豬肝臟糖異生的品種特點及其糖皮質(zhì)激素的作用.pdf

1、本實驗以血漿皮質(zhì)醇水平差異顯著的二花臉豬和皮特蘭豬為模型，描述肝臟糖異生功能相關(guān)的生理生化指標(biāo)及肝臟糖異生途徑關(guān)鍵酶表達(dá)的品種特點，并分析與肝臟糖皮質(zhì)激素受體(Glucocorticoid receptor，GR)和11β-類固醇羥基脫氫酶1(11β-Hydroxysteroid dehydrogenase type1，11β-HSD1)表達(dá)的關(guān)系，以闡述糖皮質(zhì)激素在調(diào)控肝臟糖異生中的作用，并進(jìn)一步檢測肝臟GR基因表達(dá)的品種差異是否與肝

2、臟GR基因5'-非翻譯區(qū)甲基化的狀況有關(guān)。 1.血液及肝臟生化指標(biāo)的品種差異 二花臉豬肝糖原極顯著低于皮特蘭豬(P<0.01)；肝臟葡萄糖含量在品種間無顯著差異。二花臉豬血液乳酸顯著低于皮特蘭豬(P<0.05)，肝臟乳酸極顯著高于皮特蘭豬(P<0.01)。以上結(jié)果提示：二花臉豬乳酸代謝的能力可能高于皮特蘭豬。 2.豬肝臟糖異生關(guān)鍵酶基因表達(dá)品種差異 用相對定量REAL-TIME RT-PCR方法比較兩品種

3、豬肝臟糖異生關(guān)鍵酶基因mRNA的表達(dá).結(jié)果表明：二花臉豬丙酮酸羧化酶(Pyruvate carboxylase，PC)mRNA表達(dá)極顯著高于皮特蘭豬(P<0.01)；品種間胞質(zhì)磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Cytosolphosphoenolpyruvate carboxykinase，PEPCK-C) mRNA表達(dá)無顯著差異，而二花臉豬線粒體磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(Mitochondria phosphoenolpyruvate carbo

4、xykinase，PEPCK-M) mRNA表達(dá)顯著高于皮特蘭豬(P<0.05)。二花臉豬果糖-1，6-二磷酸酶(Fructose-1，6-bisphosphatase，F(xiàn)BPase) mRNA表達(dá)顯著高于皮特蘭豬(P<0.05)。葡萄糖-6-磷酸酶(Glucose-6-phosphatase，G-6-P) mRNA表達(dá)無品種間差異。以上結(jié)果提示：二花臉可能因PC，F(xiàn)BPase mRNA的高表達(dá)而有較強(qiáng)的糖異生能力.而乳酸是糖異生的主要

5、原料之一，提示肝糖異生途徑的增強(qiáng)可能是二花臉豬乳酸代謝能力強(qiáng)的原因之一。 3.豬肝臟皮質(zhì)醇含量的品種差異 為檢測血漿高水平的皮質(zhì)醇水平是否也導(dǎo)致肝臟皮質(zhì)醇水平較高，實驗采用二氯甲烷提取肝臟勻漿后放免測定肝臟皮質(zhì)醇含量。結(jié)果表明：兩品種豬肝臟皮質(zhì)醇含量無顯著差異。以上結(jié)果提示：可能是GR而非局部組織皮質(zhì)醇升高導(dǎo)致了肝臟糖異生關(guān)鍵酶表達(dá)的上升。 4.豬肝臟GR及11β-HSD1基因表達(dá)的品種差異 用相對定量R

6、EAL-TIME RT-PCR方法比較兩品種豬肝臟GR、11β-HSD1 mRNA表達(dá)，結(jié)果表明：二花臉豬GR及11β-HSD1 mRNA表達(dá)均顯著高于皮特蘭豬(P<0.05)。表明二花臉豬糖皮質(zhì)激素對肝臟的作用較強(qiáng)，可能是其肝臟糖異生關(guān)鍵酶表達(dá)升高的原因之一。 5.豬肝臟GR5'-UTR甲基化的品種差異 采用亞硫酸氫鹽測序法檢測GR5'-UTR區(qū)域DNA甲基化水平。結(jié)果表明：GR5'-UTR區(qū)域甲基化水平無顯著差異。以