南方紅豆杉DNA指紋圖譜技術(shù)研究.pdf

1、南方紅豆杉是我國第三紀(jì)孑遺特有樹種，為國家一級瀕危珍貴保護(hù)樹種。福建省是我國南方紅豆杉資源較為豐富且分布集中的地區(qū)。本研究通過RAPD分子標(biāo)記技術(shù)和ISSR分子標(biāo)記技術(shù)的方法，對福建省內(nèi)23個種源地的南方紅豆杉的遺傳多樣性進(jìn)行了系統(tǒng)分析，主要研究結(jié)果如下： 1、試驗(yàn)采用杭州博日公司Biospin植物基因組DNA提取試劑盒法略作調(diào)整進(jìn)行樣品DNA提取，獲得純度和完整性較好的樣品DNA，比較分析試劑盒提取法與傳統(tǒng)DNA提取方法的優(yōu)缺

2、點(diǎn)，旨在確立一種簡單、實(shí)際可行的DNA提取方法。 2、優(yōu)化建立了南方紅豆杉RAPD-PCR擴(kuò)增技術(shù)體系和ISSR-PCR擴(kuò)增技術(shù)體系。篩選出擴(kuò)增反應(yīng)中各要素的最佳反應(yīng)濃度，試驗(yàn)所用引物的最適退火溫度，以及擴(kuò)增程序中的循環(huán)次數(shù)和各程度最佳溫度。 3、運(yùn)用RAPD標(biāo)記對23個種源的南方紅豆杉遺傳多樣性進(jìn)行研究，篩選出的13個引物擴(kuò)增出147條清晰帶，其中多態(tài)性帶136條，多態(tài)性條帶比率為92.52％，每個引物擴(kuò)增的多態(tài)帶數(shù)為

3、11.3條，材料間Shannon多樣性指數(shù)在0.1821～0.3296間，平均值為0.2134，表明南方紅豆杉具有較高的遺傳多樣性。聚類分析可將23個神源南方紅豆杉材料分為4大類，呈現(xiàn)出一定的地域性分布規(guī)律，但未表明其遺傳變異與地理環(huán)境的影響有較為密切的聯(lián)系。分析同時表明RAPD仍然可應(yīng)用于南方紅豆杉等遺傳多樣性研究水平較淺的物種或?qū)嶒?yàn)精度要求不太高的分子遺傳標(biāo)記研究。 4、ISSR標(biāo)記使用12條引物對23個種源的南方紅豆杉進(jìn)行

4、遺傳多樣性分析，共擴(kuò)增出145條清晰帶，其中多態(tài)性帶140條，平均每個引物擴(kuò)增的多態(tài)帶數(shù)為12.1條，96.55％的多態(tài)性條帶比率高于目前已報(bào)道的其它作物。遺傳相似性分析發(fā)現(xiàn)南方紅豆杉種源遺傳多樣性較為豐富。聚類分析能將所有材料聚為4類，表明供試南方紅豆杉材料呈現(xiàn)出地域性分布規(guī)律。分析表明ISSR穩(wěn)定便捷且不需要預(yù)先掌握研究物種相關(guān)基因組信息就可以開展，不僅適合遺傳多樣性研究，還可用于快速準(zhǔn)確的對物種開展品種鑒定。 5、較豐富的