(yōu)條件為溫度60℃、壓力25MPa、萃取時(shí)間1h，茶多酚的萃取率為43.68%。從實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)我們可以看出其多酚提取率較為可觀。姜萍等[29]采用超臨界CO2萃取，得到萃取條件為：溫度44℃，壓力25MPa，乙酸乙酯為夾帶劑，萃取時(shí)間120min，得率能到57.83%。馮務(wù)群等[30]用超臨界CO2萃取、超聲提取、微波提取及浸漬提取等方法提取石榴皮中的沒(méi)

106、食子酸并用HPLC法測(cè)定其含量。結(jié)果表明：4種方法提取所得沒(méi)食子酸的含量分別是0.396%、0.311%、0.271%和0.498%。可見(jiàn)以超臨界CO2萃取法提取石榴皮中的沒(méi)食子酸是一種提取效率較高的提取方法。</p><p>　　雖然超臨界流體萃取技術(shù)具有操作簡(jiǎn)單、高效、快速、易控、無(wú)污染等特點(diǎn)。但也存在自身無(wú)法克服的缺點(diǎn)，如生產(chǎn)成本大、設(shè)備投資高等；此外，它在實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)已經(jīng)比較成熟，但用于工業(yè)化生產(chǎn)，即產(chǎn)業(yè)

107、化生產(chǎn)有一定困難，尚需更深入的研究，以拓展其更廣泛的應(yīng)用。</p><p>　　2.5 超高壓流體萃取法</p><p>　　超高壓流體萃取是一種近幾年發(fā)展起來(lái)的新型提取技術(shù)，研究表明，在天然產(chǎn)物的提取中應(yīng)用它可大大縮短提取時(shí)間，減少雜質(zhì)溶出，提高有效成分的收率，避免因熱效應(yīng)引起變化，并且不會(huì)對(duì)環(huán)境造成污染。超高壓提取技術(shù)步驟即稱取一定量石榴皮粉末放入鋁箔復(fù)合袋中，加入一定量的乙醇提取劑

108、，將袋子放入高壓設(shè)備中，保壓一段時(shí)間后，得石榴皮提取液。</p><p>　　嚴(yán)隴兵等[31]以提取石榴皮多酚為目的，以總酚得率為最終指標(biāo)，在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，采用二次回歸正交旋轉(zhuǎn)組合試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化超高壓提取工藝參數(shù)。試驗(yàn)結(jié)果表明，最佳提取工藝條件為提取壓力582.7MPa，保壓時(shí)間2.3min，料液比1:41，乙醇體積分?jǐn)?shù)52.8%。在此條件下多酚提取得率超過(guò)26%，大大減小了石榴皮多酚變性的可能。</p