2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題（含答案詳解+作文范文）_第1頁
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1、在保證原有基因氨基酸序列不變的基礎(chǔ)上，根據(jù)水稻密碼子的偏好性及使用頻率，優(yōu)化、改造crylCa基因，提高6C含量，去除影響mRNA結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定因素的序列，在crylCa基因前后增加有利于在植物中表達的前導(dǎo)序列和終止識別序列，以BamHI酶切位點添加于基因的兩端等，最終合成全長為1912bp基因序列。
　　 構(gòu)建crylCa基因的原核表達載體PET-28bca，通過IPTG誘導(dǎo)進行大腸桿菌融合蛋白表達和包涵體純化，利用融合蛋白帶有6

2、個組氨酸標簽的特點采用金屬Ni離子螯和親和層析對變性溶解的融合蛋白進行純化獲得大小為67KDa的目的蛋白。經(jīng)復(fù)性后免疫新西蘭大白兔，獲得高特異性且效價為1:10000的多克隆抗體。
　　 構(gòu)建crylCa基因的雙T-DNA植物表達載體pCDMARCA，農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化水稻秈稻明恢86，經(jīng)Southern blot雜交分析表明crylCa基因已整合入水稻染色體基因組，ELISA的結(jié)果也表明目的基因已在水稻葉片中表達，表達量占葉片總可溶性

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