花燭玻璃化超低溫保存及相關生理生化和組織學特征.pdf

1、花燭（Anthurium andraeanum Lind.）又名紅掌，安祖花，為天南星科（Araceae）花燭屬（Anthurium）多年生常綠草本植物。因其獨特的花型、艷麗的花色、周年開花而成為備受人們喜愛的花卉，具有較高的觀賞價值和經濟價值。目前，花燭品種越來越多，與之配套的種質資源保存技術相對薄弱，傳統(tǒng)的花燭種質資源保存需要大量的人力、物力及土地。因此適宜而且有效的花燭種質資源保存方法對于花燭生產及新品種的選育越來越重要。

2、　　 本試驗在現(xiàn)有花燭離體培養(yǎng)技術的基礎上，著重對花燭胚性懸浮細胞系玻璃化超低溫保存條件進行了研究，同時探討了該方法在其它類型材料（花燭莖尖，花燭普通型愈傷組織）上的適用性，初步建立了適宜花燭的玻璃化超低溫保存方法，為花燭種質資源的長期保存提供了參考。試驗主要研究結果如下：
　　 1.以花燭品種‘Amigo’為試驗材料，研究了花燭胚性懸浮細胞玻璃化超低溫保存條件。結果表明：山梨醇濃度和預培養(yǎng)時間、細胞生理狀態(tài)、裝載液類型及時間

3、、玻璃化溶液處理時間、化凍溫度對花燭胚性懸浮細胞存活率均有較大影響?；T胚性懸浮細胞玻璃化超低溫保存最佳條件為：繼代培養(yǎng)3～5 d、直徑為1～2mm的花燭胚性懸浮細胞在含0.5 mol/L山梨醇的1/2 MS培養(yǎng)基中懸浮培養(yǎng)2d，4℃低溫處理24h，經25％PVS2預處理15-min，100％PVS20℃脫水10 min，液氮凍存后40℃水浴化凍3 min，含1.2 mol/L蔗糖的1/2 MS培養(yǎng)基洗滌3次，每次10 min，恢復培養(yǎng)

4、5 d后TTC法測定存活率可達32.1％。將此方法用于花燭‘Amigo’的莖尖和非胚性愈傷組織，存活率大幅度下降，莖尖無法存活。對花燭胚性懸浮細胞玻璃化超低溫保存進行優(yōu)化，采用濃度為3％的海藻酸鈉和0.1mol/L的CaCl2將胚性懸浮細胞包埋成4mm左右大小的包埋丸，進行包埋玻璃化超低溫保存，保存效果較胚型細胞直接進行玻璃化保存效果差。
　　 2.以花燭品種‘Amigo’胚性細胞為材料，研究了玻璃化超低溫保存過程中預培養(yǎng)處理對

5、其生理生化的影響，對山梨醇誘導花燭胚性懸浮細胞抗凍性的生理機制進行了初步分析。結果表明：花燭胚性懸浮細胞經山梨醇預培養(yǎng)處理后，隨著山梨醇濃度的升高，含水量持續(xù)下降，可溶性糖含量呈上升趨勢，可溶性蛋白含量先上升后下降，抗氧活酶（SOD、CAT、POD）活性大幅度提高。且隨山梨醇預培養(yǎng)時間的增長，含水量下降，可溶性糖、可溶性蛋白含量顯著高于對照，均呈先上升后下降的趨勢，抗氧化酶（SOD、CAT、POD）活性也逐漸提高。分析認為預培養(yǎng)是影響玻

6、璃化超低溫保存存活率的關鍵因素，提高了材料抵抗低溫的能力。
　　 3.以花燭胚性細胞玻璃化超低溫各處理階段的材料為研究對象，利用石蠟切片技術，對玻璃化超低溫保存各處理后的胚性細胞進行組織學上的觀察。結果表明：材料經玻璃化超低溫各程序處理后，材料組織結構與對照相比發(fā)生了變化。玻璃化溶液脫水、冷凍與化凍過程對花燭胚性細胞造成嚴重的傷害，尤其是冷凍與化凍環(huán)節(jié)。而預培養(yǎng)過程可以有效降低細胞受損害程度，此外，玻璃化溶液處理之前的預處理可以