油菜（Brassica napus L）矮稈突變相關(guān)基因的RAPD標(biāo)記與其序列特異擴(kuò)增片段的分析.pdf

1、該文采用該矮稈突變的純合品系DDF-1及高稈親本3529為材料,用50個10-mer隨機(jī)引物對高矮植株親本進(jìn)行RAPD擴(kuò)增,選出了7個在高、矮親本植株間產(chǎn)生特異多態(tài)性擴(kuò)增的引物,作為突變相關(guān)基因位點(diǎn)的特異分子標(biāo)記.在F<,2>代的矮稈純合體植株中利用這7個特異分子標(biāo)記的隨機(jī)引物擴(kuò)增并進(jìn)行連鎖檢驗(yàn),從中篩選到4個與矮稈基因突變位點(diǎn)有緊密連鎖的特異分子標(biāo)記,根據(jù)這些標(biāo)記的長度將它們分別命名為S5<,910>、S12<,610>、S29<,3

2、90>、S47<,720>,并計(jì)算了這4個特異分子標(biāo)記與此突變位點(diǎn)的連鎖圖距,分別為S5<,910>:16.6cM,S12<,610>:0.0cM,S29<,390>:16.6cM、S47<,720>:5.0cM.為了對矮稈突變相關(guān)基因進(jìn)行定位,從4個RAPD分子標(biāo)記中選出2個F<,2>代中重組率最低的標(biāo)記S12<,610>和S47<,720>,這兩個RAPD分子標(biāo)記與矮稈突變位點(diǎn)連鎖最為緊密,其中S12<,610>可能就位于這個與植株

3、高度相關(guān)的基因中.再將這兩個標(biāo)記對回交世代的總DNA和一些其他品種的高稈油菜的總DNA進(jìn)行擴(kuò)增,確認(rèn)了這兩個RAPD標(biāo)記的真實(shí)性.將這兩個RAPD標(biāo)記進(jìn)行測序,得到其序列,其大小分別為S12<,610>:662bp和S47<,720>:680bp.研究了該序列特異擴(kuò)增片段的特征并根據(jù)這個序列建立了2組SCAR標(biāo)記.根據(jù)SCAR標(biāo)記擴(kuò)增的結(jié)果,沒有能產(chǎn)生差異的條帶,我們推測這種矮稈植株突變是點(diǎn)突變,并且點(diǎn)突變的位置在原RAPD引物的序列上